HPLC-柱后衍生荧光法测定水产品中河豚毒素含量结果的不确定度评定

通过建立HPLC-柱后衍生荧光法测定水产品中河豚毒素含量的不确定度评定方法,量化分析测定结果的不确定度分量,并对各分量相对贡献进行比较。结果表明:测定结果的不确定度主要来源于标准品的校准过程、样品称量、实验过程移取及定容、样品重复实验误差、前处理过程中的回收率不同等。其中校准不确定度中标准溶液配制的不确定度贡献最多,称样量不确定度最小;当水产品中河豚毒素的含量为90.6μg/kg时,其扩展不确定度为0.69μg/kg(包含因子k=2)。

PSA分散固相萃取液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜和水果中的13种氨基甲酸酯

建立了PSA分散固相萃取净化,液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜和水果中13种氨基甲酸酯农药的分析方法。在建立的测定条件下,13种氨基甲酸酯的含量与峰面积之间成线性关系,相关系数大于0.994,保留时间的相对标准偏差在0.03%-0.22%之间,检测下限在2.00-2.28μg/kg范围内。西瓜、杏、茄子及胡萝卜中13种氨基甲酸酯的平均回收率在71.7%-110%之间,相对标准偏差在0.68%-15%之间,分析结果优于氨基柱固相萃取法。

高效液相柱前衍生化法和高效液相荧光法测定栀子厚朴汤4种生物碱的比较

目的建立高效液相柱前衍生化法和高效液相荧光法测定栀子厚朴汤中4个生物碱,并比较两种方法优缺点。方法①高效液相柱前衍生化法:采用色谱柱Lichrospher C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(57:43)为流动相;流速:1.0mL·min^(-1);紫外检测器:257nm。②高效液相荧光法:采用色谱柱Lichrosμher C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),以[10mM己烷磺酸钠用磷酸调节pH至2.5]-甲醇(85:15)为流动相;流速为1.0mL·min^(-1);荧光检测器:激发波长为281nm;发射波长为302nm。结果①高效液相柱前衍生化法:4个生物碱的线性范围为0.05～5μg·mL^(-1)(r≥0.9994),平均回收率在96.2%～98.8%之间(RSD≤3.4%)。②高效液相荧光法:4个生物碱的线性范围为0.025～1μg·mL^(-1)(r≥0.9998),平均回收率在100.0%～101.4%之间(RSD≤3.0%)。两种方法比较:从方法准确性、专属性、系统适应性、样品处理、峰面积的响应、检测限和定量限、流动相和色谱分离角度进行全面评价。结论两种方法准确、专属、灵敏,可用于栀子厚朴汤中4个生物碱的含量测定。与高效液相柱前衍生化法相比,高效液相荧光法更简单,灵敏度更高。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量

目的:建立了柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定硫普罗宁片含量。方法:供试品经 N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)衍生化后,采用 Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为水(含0.02%磷酸和0.8%冰乙酸)-乙腈(52:48),pH=3.0;流速0.8 mL·min^(-1),在λ_(ex)=330 nm,λ_(em)=380 nm 处荧光检测。结果:硫普罗宁在5.0～50.0μg·mL^(-1)浓度范围内与其衍生化主产物峰面积呈良好的线性关系,r=0.9993,平均回收率为99.5%(RSD=1.0%)。结论:该法准确可靠,专属性强,能满足制剂质量控制的要求。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定大鼠血浆中硫普罗宁

建立了测定大鼠血浆中硫普罗宁含量的柱前衍生-高效液相色谱荧光法。血浆样品经二硫苏糖醇（DTT）还原后，再经N-（1-芘）马来酰亚胺（NPM）衍生化后进样测定。以0．2％乙酸（含0．015 mol·L^-1磷酸二氢钾）-乙腈（56：44）为流动相，采用Kromasil C18色谱柱分离，在λex=340nm，λem=375nm下荧光检测。硫普罗宁线性范围为0．1～10．0μg·mL^-1，定量下限为0．1mg·L^-1，日内、日间精密度（RSD）分别为5．3％～10．8％和7．0％～10．8％，提取回收率在73．7％～79．7％。大鼠单剂量给予硫普罗宁后，药代动力学行为符合二室模型。该法准确可靠，专属性强，适用于硫普罗宁的药代动力学研究。

