HPLC柱前衍生化法测定硫酸依替米星的含量

目的 :采用反相高效液相色谱柱前衍生化法测定硫酸依替米星的含量。方法 :衍生化条件 :衍生化试剂为邻苯二醛 ,反应温度为 6 0℃ ,反应时间为 15min。色谱条件 :色谱柱为KromasilC1 8柱 (5 μm ,2 0 0mm× 4 6mm) ;流动相为水 冰醋酸 甲醇 (2 0∶5∶75 )配制的 0 0 2mol L的庚烷磺酸钠溶液 ;检测波长为 330nm ;流速为 1ml min。结果 :线性范围 :0 1～ 1 0mg ml,r=0 9999;该方法与微生物法测定结果基本一致 ,衍生化产物稳定。结论 :所建立的反相高效液相色谱柱前衍生化法能准确测定硫酸依替米星的含量 。

RP-HPLC柱前衍生化法测定白舒非血药浓度

目的建立测定人血浆中白舒非浓度的柱前衍生高效液相色谱法。方法以1,5-戊二醇二甲磺酸酯为内标,血浆样品经二乙基二硫代氨基甲酸钠衍生化处理后,以乙腈-0.7%冰醋酸水溶液(69∶31)为流动相,流速1.0mL·min-1,采用XterraP18色谱柱分离,在280nm波长下进行检测。结果白舒非线性范围为0.20～4.00mg·L-1,以加权最小二乘法计算得到回归方程为Y=2.56X+16.7(r=0.9993,n=7),提取回收率81.01%～82.72%,方法回收率96.50%～97.90%,日内、日间精密度(RSD)均小于10%。最低血浆检测质量浓度为0.080mg·L-1。结论柱前衍生高效液相色谱法准确、灵敏,适用于白舒非血浆浓度的测定及其药代动力学研究。

HPLC柱前衍生化法测定阿波莫斯注射液的含量

采用高效液相色谱邻苯二甲醛柱前衍生化法 ,测定进口药品阿波莫斯注射液中天门冬鸟氨酸的含量。以HypersilODS(12 5mm× 4mm ,5μm)为色谱柱 ,2 0mmol/LNaAc +φ =0 .5%THF +φ =0 .0 2 %TEA(pH7.2 )混合一定比例的 10 0mmol/L醋酸钠 乙睛 甲醇 (10 0∶175∶2 2 5)作流动相 ,梯度洗脱。结果在 0 .2 0～ 1.2 0 μg范围内 ,积分面积与样品量呈良好的线性关系 ,r =0 9991,平均加样回收率为 10 0 .3% ,RSD =1.8% (n =9)。

RP-HPLC柱前衍生化法测定壳聚糖喷雾剂盐酸氨基葡萄糖含量

本实验旨在建立反相高效液相柱前衍生化色谱法测定壳聚糖喷雾剂盐酸氨基葡萄糖含量。实验采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,流速0.6 m L·min-1。实验结果表明,制剂中盐酸氨基葡萄糖衍生化后产生的2个异构体均达到良好分离,加样回收率平均值为90.09%,RSD为0.91%。本实验所建立的反相高效液相柱前衍生化色谱方法专属性强,可用于壳聚糖喷雾剂质量控制。

HPLC/MS法与柱前衍生化HPLC/UV法测定环维黄杨星D有关物质比较

目的:验证柱前衍生化HPLC/UV测定环维黄杨星D有关物质的可行性。方法:环维黄杨星D同异氰酸苯酯反应后,柱前衍生化HPLC/UV测定环维黄杨星D有关物质并与HPLC/MS直接测定环维黄杨星D有关物质比较。结果:衍生化反应后,主峰与有关物质分离好,所测得的有关物质与HPLC/MS直接测定的环维黄杨星D有关物质一一对应。结论:环维黄杨星D中含分子量为386,388的杂质,每分子环维黄杨星D及有关物质均同2分子异氰酸苯酯定量反应,柱前衍生化HPLC/UV可测定环维黄杨星D有关物质,与HPLC/MS直接测定法相比,本法简单、准确。

