HPLC-MS/MS法同时测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦、拉莫三嗪浓度及其临床应用

目的 建立HPLC-MS/MS法测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦和拉莫三嗪的浓度,同时应用于儿童治疗药物监测。方法 取含药血浆10μl,用蛋白沉淀法对样本进行前处理。色谱柱为Agilent C18(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水和甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 ml/min。采用电喷雾离子源正离子模式,监测甲氨蝶呤m/z 455.1→308.2,甲氨蝶呤-D3 m/z 458.1→311.1(内标);左乙拉西坦m/z 171.1.4→126.2,左乙拉西坦-D6 m/z177.2→132.2(内标);拉莫三嗪m/z 256.1→211,拉莫三嗪-13C3-D3 m/z 262.1→217.1(内标)。结果 甲氨蝶呤在25~1 500 ng/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=0.251 6X+0.003 4(r=0.998 9),定量下限为25 ng/ml;左乙拉西坦在1~50μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=16.687 6X+0.000 2(r=0.991 1),定量下限为1μg/ml;拉莫三嗪在0.5~25.0μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=46.369 5X-0.059 9(r=0.999 1),定量下限为0.5μg/ml。样本批内、批间准确度和精密度符合要求、基质效应符合规定。本方法验证后成功用于1 348例临床患儿样本的检测。结论 本方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于人血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦及拉莫三嗪的分析,适用于儿童治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法同时测定患者全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分的浓度

建立HPLC-MS/MS法同时测定人全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度,并用于免疫抑制剂他克莫司联用保肝中药五酯胶囊临床药物浓度监测的研究中。采用了WatersAcquity UPLC■BEH C18色谱柱(50×2.1mm,1.7μm),以5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液为水相,乙腈为有机相,流速为0.3mL/min,柱温60℃。各成分均采用他克莫司同位素化合物(13C,2H4)作为内标(IS),全血样本首先经硫酸锌处理,再加入含内标的乙腈沉淀蛋白,最后离心后取上清液进样,质谱采用电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)、正离子扫描模式检测。建立的HPLC-MS/MS法在1~100ng/m L范围内,他克莫司和五酯胶囊的4种主要成分色谱响应与浓度相关性良好,定量下限均为1ng/m L;他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲以及内标的保留时间分别为2.54、2.33、2.65、1.14、1.56、2.54min;准确度、回收率和经内标校准后的基质效应及稳定性数据均符合相关要求。方法灵敏、专属性强、准确性好,适用于人全血中他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度测定。

HPLC-MS/MS法同时测定儿童血浆中万古霉素和地高辛的浓度

目的建立同时测定血浆中万古霉素和地高辛浓度的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法,并用于儿童患者治疗药物监测。方法血浆样本经甲醇沉淀蛋白前处理,分别以去甲万古霉素和地高辛-d3作为内标,采用EVO-C18色谱柱分离,流动相为水(含0.02%甲酸和2 mmol·L^(-1)乙酸铵)和甲醇,梯度洗脱,流速为0.55 mL·min^(-1)。质谱检测方式为ESI正离子模式,dMRM扫描。结果万古霉素在1~50μg·mL^(-1)与峰面积线性关系良好(R^(2)>0.991),地高辛在0.25~8 ng·mL^(-1)与峰面积线性关系良好(R^(2)>0.993)。方法准确度、精密度、基质效应和稳定性均符合要求,并成功应用于311个样本的测定。结论本方法操作简便、快速、灵敏度高,适用于人血浆中万古霉素和地高辛浓度的同时分析,可用于儿童患者临床治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法快速测定儿童微量血浆中甲氨蝶呤和丙戊酸浓度

目的建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法快速测定儿童微量血浆中甲氨蝶呤(MTX)和丙戊酸(VPA)的浓度。方法10μL血浆经甲醇沉淀蛋白后取上清液直接进样分析,内标为MTX-D3和VPA-D6;采用Phenomenex Kinetex C18柱(50 mm×2.1 mm,5μm)分离,以水(含0.01%甲酸)和甲醇为流动相,梯度洗脱,进样量5μL,流速0.5 mL·min^(-1),分析时长2.4 min。电喷雾离子源(ESI)正负离子切换扫描下,采用多反应监测(MRM)模式进行质谱分析,用于定量分析的离子对分别为m/z 455.1→308.2(MTX),143.2→143.2(VPA),458.1→311.1(MTX-D3)和149.2→149.2(VPA-D6)。结果MTX在31.25~2000 ng·mL^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9995),定量下限为31.25 ng·mL^(-1);VPA在1.88~120μg·m L^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9992),定量下限为1.88μg·m L^(-1);批内、批间准确度在98.05%~104.89%,批内、批间精密度的变异系数(CV)均≤6.73%,平均提取回收率为90.21%~100.55%,基质效应为93.22%~102.73%,溶血效应(溶血程度≤5%)不影响测定结果,血浆样品可分别在冻融3次、室温(25℃)24 h、4℃进样器12 h和冷冻(-20℃)30 d等条件下稳定保存;该法成功用于169例临床患儿血浆样本分析。结论本方法所需样本量小,快速、准确、灵敏、稳定,且不受溶血效应影响(溶血程度≤5%),可应用于儿童MTX和VPA治疗药物监测及联合用药研究。

