用高效液相色谱法（HPLC）测定棉籽蛋白中的游离和总棉酚

作者研究建立了一种棉籽蛋白中游离和总棉酚的ＨＰＬＣ测定方法。样品用混合溶剂（９５％乙醇：水：乙醚：冰乙酸，７１．５：２８．５：２０：０．２，ｖ／ｖ）室温 萃取３０ｍｉｎ后，过滤。用μＢｏｎｄａｐａｋＣ１８色谱柱、流动相（甲醇：水：乙腈：磷酸，８０：ｌ５：５：０．２，ｖ／ｖ）流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、ＵＶ－２５４ｎｍ检测等色谱条件分离测定游离棉酚（ＦＧＰ），对于总棉酚（ＴＧＰ），在０．ｌｍｏｌ／Ｌ草酸溶液中（丁酮：水，５５．３：５，ｖ／ｖ作溶剂），于７８℃水解６ｈ，过滤，再与ＦＧＰ同样方法测定。在此条件下棉酚能与其它类棉酚色素较好地分离。ＨＰＬＣ定量测定的回收率为９８．９８％（ｎ＝６），变异系数３．２６％。实验结果表明，本方法具有样品用量少、操作简便、迅速、专属性强、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠的特点。

HPLC法测定棉籽饼粕饲料中的游离棉酚

研究了高效液相色谱法（HPLC）测定棉籽饼粕中游离棉酚的方法。丙酮浸提提取游离棉酚,经微孔滤膜过滤,HPLC检测含量。最佳色谱条件：色谱柱Sepax sapphire C185μm 120A（。250 mm×4.6 mm）;检测器为紫外检测器;检测波长,238 nm;柱温25℃;流动相为乙腈/水（含10 mmol/L KH2PO4）=80/20（V/V）;流速1 mL/min。棉酚的最低检出浓度为0.94 mg/kg,平均回收率在96.23%~99.36%之间,相对标准偏差在3.24%~4.02%之间。与传统化学方法相比,高效液相色谱法,快速简便,结果准确,重现性好。

HPLC测定棉籽粕中游离棉酚含量

建立了棉籽粕中游离棉酚（ FG ）的高效液相色谱法（ HPLC ）测定。结果表明, HPLC测定FG的最佳色谱条件为：流动相V（甲醇＋0.2%磷酸）∶V（V（乙腈）∶V（水）=1∶3）=85∶15（分别使用2个进样器）,柱压16.2 MPa,柱温25℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,Waters XTerra？ MS C18不锈钢色谱柱（250 mm ＆#215;4.6 mm,5μm）,UV检测波长235.5 nm。在最佳条件下,能更好地检测棉籽粕中的游离棉酚,棉酚标准溶液的质量浓度与其峰面积呈正相关,相关系数为0.9999,在0.15-5μg/mL之间呈良好线性关系,平均回收率在95.67%-98.99%之间,相对标准偏差在1.28%-2.03%之间。

HPLC测定棉籽粕中游离棉酚含量的前处理方法研究

研究了高效液相色谱法(HPLC)测定棉籽粕中游离棉酚含量的前处理方法。利用70%丙酮水溶液超声辅助提取棉籽粕中的游离棉酚,采用HPLC测定其含量,系统考察了提取条件对游离棉酚含量测定的影响。优化后的前处理条件为:液料比26∶1,超声60 min,提取1次。在此条件下,测定结果稳定性佳(RSD=2.06%),重复性好(RSD=1.62%),加标回收率在97.89%～101.17%之间。该方法可用于棉籽粕中游离棉酚含量的测定。

