Rapid analysis of components in Rhizoma Anemarrhenae by HPLC-DAD-MS and HPLC-DAD-TOFMS

A global quality control method based on high performance liquid chromatography(HPLC)coupled with diode array detection(DAD),single quadrupole mass spectrometry(MS)and time-of-flight mass spectrometry(TOFMS)was developed for simultaneous determination of seven major components(mangiferin,neomangiferin,timosaponin E1,timosaponin E,timosaponin BⅡ,timosaponin BⅢ,and timosaponin AⅢ)and identification of most components in extracts of Rhizoma Anemarrhenae(RA).HPLC analysis was performed on an Agilent SB-C18 column(4.6 mm×150 mm,5 μm)by gradient elution using acetonitrile and water-acetic acid(100∶0.05,v/v)as the mobile phase.Seven major components in RA were successfully separated.This quantitative method was fully validated in respect of the following performance criteria:linearity,precision,repeatability,stability,accuracy,limits of detection(LOD)and quantification(LOQ).A formula database of known compounds in RA was established,against which,most of the reported components in this herbal extract were identified effectively based on the extract masses acquired by TOFMS.This qualitative and quantitative method was successfully used to analyze the components in 10 batches of RA samples collected from different regions in China.This global quality control method,which consisted of HPLC-DAD-MS assay of seven major components and unambiguous identification of nineteen components,is suitable for routine quantification and comprehensive quality control of RA.

HPLC-TOFMS法对白花蛇舌草药材及其注射剂中化学成分的快速分离与鉴别

目的采用HPLC-TOFMS对白花蛇舌草药材及其注射剂中化学成分进行快速分离鉴别。方法色谱柱Ag-ilent Zorbax SB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.3%醋酸(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,0～30min,体积分数30%～90%B,进样量10μl,流速1.0ml/min,柱温为30℃,飞行时间质谱配有ESI离子源,质量数扫描范围m/z100～1000。结果采用HPLC-TOFMS方法对白花蛇舌草药材及其注射液制剂进行了在线化学成分分离与质谱表征,一次性在一张图谱上共鉴别出白花蛇舌草中11个化学成分,市售注射剂中6个成分,自制注射剂中2个成分。结论这可为中药白花蛇舌草及其注射剂的药效物质基础和质量控制研究奠定基础。

HPLC-ESI-TOFMS检测尿液中的雌二醇

用HPLC—ESI-TOFMS建立了快速灵敏检测尿中雌二醇的方法，尿样中雌二醇经盐酸水解后用OASISHLB小柱萃取．色谱柱为XTerraMS C18反相分离柱（3．5μm，2．1mm×100mm），流动相为水和乙腈，梯度洗脱，流速为0．2mL／min，紫外检测波长为280nm，外标法定量．质谱采用负离子电离模式．线性方程：y=1．79×10^5x＋2．59×10^4，线性范围：0．0328—32．8mg／L，线性相关系数R^2=0．9979，最小检出浓度0．00328mg／L，萃取回收率101．83％．应用本方法对10例正常人尿样进行测定，结果满意．相比较其它检测尿中雌二醇的方法来说，此法比较简单、快速、准确，为临床的诊断提供有价值的指标．

HPLC-TOFMS法快速分离与鉴别丹香冠心注射液中的化学成分

目的采用HPLC-TOFMS对丹香冠心注射液中化学成分进行快速分离与鉴别。方法色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱（3.0 mm×100 mm,3.5μm）,以0.5%醋酸（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱（v/v）,0~25 min,2%~33%B;25~30min,33%~95%B,进样量5μl,流速0.5 ml/min,柱温为30℃,飞行时间质谱配有ESI离子源,质量数扫描范围m/z 100~1000。结果采用HPLC-TOFMS方法对丹香冠心注射液制液进行了在线化学成分分离,共鉴别出丹香冠心注射液中31个化学成分。结论采用HPLC-TOFMS方法对丹香冠心注射液的化学成分进行快速分析鉴别,可为中药丹香冠心注射液的药效物质基础和质量控制研究奠定基础。