HPLC-MS/MS法同时测定儿童微量血浆中达沙替尼和甲氨蝶呤浓度

目的建立液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时检测人血浆中达沙替尼和甲氨蝶呤浓度,并用于费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病患儿的治疗药物监测。方法分别以稳定同位素伊马替尼-D8和甲氨蝶呤-D3为内标,取10μL血浆样本经甲醇沉淀蛋白,采用Phenomenex Kinetex EVO C18(30 mm×2.1 mm,2.6μm)色谱柱分离,流动相为水(含0.05%甲酸)和乙腈,梯度洗脱;流速为0.5 mL·min^(-1),进样体积为1μL。质谱分析条件:电喷雾离子源正离子模式,多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为m/z 488.2→401.2(达沙替尼)和m/z 502.5→394.2(伊马替尼-D8);m/z 455.1→308.2(甲氨蝶呤)和m/z 458.1→311.1(甲氨蝶呤-D3)。结果达沙替尼的线性范围在0.5~200 ng·mL^(-1)(r>0.9900),定量下限(LLOQ)为0.5 ng·mL^(-1);甲氨蝶呤的线性范围在5~2000 ng·mL^(-1)(r>0.9900),LLOQ为5 ng·mL^(-1)。达沙替尼和甲氨蝶呤的批内与批间精密度、准确度、提取回收率、基质效应、稳定性均符合方法学要求。结论本方法操作简便、灵敏、准确,只需要微量血浆,适用于费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病患儿的治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法同时检测人血清中奥氮平、利培酮和氨磺必利的浓度

目的建立一种同时测定人血清中奥氮平、利培酮和氨磺必利血药浓度的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法。方法以奥氮平-D3、利培酮-D4、氨磺必利-D5为内标,样本采用乙腈蛋白沉淀法处理。色谱柱:Phenomenex,Kinetex XB-C18,2.6μm,3.0 x 50 mm,流动相水相为0.1%乙酸水溶液,有机相为甲醇,流速:0.4 mL·min-1,柱温:45℃,进样量:5μL。采用电喷雾离子源、多反应监测模式(MRM),定量分析离子对分别为奥氮平(m/z 312.9→256.1)、利培酮(m/z 411.2→191.1),氨磺必利(m/z 370.2→242)、奥氮平-D3(m/z 315→256.1)、利培酮-D4(m/z 415→195.1)、氨磺必利-D5(m/z 375.2→242)。结果奥氮平的标准曲线方程为y=0.0344x-0.1247(R^(2)=0.9958),线性范围为5.00~1000.00 ng·mL^(-1),利培酮的标准曲线方程为y=0.06x-0.0625(R^(2)=0.9958),线性范围为1.00~200.00 ng·mL^(-1),氨磺必利的标准曲线方程为y=0.0128x-0.0145(R^(2)=0.9945),线性范围为10.00~2000.00 ng·mL^(-1);3个分析物批内和批间精密度均小于15%,提取回收率95.37%~105.72%。血清质控样品在常温避光放置24 h、-20℃冻存1 d和14 d、稳定性均在85%~115%。结论本检测方法性能验证试验结果良好,能同时测定血清中奥氮平、利培酮和氨磺必利的浓度,可运用于临床开展治疗药物监测。