HPLC法测定食用棉籽蛋白中棉酚含量

目的 :用HPLC法测定棉籽蛋白中总棉酚 (TGP)与游离棉酚 (FGP)含量。方法 :将棉籽蛋白中结合棉酚(UGP)水解 ,提取TGP ,以丙酮浸提棉籽蛋白 ,浓缩FGP后 ,以HPLC法测定含量。结果 :两种蛋白粉中总棉酚的含量为 :0 .4 6 6 3% (RSD =2 .3% ,n =3)和 1.0 5 3% (RSD =4 .7% ,n =3)。两种蛋白粉中游离棉酚含量 (mg·kg-1)分别为 :39.4 1(RSD =2 .4 % ,n =3)、6 .340 (RSD =2 .9% ,n =3) ,回收率为 95 .30 %～ 10 1.7%。结论

棉籽蛋白的营养价值及其在动物饲料中的应用研究进展

由于畜禽水产养殖业的快速发展,优质饲料蛋白面临需求量快速增加、原料价格上涨和品质参差不齐等问题,寻找优质的替代蛋白成为解决问题的关键。棉籽蛋白作为一种优质蛋白在动物饲料中广泛使用,蛋白质含量可以达到40%以上,资源丰富且价格低廉,但其存在的抗营养因子限制了其在生产中的应用。随着棉籽蛋白生产工艺的不断发展,通过合理有效的科学技术手段去除棉籽蛋白的抗营养因子并进一步优化其营养组成,其营养价值和适口性不断提高。合理利用棉籽蛋白能在保证动物生长性能的同时可以大幅降低动物饲料成本,但关于棉籽蛋白在不同养殖动物和生长阶段的适宜添加量和添加形式,对动物吸收、代谢、生理功能的影响及作用机制研究尚未明确。作者阐述了棉籽蛋白的营养价值、生产工艺、替代饲料蛋白源的研究现状以及影响棉籽蛋白利用价值的因素,为棉籽蛋白的合理使用和进一步提高棉籽蛋白利用价值提供参考。

混菌发酵对提高棉籽粕蛋白和降低游离棉酚的影响

为了降低棉籽粕中游离棉酚的含量,提高棉籽蛋白品质,本研究采用两阶段发酵法对棉籽粕进行处理,即先添加屎肠球菌(Enterococcus faecalis,E),再添加米曲霉(Aspergillus oryzae,M1)进行分段发酵,通过单因素实验和正交试验优化混菌发酵工艺条件。结果表明,当屎肠球菌接种量1.5%、发酵温度37℃、发酵时间24 h、米曲霉接种量1.5%、发酵温度30℃、发酵时间96 h、棉粕物料初始水分50%时,棉籽粕的粗蛋白含量从39.6%提高到49.64%,酸溶蛋白含量从4.79%提高到36.58%,游离棉酚的含量从1370 mg/kg降低至45.32 mg/kg,其降解率达到了96.7%,研究结果为棉粕的高值化利用提供了科学依据。

高蛋白脱酚棉籽粕制取工艺研究

为了满足市场需求,提升棉籽粕利用价值,结合实际生产情况,采用单因素控制变量法,调整生产工艺中关键控制参数如原料棉仁中的含壳率、甲醇溶液萃取工艺参数以及成品粉碎筛分条件等,确定了分别以含壳率为2%和5%的棉仁为原料的高蛋白脱酚棉籽粕生产工艺。当原料含壳率为2%时,适宜的萃取工艺为浸泡萃取,料液比1∶3,浸泡萃取脱酚时间30 min,甲醇溶液萃取梯度60%-70%-80%-90%,共萃取4次,残油控制在0.7%以下,蒸脱烘干控制水分在5%以下。原料含壳率为5%时,适宜的萃取工艺为淋液萃取,料液比1∶2,甲醇溶液萃取梯度70%-70%-70%-70%-80%-90%,共萃取6次,残油控制在0.7%以下,蒸脱烘干控制水分在5%以下。采用上述两种方法,可得到粗蛋白质含量在70%以上、游离棉酚含量满足企业内控指标要求(≤400mg/kg)的脱酚棉籽粕。