HPLC-DAD法测定康复新液中10种抑菌剂含量

目的:建立同时测定康复新液中10种抑菌剂的高效液相色谱分析方法。方法:采用Thermo Acclaim TM 120(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%冰醋酸-0.02 mol·L^(-1)乙酸铵溶液和甲醇,梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),扫描波长为200~700 nm。结果:在相应的浓度范围内,10种抑菌剂质量浓度与峰面积的线性关系良好,r≥0.9998;精密度试验良好,RSD在0.33%~0.38%;重复性试验与稳定性试验的RSD<0.5%,加标回收范围为97.4%~101.1%,RSD在0.4%~1.8%之间。按拟定方法测试样品苯甲酸含量在0.15%~0.34%范围,山梨酸含量在0~0.48%范围,羟苯乙酯含量在0~0.02%范围、羟苯丙酯含量再0~0.02%范围。结论:该方法灵敏快速、专属性强、准确度高,可用于康复新液中抑菌剂的含量测定。

HPLC-DAD法测定草鱼肉质中的维生素B_(1)和维生素B_(12)的含量

本文建立了高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时分离检测草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)的方法。草鱼样品经过酸消化和酶提取后释放出样品中蛋白结合和磷酸化的维生素B_(1)和维生素B_(12),再经固相萃取净化,结合HPLC-DAD对两种目标物进行检测。考察了高效液相色谱条件中流动相组成对分离效果的影响及固相萃取条件中样品溶液pH和洗脱剂对样品回收率的影响。采用HLB固相萃取柱对草鱼样品进行净化,甲醇/水(v/v=1/1)混合液洗脱维生素B_(1)和维生素B_(12)。色谱流动相分别为85%甲醇和50 mmol/L磷酸二氢钠(pH 3.00,含5 mmol/L己烷磺酸),进行梯度洗脱,柱温为40℃,检测波长为255 nm,进样体积为20µL,维生素B_(1)和B_(12)可在15 min内分离。在最佳分离检测条件下,维生素B_(1)和B_(12)的检出限(S/N=3)为0.21~0.36µg/mL,加标回收率为83.9%~95.1%。本文建立的方法可对草鱼肉质中维生素B_(1)和维生素B_(12)含量进行准确定量。

HPLC-DAD测定饲用酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质

为了建立高效液相色谱法测定饲用酸化剂苯甲酸中邻苯二甲酸、2-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2-甲基苯甲酸、3-甲基苯甲酸和4-甲基苯甲酸共7种邻苯二甲酸类杂质的方法。本试验将酸化剂样品溶于甲醇和初始流动相的混合溶液中,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离7种邻苯二甲酸类杂质,以水-乙腈-甲基磺酸(85-15-0.1)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为1.2 mL/min,采用二极管阵列检测器(DAD),采集波长范围为210~400 nm,记录扫描光谱图和235 nm波长处的色谱图。用外标法定量邻苯二甲酸类杂质的含量。结果显示,7种邻苯二甲酸类杂质的浓度在0.10~40.00μg/mL范围内的线性良好,平均加标回收率在98.5%~102.7%范围内,相对标准偏差(RSD,n=5)介于0.3%~1.5%,检测限和定量限均为4 mg/kg。本试验建立的酸化剂苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测方法快速且准确,可用于苯甲酸中7种邻苯二甲酸类杂质的定性和定量检测。

HPLC-TOFMS测定NG/TEGDN中的丙三醇二硝酸酯

应用高效液相色谱飞行时间质谱联用技术(HPLC-TOFMS)测定了丙三醇三硝酸酯(NG)/二缩三乙二醇二硝酸酯(TEGDN)混合硝酸酯中的杂质丙三醇二硝酸酯。色谱条件为Gemini5μC-18色谱柱、55/45(V/V)的甲醇/水流动相;质谱采集模式为电喷雾源负离子方式。结果表明:丙三醇二硝酸酯来源于NG,它存在1,3-丙三醇二硝酸酯和1,2-丙三醇二硝酸酯两种异构体;定量测定方法变异系数分别为0.021%和0.056%,方法精密度能够满足不同丙三醇二硝酸酯含量测定要求。