柱前衍生化HPLC法测定积雪草及三金片中积雪草苷的含量

目的 建立积雪草中积雪草苷的柱前衍生化高效液相色谱测定法 ,并用该法测定积雪草和三金片中积雪草苷的含量。方法 以吡啶—苯甲酰氯为衍生化试剂 ,对积雪草苷分子中的羟基进行苯甲酰化后 ,采用RP HPLC法测定。色谱柱 :SpherisorbODSC18柱 ;流动相 :甲醇—四氢呋喃—水 (90∶4∶6 ,0 1%三乙胺 ) ;柱温 :2 5℃ ;流速 :0 8mL·min-1;检测波长 :2 35nm ;内标物 :VD3 。结果 积雪草苷 0 396～ 3 96 0 μg与峰面积比呈线性关系 ,相关系数为0 9985。用此法对不同产地的积雪草和三金片中积雪草苷进行测定 ,结果积雪草中积雪草苷的平均回收率为99 6 % ,RSD为 2 3% (n =6 ) ;三金片中积雪草苷的平均回收率为 99 2 % ,RSD为 2 7% (n =6 )。结论 此法准确、灵敏度高、重现性好 ,为中药积雪草和中成药三金片的质量评价提供了科学依据。

柱前衍生化HPLC法测定黄芪中黄芪甲苷的含量

目的 :建立黄芪中黄芪甲苷的柱前衍生化高效液相色谱测定法 ,并用该法对不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量进行比较。方法 :以吡啶 -苯甲酰氯 ( 2 .5∶ 1)为衍生化试剂 ,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化 ,以甲醇 -四氢呋喃 -水 ( 90∶ 4∶ 6,0 .2 %三乙胺 )为流动相 ,VD3为内标物 ,在 2 30 nm波长处检测。结果 :黄芪甲苷在 0 .0 0 4～ 0 .0 80mg· m L-1范围内呈线性 ,相关系数为 0 .9999,平均回收率为 94 .7%。用该法对不同产地、不同品种的黄芪中黄芪甲苷进行测定 ,结果含量差异较大。结论 :该法准确 ,灵敏度高 ,重现性好 ,为中药黄芪质量评价提供了现代化的科学依据。

柱前衍生化HPLC法测定不同基原珍珠粉及贝壳粉中7种氨基酸的含量

目的：建立柱前衍生化HPLC检测不同基原珍珠粉及贝壳粉中7种主要氨基酸的方法。方法：以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,流动相A：0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调pH值至6.5）,流动相B：乙腈,梯度洗脱,检测波长254nm。结果：氨基酸衍生溶液在24h内保持稳定,7种氨基酸线性相关系数均大于0.9995,加样回收率在93.16%~103.31%之间。结论：本方法分离效果好,精密度和重复性良好,可用于珍珠粉及贝壳粉中7种水解氨基酸含量的测定。

柱前衍生化HPLC法测定硫酸庆大霉素和硫酸新霉素的含量

目的 :建立一种测定硫酸庆大霉素滴眼液中庆大霉素和复方地塞米松滴眼液中硫酸新霉素含量的HPLC法。方法 :硫酸庆大霉素和硫酸新霉素经氯甲酸芴甲酯 (FMOC Cl)衍生化后用HPLC法分析。采用AgilentC18柱 (15 0mm× 4 6mm ,5 μm)为色谱柱 ,乙腈 -水 (95∶5 ,V/V)为流动相 ,紫外检测波长 2 6 5nm ,流速 1mL·min-1,柱温 2 5℃。结果 :硫酸庆大霉素在 2～ 10 0mg·L-1浓度范围内有良好的线性关系 (r=0 9997,n =6 ) ,回收率为 (98 5± 0 6 5 ) % ,RSD =0 6 6 % ,(n =9) ,最低检测质量浓度为 1mg·L-1;硫酸新霉素在 1～ 10 0mg·L-1浓度范围内有良好的线性关系 (r =0 9993,n =7) ,回收率为 (99 2 6± 1 70 ) % ,RSD =1 71% ,(n =9) ,最低检测质量浓度为 0 5mg·L-1。结论

柱前衍生化HPLC法分析沙参多糖中单糖组成

目的建立北沙参多糖中单糖的组成和含量的检测方法。方法以三氟乙酸水解沙参多糖，水解产物加入衍生化试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮（PMP）生成衍生化产物，采用RP—HPLC法，色谱柱：C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：体积分数为19％的乙腈溶液-醋酸铵缓冲液（醋酸铵-冰醋酸，pH5．5，体积比为100：1），等度洗脱，流速：1．0mL·min-1检测器：紫外检测器，检测波长：250nm，柱温：35℃。结果沙参多糖由D-甘露糖、D-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、沪半乳糖、L-（＋）-阿拉伯糖等8种单糖（有2种未鉴定出的单糖）组成。D-甘露糖、D-鼠李糖、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-（＋）-阿拉伯糖的线性分别为4—80μmol·L-1（r=0．9990）、12～240μmol·L-1（r=O．9990）、5．6～1．12×10^3μmol·L-1（，=0．9994）、1．54×10^-3-0．80×10^3μmol·L-1（r=0．9990）、80．0—1．6×10^3μmol·L-1（r=0．9990）、64．00～1．28×10^3μmol·L-1（r=0．9992）；平均加样回收率分别为94．0％、88．5％、93．9％、95．9％、89．2％、90．8％。含量分别为0．22％、0．61％、8．55％、72．88％、4．79％、2．71％。结论该方法可以准确的测定出北沙参多糖中含有的各种单糖和含量。