HPLC-MS／ESI测定人血清中丙戊酸浓度

目的:建立HPLC-MS/ESI测定人血清中丙戊酸浓度的方法,并用于临床血药浓度监测。方法:采用Waters XTerraTM MS C18色谱柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以10 mmol·L-1醋酸铵水溶液-乙腈(60:40)为流动相,流速0.80 mL·min-1,柱温45℃,以双氯芬酸为内标。采用电喷雾电离源(ESI)负源,用各物质准分子离子峰的选择离子监测(SIR)进行定量分析,血清样品用乙腈直接沉淀后进样。结果:丙戊酸在7.25-188.10μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9997),最低检测浓度为0.50μg·mL-1(S/N≥3)。日内与日间RSD均小于10%(n=5),方法回收率在98.7%-105.1%之间。结论:该方法操作简单,结果准确,血药浓度监测时间很短,灵敏度高;适用于丙戊酸血药浓度监测及药代动力学研究。

HPLC-UV法测定人血浆中替考拉宁药物浓度的方法学研究及其临床应用

目的:建立测定人血浆中替考拉宁浓度的高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)法,为临床个体化给药提供依据。方法:以哌拉西林钠为内标,将400μL血浆样本采用600μL乙腈沉淀蛋白后,再用二氯甲烷萃取,采用HPLC测定,色谱柱为kromasil柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水(含0.01 mol·L-1磷酸二氢钾,用磷酸调pH至2.84)-乙腈(75∶25,v/v),流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,进样量20μL,检测波长为240 nm。结果:替考拉宁在3.12~100.00μg·mL-1范围内线性关系良好(R2=0.9999),定量下限为3.12μg·mL-1;日内、日间精密度的RSD为0.39%~8.54%,相对偏差为–7.19%~7.00%。血浆样品在经历3次冻融(–20℃到室温)循环、4℃放置6 d和冷冻(–40℃)放置21 d等条件下均稳定,处理后样品在自动进样器中(4℃)放置24 h均稳定(RSD<15%)。测定9例应用替考拉宁患者的血药浓度,仅有2例在有效血药浓度范围。结论:该法操作简便、灵敏、准确,适用于替考拉宁血药浓度的测定。

RP-HPLC法测定癫痫患者氯硝西泮血药浓度

目的:建立RP-HPLC法测定氯硝西泮(CZP)血药浓度。方法:血清样品加入磷酸盐缓冲液(pH=5.8),以二氯甲烷提 取后在37℃经氮气吹干,残渣用甲醇溶解后进样分析。色谱条件:Sphrisorb ODS(250mm×4.0mm,5μm)分析柱;流动相为甲醇 -水(53:47,V/V);流速0.9mL·min^(-1);检测波长320nm;柱温27℃;进样量20μL。结果:CZP在0.01～0.40μg·mL^(-1)浓度范围内 线性关系良好(r=0.9999,n=6),最低检测浓度0.5ng·mL^(-1)(r_(SN)≥3)。平均回收率为100.8％,日内及日间RSD<5％。结论: 该方法较为灵敏、准确,适用于临床氯硝西泮血药浓度监测。

RP-HPLC法同时测定人血浆中奥卡西平及利卡西平浓度

目的建立RP-HPLC法同时测定人血浆中奥卡西平含量及活性代谢物利卡西平(10,11-二氢-10-羟基卡马西平)浓度,为临床癫痫患者个体化治疗方案的实施提供指导。方法血清样品经乙醚提取后Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)进样分析,流动相:甲醇-水(40∶60);流速:1.0ml·min-1;检测波长:220nm;柱温:30℃;以苯巴比妥为内标。结果在一定范围内(利卡西平0.56~55.5μg·ml^(-1),r=0.9996;奥卡西平0.64~64.2μg·ml^(-1),r=0.9990)各药物与内标峰面积比与浓度呈良好的线性关系,最低检测限为0.20μg·ml^(-1)。低、中、高浓度质控品回收率均>90%(n=5),日内、日间变异均<10%(n=5)。结论本方法操作简单、成本低、精密度及回收率均满足生物样本分析要求,结果稳定可靠,适合在基层医院开展。

HPLC法测定人体血浆中咪唑立宾的浓度

目的建立测定人体血浆中咪唑立宾浓度的高效液相色谱法（HPLC）。方法血浆样品预处理采用10%三氯乙酸蛋白沉淀法;色谱柱为Phenomenex Luna NH2（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.3%冰乙酸水溶液（30∶70,V/V）,流速为1 m L/min,检测波长为280 nm,柱温为30℃。结果咪唑立宾线性范围为0.1-10.0μg/m L（r=0.999 9）;低、中、高浓度方法回收率分别为（96.1±3.0）%、（98.4±4.1）%、（101.2±1.5）%,提取回收率分别为（94.3±2.2）%、（92.8±2.7）%、（95.5±1.6）%,日内和日间精密度RSD均〈6%。结论本测定方法简便、快速、准确,适用于咪唑立宾的治疗浓度监测。