HPLC-DAD法测定铁筷子中香草酸和阿魏酸的含量

本研究旨在建立高效液相色谱法(HPLC)-二极管阵列检测器(DAD)测定铁筷子药材中香草酸和阿魏酸的含量。采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6mm×25.0 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水(B),梯度洗脱,流速1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长(0~15 min,280 nm,香草酸;15~70 min,327 nm,阿魏酸);进样量10μL。香草酸、阿魏酸的分离度均>1.5,分离效果好,分别在22.72~727.00μg/mL、9.69~310.00μg/mL范围内呈良好线性关系,r> 0.999;平均回收率(RSD)分别为101.08%(3.09%)、98.98%(3.11%),铁筷子样品S1中阿魏酸和香草酸的含量最高,S1中香草酸含量为(0.77±1.42) mg/g,阿魏酸含量为(0.36±1.32)mg/g。本研究建立的HPLC-DAD波长切换法灵敏、准确,重复性好,可用于铁筷子药材中香草酸和阿魏酸含量的测定。

抗菌消炎片(胶囊)的HPLC-DAD-CAD指纹图谱研究

目的建立抗菌消炎片(胶囊)的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用CAPCELL PAK C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL,DAD检测器采集波长为254 nm,CAD检测器雾化温度为50℃,建立抗菌消炎片(胶囊)的HPLC-DADCAD指纹图谱,并采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)计算11批样品的相似度。结果11批次抗菌消炎片(胶囊)的DAD(254 nm)指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.900~0.992,CAD指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.831~0.985,在DAD(254 nm)和CAD下分别标定了34个和21个共有峰,通过对照品比对法指认了其中12个共有峰,分别为绿原酸、芒果苷、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、黄芩苷、槲皮素、黄芩素、大黄酸、汉黄芩素、大黄素和知母皂苷BⅡ。结论建立的HPLC-DAD-CAD指纹图谱分析方法为更加全面、快捷、准确地评价抗菌消炎片(胶囊)的质量提供了强有力的工具。

HPLC-DAD法测定苗药银丹心泰滴丸中原儿茶醛

目的:建立测定银丹心泰滴丸中原儿茶醛含量的方法。方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱:Eclipse Plus C18(5μm, 250 mm×?4.6 mm),Agilent;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇(体积比85∶15);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:278 nm;进样量:10μL。结果:原儿茶醛质量浓度在8.2995~41.4973μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为101.1%(RSD:1.5%,n=6)。结论:该定量方法准确可靠,重现性好,可用于银丹心泰滴丸的质量控制。

基于HPLC-DAD数据库快速筛查降血脂类产品中非法添加的10种化学药物

目的建立一种能同时检测10种有降血脂作用化学药物的HPLC-DAD分析方法,建立各物质保留时间和紫外吸收光谱的二维定性数据库,并将此数据库用于降血脂药物非法添加的快速筛查。方法采用迪马Platisil ODS色谱柱;以0.5%甲酸为流动相A,以乙腈为流动性B,进行梯度洗脱。采集HPLC-DAD检测结果中的对照品的保留时间紫外吸收光谱信息,建立10种常见降血脂化学药物的二维定性数据库。结果本实验基于HPLC-DAD方法新建立了一个快速筛查降血脂类产品中非法添加的数据库,通过对市场抽检样品和模拟阳性样品的检测,结果准确可靠。结论本实验建立的HPLC-DAD数据库可快速筛查产品中是否添加了降血脂类化学药物,具有操作简便、快速的特点,为基层监督检验机构提供了一个可靠的方法学参考。

HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸

目的:建立HPLC-DAD波长切换法测定阿司匹林双嘧达莫片的含量及游离水杨酸的方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(20∶5∶5∶70)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长276 nm(阿司匹林)、284 nm(双嘧达莫)和303 nm(水杨酸)。结果:阿司匹林、双嘧达莫和游离水杨酸分别在38.37~383.71、9.60~96.05和1.02~10.21μg·mL^(-1)范围内线性关系良好。平均回收率分别为99.88%(RSD=0.23%)、99.01%(RSD=0.46%)和100.99%(RSD=0.75%)。本法与标准方法含量测定结果无明显差异。含量均匀度A+2.2S在4.7~6.4。结论:建立的含量测定方法,操作简单,更适用于阿司匹林双嘧达莫片的质量控制。

应用HPLC-DAD/MS技术评价中药天麻的质量

分析比较不同产地及不同炮制方法的天麻药材质量。天麻药材指纹图谱HPLC-DAD分析条件如下:Zorbax XDB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%醋酸水梯度洗脱,检测波长为270 nm。MS分析条件:采用ESI电离源,负离子检测模式。天麻药材含量测定HPLC条件:流动相为乙腈-0.1%醋酸水等度洗脱,其余均同天麻药材指纹图谱的液相分析条件。结果表明,不同产地天麻药材具有相似的指纹图谱,原药材直接冻干的炮制方法较其他方法具有较高的相似度;指认了天麻药材指纹图谱中8个主要的色谱峰;指纹图谱相似度的分析结果与主要成分定量分析的结果基本一致。本文所建立的HPLC-DAD/MS分析方法能够对天麻药材进行全面的质量评价。

HPLC/DAD测定柴胡疏肝散中4种活性成分的含量

目的:建立HPLC法测定柴胡疏肝散(陈皮、柴胡、川芎、枳壳、芍药等)中柴胡皂苷a、芍药苷、橙皮苷和阿魏酸含量的方法。方法:采用Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;柴胡皂苷a流动相为水-乙腈(57∶43),其他成分流动相为甲醇-0.5%冰醋酸(40∶60)洗脱;流速:0.8mL/min;柱温:30℃;检测波长范围:200～400nm,分段变波长测定。结果:4种活性成分在15min内实现良好分离,柴胡皂苷a、芍药苷、橙皮苷和阿魏酸的线性范围分别为38.5～166.7μg/mL(r=0.9996)、15.9～254.5μg/mL(r=0.9999)、22.1～353μg/mL(r=0.9993)、6.30～201.5μg/mL(r=0.9999),平均回收率分别为97.57%、97.40%、98.86%、96.37%,RSD分别为2.1%、1.1%、0.70%、1.3%。结论:该方法简便快捷,准确可靠,为柴胡疏肝散的质量控制提供依据。

西红花常见伪品的HPLC-DAD鉴别和掺伪量测定

目的:建立HPLC-DAD方法,一次性鉴别西红花常见伪品红花、菊花,并测定其掺伪量。方法:采用高效液相色谱法,流动相为乙腈-0.3%磷酸水;波长范围200～410 nm;羟基红花黄色素A检测波长402 nm,绿原酸检测波长327 nm;梯度洗脱。结果:通过HPLC分析,确定羟基红花黄色素A、绿原酸分别为红花、菊花的特征成分,测定样品含量,可鉴别出样品中是否掺入了红花、菊花,并确定伪品掺入量。羟基红花黄色素A 0.005～0.25 mg.mL-1,绿原酸0.001～0.05 mg.mL-1范围内线性关系良好,方法回收率高,重复性好。结论:此方法能一次性鉴别西红花常见伪品红花、菊花,并测定其掺伪量,对其它药材的相关研究也有参考价值。

基于HPLC/DAD/MS的降压复方决明提取物入血成分研究

目的:研究复方决明提取物(由决明子、野菊花、夏枯草组成)的入血成分,为其药效物质基础研究提供参考。方法:选取雄性SD大鼠为实验对象,以40 g(生药)/kg剂量灌胃给予复方决明提取物及单味药材。给药血浆首先采用直接蛋白沉淀法考察复方决明提取物入血成分及存在形式;后对其进行盐酸水解,并在280 nm和360 nm下分析吸收入血的主要苷元,进行来源归属和定性研究。结果:直接沉淀法制备的给药血浆与空白血浆比,新增成分主要为葡萄糖醛酸结合产物。酸解后,在280 nm波长下有11个入血成分,此类成分多来源于决明子,其中3号峰为橙黄决明素,7为黄决明素,10为大黄素,11号为大黄酚。360 nm下新增4个峰,主要来源于野菊花,其中12号峰为木犀草素,13为芹菜素,15为合金欢素。结论:本研究主要对复方决明提取物的入血成分进行了初探,并对其来源进行归属。此研究的开展有利于阐明复方决明提取物的药效物质基础,为其临床用药及后续进一步开发提供参考。