食用棉籽蛋白中总棉酚与游离棉酚含量测定

采用间苯三酚比色法测定食用棉籽蛋白中总棉酚(TGP)与游离棉酚(FGP)含量时,将棉籽蛋白中结合棉酚(UGP)水解,提取后测定TGP。以丙酮浸提棉籽蛋白,浓缩后测定FGP,同时以HPLC法对照。测得值结果表明:棉籽蛋白总棉酚测定准确简便,间苯三酚比色法可灵敏准确定量FGP,并与HPLC法结果一致。

棉籽油中游离棉酚的反相高效液相色谱测定

采用丙酮提取棉籽油中的游离棉酚,并利用反相高效液相色谱法测定其含量。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-1%磷酸溶液(体积比85∶15),流速1.0 mL/min,检测波长236 nm,柱温25℃。所得游离棉酚的保留时间为13.3 min,平均加标回收率为97.22%～100.32%(RSD为0.62%～1.87%),精密度达到0.21%。该方法能简便、快速、准确地测定棉籽油中游离棉酚含量。

蒸汽爆破技术对棉籽粕中游离棉酚脱毒效果研究

本试验旨在研究蒸汽爆破技术对棉籽粕中游离棉酚的脱毒效果。采用市售棉籽粕,对其进行7种不同的蒸汽爆破处理,蒸汽压强均固定为2.0 MPa,以水料比为0时进行维压30 s的蒸汽爆破处理为对照,水料比为30%、50%时分别进行维压10、20、30 s的爆破处理,每处理重复3次,以游离棉酚含量、蛋白质溶解度为指标,筛选出较佳的处理测定氨基酸含量和营养物质猪仿生消化率数据。结果表明:固定蒸汽压强时,游离棉酚的脱毒率与蛋白质溶解度随着蒸汽维压时间延长而增加,随着水料比的增加先增大后减少。以游离棉酚的脱毒效果与蛋白质溶解度为指标,筛选出的适宜蒸汽爆破处理为蒸汽压强2.0 MPa,水料比30%,维压时间30 s。此时棉籽粕中游离棉酚含量达85.0 mg/kg,脱毒率达87.0%,蛋白质溶解度为42.3%。与对照组相比,蒸汽爆破可极显著降低棉籽粕中赖氨酸含量和精氨酸含量(P<0.01),对体外干物质消化率和总能消化率无显著影响(P>0.05),极显著降低体外粗蛋白质消化率和赖氨酸消化率(P<0.01)。由此可见,蒸汽爆破处理可降低棉籽粕游离棉酚含量、蛋白质溶解度、赖氨酸含量、精氨酸含量、体外粗蛋白质消化率和赖氨酸消化率。筛选出的适宜蒸汽爆破处理为蒸汽压强2.0 MPa,水料比30%,维压时间30 s。

棉籽粕固态发酵过程及其动力学模型构建

为了研究枯草芽孢杆菌Bs-1在工业化条件下发酵棉籽粕的过程,该文采用槽式发酵方式,测定了发酵过程中物料堆温、含水率、粗蛋白、酸溶性蛋白和游离棉酚质量分数;并采用Logistic方程建立芽孢杆菌Bs-1生长模型,在其与粗蛋白、酸溶性蛋白和游离棉酚质量分数相关性分析的基础上,构建了固态发酵动力学模型并进行了发酵成本分析。结果表明:棉籽粕槽式发酵过程中的温度和含水率均呈现一定的变化规律;粗蛋白质量分数、酸溶性蛋白质量分数分别较发酵前提高了9.28%和46.51%,游离棉酚质量分数降低了42.31%。Bs-1的生长与粗蛋白质量分数(R2=0.831)和酸溶性蛋白质量分数(R2=0.867)呈正相关,与游离棉酚质量分数(R2=0.976)呈负相关;建立了棉籽粕固态发酵动力学模型。分析表明,该模型计算值与试验值能较好吻合,且发酵成本低。表明该模型可应用于工业化生产,对实现发酵棉籽粕的产业化生产,具有较好的参考价值。