高效液相色谱柱后衍生荧光法测定柑橘中8种氨基甲酸酯类农药残留

建立了固相萃取—高效液相色谱柱后衍生荧光法检测柑橘中8种氨基甲酸酯类农药残留,样品经乙腈均质提取,SPE-NH2小柱净化,Waters XBridge C18液相色谱柱分离,以甲醇、水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用光化学衍生器串联荧光检测器进行检测,激发波长330nm,发射波长465nm。以外标法定量,在0.010~1.0mg/L浓度范围内,8种农药均具有良好的线性相关性(r>0.999 3),定量限为0.010mg/kg。采用空白基质加标,在0.010、0.020和0.50mg/kg 3种加标水平下,平均添加回收率为82.3%~105.1%,相对标准偏差(RSD)为2.7%~6.2%。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定婴幼儿配方乳粉中低聚半乳糖含量

目的建立柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定婴幼儿配方乳粉中低聚半乳糖的检测方法。方法样品经乙酸调节pH到4.5,使用淀粉葡萄糖苷酶和β-半乳糖苷酶酶解、2-氨基苯甲酰胺衍生。经色谱柱分离,荧光检测器检测。通过响应曲面设计优化衍生关键因素水平,包括衍生剂浓度、衍生温度与衍生时间。结果优化后的衍生剂浓度为0.45mol/L、衍生温度为55℃与衍生时间为120min。定量化合物3’-半乳糖基乳糖在10.0~100.0mg/L范围内线性良好(r^(2)=0.9993)。在低聚半乳糖添加水平为2.5、10.0、40.0g/kg时,回收率为92.5~102.7%,相对标准偏差为3.69%~6.69%(n=6)。方法检出限为0.8 g/kg,定量限为2.5 g/kg。结论本方法操作简单、回收率高和重现性好,可使用3’-半乳糖基乳糖对婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖进行定量分析。

用免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法检测山楂干中多种黄曲霉毒素含量的效果观察

目的:探讨用免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法检测山楂干中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2含量的效果。方法:采用免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法进行本次实验。本次实验的色谱柱为Agilent TC-C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 um),其流动相为甲醇-乙腈-水(40:20:40),其色谱柱的流速为0.8 ml/min,其柱温为40℃,其激发的波长λex为360nm,其发射的波长λem为450 nm。使用的衍生液是浓度为0.05%的碘溶液,衍生化泵的流速为0.3 ml/min,进行衍生化的温度为70℃,进样量为20μl。结果:黄曲霉素B1在0.6～50 pg、黄曲霉素B2在0.1～15 pg、黄曲霉素G1在0.7～50 pg、黄曲霉素G2在0.2～15 pg范围内时与各自的峰面积呈良好的线性关系,进行精密度实验、稳定性实验、重复性实验的RSD均≤2.0%,加样回收率为79.4%～89.9%,RSD为3.1%～4.3%。结论:用免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法检测山楂干中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2含量的效果较为理想。

柱后衍生-荧光检测高效液相色谱法快速测定鲜牛奶中链霉素残留量

牛奶样品经磷酸溶液提取,提取液用苯磺酸阳离子交换柱和C18固相萃取柱净化,链霉素残留液用甲醇从C18固相萃取柱上洗脱,经旋转蒸发器减压蒸干,残渣用0 01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解,用柱后衍生高效液相色谱荧光检测器在激发波长263nm和发射波长435nm测定.方法线性范围为0 01～0 10mg/kg;在0 01～0 10mg/kg范围,三个添加水平的回收率为78 3%～80 2%,变异系数(CV)为7 4%～12 4%,方法检出限为0 005mg/kg.