应用HPLC-DAD及HPLC-HRMS技术研究不同贮存年限陈皮的指纹图谱

目的:比较不同贮存年限陈皮甲醇提取物中成分的差异,并对其中共有峰进行高效液相-高分辨质谱联用技术(HPLC-HRMS)分析。方法:采用高效液相-二极管阵列检测(HPLC-DAD)及HPLC-HRMS技术进行指纹图谱研究。结果:不同贮存年限陈皮甲醇提取物的HPLC指纹图谱相似度较好。本实验指认了陈皮药材指纹图谱中9个主要的成分。结论:黄酮类化合物含量随贮存时间变化较小。陈皮中黄酮类成分的质谱裂解数据具有明显的规律性,可作为鉴别陈皮药材成分的参照。

HPLC-DAD-Q-TOF-MS/MS法的银黄颗粒主要成分定性与定量研究

目的采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱（HPLC-Q-TOF-MS/MS）快速鉴定银黄颗粒化学成分和HPLC-DAD法同时定量测定银黄颗粒中15种成分（獐牙菜苷、马钱苷、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素）。方法分析采用月旭Ultimate-XB C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,柱温30℃。飞行时间质谱,采用负离子模式扫描。二极管阵列检测器的检测波长为240、276、326 nm。结果 HPLC-Q-TOF-MS/MS法推断鉴定银黄颗粒中的44种成分,HPLC-DAD定量分析银黄颗粒中15种成分在考察的质量浓度范围内,与峰面积之间呈良好的线性关系（r〉0.999 0）;回收率均在97.3%~100.9%范围内,RSD为1.4%~2.8%。结论通过HPLC-Q-TOF-MS/MS法和HPLC-DAD法鉴定银黄颗粒的化学成分优于HPLC法,尤其测定环烯醚萜苷类成分（獐牙菜苷、马钱苷）可为综合评价银黄制剂的质量提供参考。

应用HPLC-DAD-MS联用技术研究中药川芎指纹图谱

目的 研究川芎药材的高效液相色谱指纹谱 ,为科学评价和有效控制其内在质量提供可靠方法。方法应用HPLC DAD MS联用技术测定四川GAP示范基地 3个公司的 9个川芎样品 ,鉴定共有峰和特征峰 ,指定参照峰 ,计算共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果 9个样品的色谱指纹图谱有 2 1个共有峰。色谱图分为 4个区 ,第1区 (0 12min)主要分布酚酸类和生物碱类化合物 ,有 3个共有峰 ,峰 3被确证为ferulicacid ;第 2区 (12 2 4min)主要分布羟基化苯酞类化合物 ,有 4个共有峰 ,特征峰 4和 5被确证为senkyunolideI和senkyunolideH ;第 3区 (2 4 32min)主要分布烷基化苯酞类化合物 ,有 7个共有峰 ,特征峰 9,11,13和 14分别被确证为senkyunolideA ,coniferylferulate ,Z ligustilide和 3 butylidenephthalide。峰 13Z ligustilide被指定为参照峰 ;第 4区 (32 5 0min)分布苯酞二聚体化合物 ,有 7个共有峰 ,峰 15和 17分别被确证为riligustilide和levistolideA。所有样品中 2 1个共有峰的相对保留时间稳定 (RSD≤1% ) ,同一公司同一年采收的样品 13个主要共有峰 (归一化法峰面积≤ 1% )的相对峰面积稳定 ,而不同公司同一年采收的样品 13个主要共有峰的相对峰面积差异非常显著 (P <0 0 0 1)。