热带假丝酵母发酵对底物中棉酚含量的影响

研究了热带假丝酵母(ZD-3)对棉籽饼、棉籽饼混合底物进行熟料和生料发酵,根据发酵产物中总棉酚、游离棉酚和结合棉酚含量的变化,探讨微生物发酵脱毒机理。结果表明:棉籽饼及其混合底物经热带假丝酵母发酵处理,可显著降低游离棉酚及结合棉酚含量;棉籽饼混合底物加热处理(熟料发酵)及添加硫酸亚铁,可显著提高发酵脱毒效率。

绵籽饼脱毒方法研究进展

棉籽饼含有丰富的蛋白质，同时含有对畜禽有毒害的游离棉酚，研究适宜的工业化生产方法脱除或钝化棉籽饼粕中的游离棉酚，使之变成优质蛋白饲料，对促进饲料工业的发展具有重大的现实意义。本文介绍了化学法、物理法、微生物法、复合法、膨化法等脱除棉籽饼中游离棉酚的工艺特点、研究进展和发展前景。

优化高效液相色谱法测定棉籽粕中游离棉酚的含量

本试验旨在建立一种测定棉籽粕中游离棉酚含量的高效液相色谱(HPLC)法的优化方法。试验采用丙酮提取棉籽粕样品,经超声、离心、抽滤、旋转蒸发处理,用乙腈-0.2%磷酸(体积比为85∶15)溶液溶解;色谱条件为:色谱柱Agilent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸(体积比为85∶15)溶液,流速1.0mL/min,紫外检测波长235nm,进样量20μL,柱温25℃。结果得出,游离棉酚的回归标准曲线为y=189 347x+24 969(r=0.999 99),在游离棉酚含量为0.122 4～78.336μg/mL范围内线性良好,最低定量限为0.52mg/kg;棉籽粕样品36h内4℃稳定性的相对标准偏差在1.51%～3.43%;平均回收率在94.72%～99.49%,相对标准偏差在1.72%～3.13%。可知,本方法稳定性好,准确度、灵敏度和回收率高。

实用饲料中棉籽浓缩蛋白替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能和肌肉品质的影响

本研究旨在探究实用饲料中棉籽浓缩蛋白替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能和肌肉品质的影响。在鱼粉含量为200 g/kg的基础饲料中,分别以0、52、104、156、208 g/kg棉籽浓缩蛋白等蛋白质替代基础饲料中0、25%、50%、75%、100%的鱼粉,制成5种等氮等脂试验饲料(FM20、FM15、FM10、FM5和FM0),并补充主要限制性氨基酸和胆固醇,饲喂初始体重为(1.20±0.05)g的凡纳滨对虾56 d。结果显示:与对照组(FM20组)相比,FM15、FM10组的生长性能无显著差异(P>0.05),FM5、FM0组的增重率分别下降13.3%、16.2%(P<0.05),饲料系数分别升高0.11、0.13(P<0.05);FM10、FM5、FM0组的出肉率显著降低(P<0.05)。在肌肉品质方面,各鱼粉替代组的体色以及肌肉质构特性(硬度、弹性、黏聚性、咀嚼性、剪切力)、常规成分与氨基酸(异亮氨酸和酪氨酸除外)含量和游离氨基酸、游离鲜味氨基酸总量与对照组相比均无显著差异(P>0.05);各组在肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性和胶原蛋白、丙二醛(MDA)、游离棉酚含量上也无显著差异(P>0.05)。综上可知,在鱼粉含量为200 g/kg的实用饲料中,在补充主要限制性氨基酸和胆固醇的条件下,棉籽浓缩蛋白可以替代100 g/kg(50%)的鱼粉而对凡纳滨对虾的生长性能和肌肉品质没有显著影响。