RP-HPLC法同时测定人血浆中多种抗癫痫药物浓度

目的建立RP-HPLC法同时测定人血浆中苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平浓度,为临床癫痫患者个体化治疗方案的实施提供指导。方法血清样品经乙醚提取后Agilent ZORBAX SB-C 18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)进行分析,流动相:甲醇-水(40∶60);流速:1.0mL·min^-1;检测波长:220nm;柱温:30℃;三种药物互为内标。结果在一定范围内(苯巴比妥2~98mg·L^-1,r=0.9990;苯妥英钠1.005~50.25mg·L^-1,r=0.9992,卡马西平0.4~30mg·L^-1,r=0.9995)各药物与内标峰面积比与浓度呈良好的线性关系。相对回收率分别为101.10%、102.21%和100.12%;低、中、高浓度质控品回收率均>90%(n=5),日内、日间变异均<10%(n=5)。结论本方法操作简单、成本低、精密度及回收率均满足生物样本分析要求,结果稳定可靠,适合在基层医院开展。

HPLC法测定茶碱血药浓度及其临床应用

目的建立血清中茶碱的HPLC测定方法，开展茶碱血药浓度临床监测。方法采用15％的高氯酸处理血样，色谱柱为Shim—pack VP—ODS（150×4．6mm，5um），流动相为甲醇：水=28：72，检测波长为274nm，流速1mL／min，内标为咖啡因。结果茶碱标准曲线回归方程为Y=1．12742X-0．0173523，r=0．9997（n=5），线性范围为1—40ug／mL。茶碱5、15、30ug／mL提取回收率分别为75．1％、73．9％、74．5％，方法回收率为102．3％、99．0％、99．8％，日内RSD（相对标准差）分别为5．8％、2．8％、3．5％，日间RSD分别为4．1％、3．4％、2．6％。结论本测定方法简便、快速、准确，适合茶碱临床血药浓度监测。

HPLC法测定人血清中丙戊酸浓度及其临床应用

目的建立人血清中丙戊酸的HPLC测定方法,开展丙戊酸血药浓度临床监测。方法以2-溴-对硝基苯乙酮为衍生化试剂,环己烷羧酸为内标,Shim-pack C18（150×4.6 mm,5μm）为色谱柱;流动相为甲醇∶水=77∶23,检测波长为265 nm,流速1 ml/min,柱温为25℃。结果内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为5.2 min和8.3 min,标准曲线回归方程为Y=0.0143X＋0.0513,r=0.9997（n=5）,线性范围为10-180μg/ml,提取回收率≥81.6%,方法回收率≥98.9%,日内和日间RSD≤5.4%;应用该方法监测65例服用丙戊酸钠的癫痫患者,41例血药浓度在有效浓度范围之内（50~100μg/ml）,24例患者血药浓度低于有效浓度。结论该测定方法快速、准确、简便,适用于临床丙戊酸的血药浓度监测。

HPLC法测定万古霉素和去甲万古霉素血清药物浓度

目的建立人血清中万古霉素和去甲万古霉素的HPLC测定方法 ,用于万古霉素和去甲万古霉素血药浓度临床监测。方法色谱柱为Shim-pack（150×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇∶磷酸二氢钾缓冲液（pH=3.2）=19∶81,检测波长为236 nm,流速1 ml/min,柱温为35℃,万古霉素和去甲万古霉素互为内标。结果万古霉素和去甲万古霉素的保留时间分别为4.835 min和4.020 min;标准曲线回归方程分别为Y=32.16624X-2.117683,r=0.9997（n=3）,Y=51.53402X-2.958621,r=0.9992（n=3）;线性范围均为2.5~100μg/ml;方法回收率〉95%,绝对回收率〉80%,日内和日间RSD〈6.2%。结论本测定方法快速、准确、简便,适用于万古霉素和去甲万古霉素的临床常规血药浓度的监测。