异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

目的：建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法。方法：以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温40℃,采用二元梯度洗脱,254 nm波长处检测。结果：氨基酸血浆浓度在15.6-250μmol/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于0.99;10种氨基酸的加样回收率在96.3%-103.4%;日间和日内变异系数均在4.8%以下。应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。结论：该法简便、稳定,并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测。

PMP柱前衍生化-HPLC法分析玛咖多糖的单糖组成

应用水提醇沉法获得玛咖多糖,苯酚-硫酸法测定玛咖多糖含量,PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生法对酸水解的玛咖多糖衍生化,HPLC法分析其单糖组成。结果表明,PMP柱前衍生化-HPLC法精密度、稳定性和重现性实验的相对标准偏差均小于3%,线性实验结果显示在1.50~650.00μg/m L浓度范围内各单糖的相关系数均大于0.999 1,加样回收实验各单糖的回收率均在98.83%~102.82%之间,确定玛咖多糖的单糖组成及摩尔比为m(D-甘露糖):m(葡萄糖):m(D-半乳糖):m(阿拉伯糖)=1:196:6:6。该方法分析玛咖多糖单糖组成简单易行,结果稳定可靠。

柱前衍生化HPLC法测定牛磺酸软胶囊中牛磺酸的含量

目的 :建立反相高效液相色谱法测定牛磺酸软胶囊中牛磺酸的含量。方法 :牛磺酸经邻苯二甲醛和乙硫醇衍生 ,C18柱分离 ,紫外检测波长为 36 0nm ,甲醇 水 磷酸盐缓冲液 (1∶1∶1)为流动相 ,用外标法测定。结果 :方法回收率为95 .8%～ 10 7.2 % ,RSD <2 .1% ,线形范围为 6 .7～ 40 .4mg/mL ,最低检测限 2 .47mg/mL。结论 :本法简单、快速。

氯甲酸2-(9-咔唑)乙基酯柱前衍生化HPLC法用于环境水中脂肪胺测定

利用一种新型的衍生化试剂氯甲酸2_(9_咔唑)乙基酯柱前衍生10种脂肪胺 ,建立了脂肪胺类化合物的梯度洗脱高效液相色谱分离分析方法 ,在紫外254nm条件下检测 ,线性检测范围为50～500μmol/L ,检出限 (S/N=3)为9.5～25μmol/L;对海水及河水中脂肪胺的试验结果表明 ,建立的方法快速、灵敏度高 ,可以满足环境检测等方面的需要。

HPLC柱前衍生化法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量

目的:建立发酵虫草制剂中总氨基酸的含量测定方法,同时评价各发酵虫草制剂的质量。方法:采用Zorbax C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙酸钠缓冲液(A)-80%乙腈水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~20 min,100%A→97%A;20~24 min,97%A→88%A;24~30 min,88%A→78%A;30~50 min,78%A→68%A;50~50.5 min,68%A→0%A;50.5~60 min,0%A),流速为1.0 m L·min-1,柱温为40℃,检测波长254 nm,运用外标法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量。结果:各发酵虫草制剂的质量评价,对于独家生产的品种(如金水宝胶囊、百令胶囊和心肝宝胶囊),心肝宝胶囊中总氨基酸含量为199.3~224.9 mg·g^(-1);金水宝胶囊中总氨基酸含量为224.0~281.7 mg·g^(-1);百令胶囊中总氨基酸含量为294.0~346.7 mg·g^(-1),样品各批间一致性较好,可以控制总氨基酸含量结合羟脯氨酸(指标成分)占总氨基酸的含量来控制制剂质量。而对于多厂家生产的发酵虫草制剂(如宁心宝胶囊和至灵胶囊),由于生产工艺的不同和原料来源不同,总氨基酸含量差异较大,宁心宝胶囊中总氨基酸含量为234.9~337.1 mg·g^(-1),至灵胶囊总氨基酸含量为241.1~356.1 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本文方法可用于测定发酵虫草制剂的氨基酸含量,也可用于评价各发酵虫草制剂的质量。