用柱后衍生荧光测定法检测食品中土霉素和四环素残留

应用高效液相色谱(HPLC)对动物性食品中土霉素(OTC)和四环素(TC)进行测定,样品经含乙二胺四乙酸二钠的丁二酸钠缓冲液除蛋白后,由SPE-C_(18)小柱提纯净化,经ODS—C_(18)柱分离后,用8％氧氯化锆溶液柱后衍生,与锆离子的螯合物在激发波长(Ex):406nm和发射波长(Em):515nm处检测。实验优化了锆试剂的浓度和柱后衍生的条件,提高了检出的灵敏度,土霉素和四环素的回收率分别为89.59％和92.59％,变异系数(CV)分别为4.98％和6.74％。土霉素和四环素的最低检出浓度(信噪比5:1)分别为3μg/L和5μg/L,线性范围为0.01～10μg/L,土霉素和四环素的相关系数分别为0.999 9和1.000 0。

柱前衍生液相色谱荧光检测法测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖

目的建立一种柱前衍生高效液相色谱荧光检测法测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖含量的分析方法。方法样品用2-氨基苯甲酰胺衍生后,经色谱柱分离,用高效液相色谱-荧光检测器检测,外标峰加和分段法定量。结果建立的方法可以测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖含量。采用麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖建立标准曲线,在1~250μg/mL线性范围内相关系数(r^2)大于0.999。回收率为85.9%~103.5%,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小于5%,检出限为1.0 g/kg,定量限为3.0 g/kg。结论本方法方法重现性好,精密度高,解决了婴幼儿配方乳粉中高含量乳糖对低聚半乳糖测定的干扰问题,可以为食品中低聚半乳糖的定量提供良好的解决方案。

HPLC-荧光衍生化法在药物分析中的应用

综述了HPLC-荧光衍生化法中衍生化试剂的研究现状,简述了HPLC-荧光衍生化技术及其在药物分析中的应用情况,展望了HPLC-荧光衍生化技术的发展前景。

高效液相荧光法测定大鼠脑内氨基酸类神经递质方法的改良

目的改良测定大鼠脑组织氨基酸类神经递质的反相高效液相色谱荧光法。方法改良使用磷酸盐-甲醇-乙腈作为流动相,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器,检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑、小脑和下丘脑6个脑区中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)6种氨基酸类神经递质含量。结果 6种氨基酸在20 min内洗脱完全,分离效果良好;在6.25～400μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0.99;6种氨基酸日内试验精密度范围为1.38%～7.59%;日间试验精密度为2.7%～8.68%;6种氨基酸回收率不低于80%。结论改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度较高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质含量。

HPLC柱后光衍生法测定珠子参中两类真菌毒素残留量

目的:建立免疫亲和柱净化HPLC柱后光化学衍生法测定珠子参药材中真菌毒素(AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、OTA)的方法。方法:参考2015年版《中华人民共和国药典》及相关文献对珠子参药材中真菌毒素(AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、OTA)进行测定。结果:本实验采用的柱后光衍生荧光检测法测定的AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、OTA的检测下限分别为0.19、0.63、0.19、0.56、4.0μg·kg-1,珠子参药材真菌毒素回收率为78%~110%。结论:实验结果表明柱后光衍生荧光检测法具有更高的灵敏度,且该分析方法适合于珠子参药材及饮片中这些真菌毒素的检测。

液相荧光法检测乳制品中9种氨基糖苷类药物残留

本文建立了高效液相色谱荧光检测乳制品中的9种氨基糖苷类药物残留方法。样品用10%三氯乙酸提取,采用MCX固相萃取小柱净化,C18色谱分离,流动相采用乙腈:庚烷磺酸钠缓冲溶液梯度淋洗,柱后用次氯酸钠溶液氧化,邻苯二醛(OPA)衍生,荧光检测。9种氨基糖苷类药物加标回收率在69.8%-110.2%之间,方法的定量限为0.008-0.04mg/kg,精密度RSD在1.2%-10.1%之间。