高效液相色谱测定棉酚方法的建立及不同棉酚脱毒方法比较

棉籽粕是一种非常有价值的蛋白质饲料,棉籽粕的有效脱毒可以提高饲料利用率。本试验建立了一种快速、准确测定棉籽粕游离棉酚的HPLC方法,并采用不同的脱毒方式对棉籽粕中的游离棉酚进行降解,筛选最优脱毒方法。结果显示:(1)HPLC法测定棉籽粕中棉酚含量,棉酚色谱峰出峰稳定性良好、分离效果好、峰型理想、灵敏度高,可以高效的检测棉酚含量;(2)不同处理方法对棉籽粕脱毒效果不同,棉酚脱毒率大小排序为:微生物法>硫酸亚铁法>尿素法>高温高压法。最优的方法为微生物法,酵母菌发酵48 h后的发酵棉籽粕棉酚降解率高达93.86%;化学法(硫酸亚铁法和尿素法)脱毒率为53.64%～78.18%,物理法(高温高压)脱毒率最低,为41.00%。

脱酚处理对棉籽粕蛋白质消化性的影响研究

为明确脱酚处理对棉籽粕消化性的影响,采用甲醇脱酚处理获得不同游离棉酚含量的棉籽粕,比较了各棉籽粕的蛋白质体外消化性,并进一步以豆粕为对照,比较了市售高温脱酚棉籽粕、市售甲醇脱酚棉籽粕和自制脱酚棉籽粕的蛋白质体内外消化性差异,确定游离棉酚的含量与棉籽粕蛋白质消化性的平衡关系,明确脱酚处理对棉籽粕消化性的影响。结果表明:将高温棉籽粕进行甲醇处理可有效降低其游离棉酚含量(从大于1000 mg/kg降至500 mg/kg以下),并提高其消化率(从70%升至80%),但并不是游离棉酚含量越低其蛋白质消化性最高。当自制脱酚棉籽粕的游离棉酚含量在689 mg/kg时,其体内外消化率均可达90%以上,而市售甲醇棉籽粕的游离棉酚仅为364 mg/kg,但体内外消化率为82.2%~85.4%。这说明适度的脱酚处理在降低游离棉酚的同时,也有利于蛋白质消化率的提升。由此建议企业在实际的生产中,适度进行脱酚处理(约600~800 mg/kg),既可以有效保障产品的安全性,更可以提升蛋白质的消化性。

发酵棉籽蛋白的研究进展及在动物生产中的应用

棉籽蛋白是一种优质蛋白质饲料,蛋白含量可达40%以上,但其中含有有害物质游离棉酚和多种抗营养因子,无法大量添加于动物饲料中。通过微生物发酵技术可有效地降低棉酚含量,还可提高发酵底物中益生菌、小分子肽、氨基酸等多种营养物质的含量,达到改善饲料品质和营养价值的作用。近年来,发酵棉籽蛋白部分代替豆粕在动物生产中的应用较为广泛,文章综述了发酵棉籽蛋白的研究进展及在动物生产中的应用,为相关生产应用及研究提供参考。

高效液相色谱内标法测定棉籽油中的游离棉酚

建立了以BHT为内标物,采用高效液相色谱法测定棉籽油中游离棉酚含量的方法。样品经无水乙醇提取,用氮气吹干,再用无水乙醇溶解。色谱条件为Nova-Pak C18色谱柱（3.9 mm×150 mm×5μm）,以甲醇-1.0%磷酸（体积比85∶15）为流动相,流速0.4 m L/min,柱温25℃,进样量10μL,紫外检测波长230 nm。结果表明：BHT在该条件下能够与游离棉酚分离完全,可以作为测定游离棉酚的内标物;方法回收率为99.6%~102.5%,相对标准偏差为0.87%。该方法准确、方便,灵敏度高,可以实现棉籽油中的游离棉酚含量的测定。