柱前衍生化HPLC法测定鸦胆子油中油酸和亚油酸的含量

目的建立柱前衍生化HPLC法测定鸦胆子油中油酸和亚油酸的含量。方法将鸦胆子以石油醚回流提取得到鸦胆子油,经柱前衍生化后,利用HPLC法测定油酸和亚油酸的含量。色谱条件:色谱柱为WatersSymmetry C1(8150 mm×3.9 mm,5μm),检测波长242 nm,流动相为甲醇-水(98∶2),柱温:28.5℃,流速:1.0 mL.min-1。十七烷酸为内标。结果油酸在0.04～0.8 mg.mL-1,亚油酸在0.02～0.6 mg.mL-1范围内具有良好的线性关系。平均加样回收率油酸为99.04%,亚油酸为96.97%。在6 min内可完成一个样品的分析。结论本法操作简便,分析时间短,为评价和控制鸦胆子油质量提供了依据。

柱前衍生-电化学检测HPLC法测定大鼠脑内的谷氨酸和γ-氨基丁酸

目的 :建立大鼠脑组织内谷氨酸和γ 氨基丁酸的HPLC测定方法。方法 :大鼠脑组织匀浆液低温离心 ,上清液经甲醇沉淀蛋白并稀释至合适浓度后与邻苯二醛在亚硫酸钠存在下发生衍生化反应 ,衍生物经HPLC分离 ,电化学检测。结果 :谷氨酸在 0 .1～ 2 .0 μg·ml- 1 ,γ 氨基丁酸在 0 .0 5～ 1.0 μg·ml- 1 浓度范围内 ,线性关系良好。谷氨酸测定的日内和日间变异系数(RSD )分别小于 3.4%和 4.5 % ,γ 氨基丁酸测定的日内和日间变异系数 (RSD )分别小于 4.2 %和 8.6 %。两者回收率分别为95 .9%～ 10 2 .3%和 10 7.2 %～ 110 .0 %。谷氨酸和γ 氨基丁酸的最小检出浓度均为 5ng·ml- 1 。SD大鼠小脑、皮层、丘脑、海马内谷氨酸的含量分别为 96 0 .2、10 6 8.0、46 0 .2和 846 .6 μg·g- 1 ;γ 氨基丁酸的含量分别为 186 .0、16 5 .4、149.3和 188.6 μg·g- 1 。结论 :本法简便、灵敏、准确 ,可用于大鼠脑组织内谷氨酸和γ

柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度

目的：建立柱前手性衍生化-HPLC法测定普瑞巴林的光学纯度。方法：以N^2-（5-氟-2，4-二硝基苯基）-L-丙氨酰胺为手性衍生化试剂，对普瑞巴林S／R对映体进行衍生化，生成具有紫外吸收的一对非对映体衍生化产物（λmax=339nm），经C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），0．5％三乙胺溶液（用磷酸调节pH至3．0）-乙腈（55：45）为流动相进行分离，测定普瑞巴林的光学纯度。结果：所形成的普瑞巴林非对映体衍生化产物稳定且分离良好，R-异构体浓度在0．20～2．02μg／mL范围内与其衍生化产物峰面积呈良好的线性关系（r=0．9996），加样回收率为96．3％，最低检测浓度为0．02μg/mL。结论：所建立方法快速、灵敏、重复性好，可用于普瑞马林光学纯度的检查。

柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量

目的:建立测定胶类药材中L-羟脯氨酸(L-Hyp)和胶原蛋白含量的方法,并比较对照药材与市售药材中两种成分的含量。方法:采用柱前衍生化法进行前处理,并采用高效液相色谱法测定样品中L-Hyp的含量:色谱柱为Kromasil C18,流动相为[乙腈-0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(p H 6.5,7∶93,V/V)]-[乙腈-水(4∶1,V/V)](梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为43℃,进样量为20μL;再通过折算系数计算样品中胶原蛋白的含量。结果:L-Hyp检测质量浓度线性范围为2.5~40μg/m L(r=0.999 9);定量限为0.20μg/m L,检测限为0.05μg/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<4.0%;加样回收率为96.03%~102.07%(RSD=2.20%,n=9)。28批市售药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量有一定差异,其中13批市售阿胶药材与阿胶对照药材中两种成分的含量较为接近,而5批龟甲胶和7批鹿角胶药材中两种成分的含量高于其对照药材。结论:该方法准确、可靠,适用于测定胶类药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量。