RP-HPLC法同时测定卡马西平、拉莫三嗪、苯巴比妥、苯妥英钠及环氧卡马西平的血清浓度

目的:建立同时测定血清中卡马西平(CBZ)、拉莫三嗪(LTG)、苯巴比妥(PB)、苯妥英钠(PHT)及10,11-环氧卡马西平(CBZE)血清浓度的反相高效液相色谱法.方法: 0.1 ml样本血清经1 ml二氯甲烷:异丙醇(95:5)混合溶液提取,以氟西泮(FZP)为内标,流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液(30:70),37 ℃下经Symmetry RP18(150 mm×3.9 mm,5μm)色谱柱洗脱、分离,220 nm紫外波长检测.结果:在一定浓度范围内(CBZ:0.47～30.00 mg·L-1,LTG:0.63～40.00 mg·L-1,PB:1.25～80.00 mg·L-1,PHT:0.63～40.00 mg·L-1,CBZE:0.31～20.00 mg·L-1)各被测药物与内标的峰面积之比与浓度呈良好的线性关系,回收率均高于95%(95%～104%,n=6),日内和日间变异均小于4%(0.76%～3.97%,1.34%～3.76%,n=6).结论:本方法操作简便,精密度好,回收率高,经临床用于常用抗癫痫药血药浓度的监测,其结果稳定可靠,可为临床进行群体药动学研究及实施个体化给药提供真实可信的资料.

HPLC-MS/MS法测定人血浆中喹硫平浓度及其临床应用

目的建立快速、准确测定人血浆中喹硫平浓度的分析方法,并应用于喹硫平血药浓度监测及急诊中毒抢救。方法采用高效液相色谱串联质谱法测定。以阿立哌唑为内标,色谱柱为Waters XBridge C18柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)。采用梯度洗脱方式,流速为1 mL·min-1。质谱采用ESI离子源,正离子检测,选择MRM工作方式进行一/二级质谱分析。喹硫平和内标阿立哌唑Q1(Mass)分别为384、448;Q3(Mass)分别为253、285。结果喹硫平的线性范围为32.8～5136 ng·mL-1,定量限为30 ng·m L-1(S/N> 5)。喹硫平的相对回收率均大于85%,低、中、高QC样品的日内和日间相对标准偏差均小于15.0%。结论本法精密度高、准确性强,能快速、准确地测定人血浆中喹硫平浓度。为临床调整用药及中毒抢救提供指导,彰显了治疗药物监测在协助临床判断药物中毒的程度与剂量方面的独特优势与作用。

环孢素A的血药浓度监测(HPLC)法的改进

改进环孢素A（CsA）的高效液相色谱法（HPLC）测定方法。方法：全血经乙醚提取后，吹干，用甲醇、稀HCI定容，正己烷脱脂后进样。流动相为乙腈：水（100：20），色谱法为YWG-C184.6×150mm，检测波长为214nm。结果：CsA与CsD峰分离效果良好，最低检测限为5ng（信噪比是2.65），最低检测浓度为10μg·L-1。提取步骤少，方法简便、快捷。结论：本方法适用于临床器官移植中CsA的大量快速的样本测定。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中的甲氨蝶呤浓度

目的建立人血浆中甲氨蝶呤（MTX）浓度测定的液质联用方法,并应用于临床MTX浓度监测。方法血清用甲醇沉淀蛋白,内标选择噻氯匹定（IS）,色谱柱为Kromasil C8（50 mm×2.1 mm,5μm）,流速0.6 m L·min-1,流动相为含0.1%甲酸的甲醇和水,梯度洗脱,柱温40℃。质谱在ESI正离子模式下使用MRM扫描方式,MTX和IS的离子对分别为：m/z 455.2〉308.2和m/z 264.1〉154.0。结果 MTX浓度在0.01~1μmol·L-1内线性良好,日内和日间的精密度和准确度均在±15%内。MTX在低、中和高浓度的回收率为92.2%~100.5%,10倍和100倍稀释不影响测定结果并且在所有测定的条件下均稳定。结论本研究建立的液质联用测定MTX血浆浓度的方法快速、简便、准确、稳定,适用于MTX的临床药物浓度监测和药动学研究。

RP-HPLC同时测定丙戊酸钠和卡马西平的血药浓度

目的:建立同时测定血清中卡马西平(CBZ)及丙戊酸钠(VPA)的高效液相色谱法。方法:0.1mL样本血清经1mL二氯甲烷:异丙醇(95∶5)混合液提取,以氟西泮(FZP)为内标,流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液(30∶70),色谱柱Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6mm×150mm,5μm),检测波长210nm。结果:在一定浓度范围内(CBZ:0.47～30.00μg.mL-1,VPA:1.25～80.00μg.mL-1)被测药物与内标的峰面积之比与浓度呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.5%、97.5%,日内和日间精密度均小于3%。结论:本方法操作简便,精密度好,回收率高。经临床用于常用抗癫痫药血药浓度的监测,其结果稳定可靠,可为临床进行群体药动学研究及实施个体化给药提供真实可信的资料。