柱后衍生高效液相色谱法测定食用植物油中的黄曲霉素B_1的含量

目的:建立柱后衍生高效液相色谱法测定食用植物油中黄曲霉素Bl的含量。方法:采用免疫亲和柱提取样品中的黄曲霉素Bl,利用柱后衍生系统和高效液相色谱法相结合,检测食用植物油中黄曲霉素Bl的含量,并与国家标准规定的薄层荧光法相比较。结果:高效液相色谱法中黄曲霉素Bl的线性范围为10.2~51.0 ng·ml^(-1),r=0.999 6,平均回收率为87.3%(RSD=0.96%,n=6),检出限量可达1μg·kg^(-1)。结论:该方法简便、快速、灵敏度高,利于大量批次样品检测,可作为常规手段推广应用。

柱前衍生-高效液相色谱荧光法测定粮谷类食物中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2

目的分析粮谷类食物中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,为建立食品中黄曲霉毒素的限量标准提供依据。方法建立免疫亲和层析柱净化、柱前衍生、高效液相色谱荧光检测器测定的方法,并分析食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。结果在0.15 ng/ml^50 ng/ml时,所得回归方程的相关系数均>0.99。黄曲霉毒素B1、G1方法检出限为0.10 ng/g,黄曲霉毒素B2、G2方法检出限为0.03 ng/g。该方法的精密度为0.13%~9.5%,加标回收率为70%~106%。花生酱、米粉样品中检出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,大米、玉米渣未检出黄曲霉毒素。结论该方法灵敏度和准确度较高,适用于粮谷类食品中黄曲霉毒素的检测。本研究中有样品检出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,但其含量均没有超过国家限量标准。

邻苯二甲醛-柱后衍生-高效液相色谱荧光法测定功能型饮料中的牛磺酸

目的建立功能型饮料中牛磺酸的柱后衍生-高效液相色谱荧光法。方法样品稀释后直接进样,柱后OPA衍生,荧光检测器检测,外标法定量。色谱条件:流动相:乙腈-水(20∶80,V/V);柱后衍生反应温度:55℃;荧光检测器激发波长:330 nm;发射波长:450 nm。结果牛磺酸的浓度为0μg/L^80μg/L时,标准曲线线性关系良好,线性相关系数(r)为0.999 9,检出限为1μg/L,相对标准偏差(RSD)为0.2%~1.0%,加标回收率为97.2%~102.8%,精密度和准确度符合检测要求。结论本方法具有选择性好、精密度高和准确度好等优点,而且由于采用荧光检测器,大大提高了灵敏度,可采取大体积稀释,更易排除其他组分的干扰,更简便,更快捷,适用于日常的检测工作中。

柱前衍生-超高效液相色谱荧光法同时测定啤酒中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2

目的建立柱前衍生-UPLC-FLD法测定啤酒中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法。方法样品直接经过乙腈稀释提取,提取液经过离心后,取上清液用多功能柱净化,净化液经氮气吹干、用三氟乙酸衍生后,经定容、微孔滤膜过滤、进液相色谱分析,以ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm,1.8μm）分离,荧光检测器检测,外标法定量。结果 4种黄曲霉毒素线性范围较宽,相关系数r在0.999 2-0.999 6之间,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2检出限分别为0.05、0.02、0.08、0.02μg/kg。加标回收率90.47%-108.17%之间,回收率的RSD在0.97%-8.13%之间。结论本法操作简便、准确度好、精密度高,干扰性小,能满足啤酒中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的同时测定。

免疫亲和柱萃取—液相色谱柱后衍生荧光法检测黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2

目的:本文研究了同时测定黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2(AFB1、AFB2、AFG1、AFG2)的方法。方法:使用免疫亲和柱富集净化,以每升流动相含有0.120 g溴化钾和350μl 4 mol/L硝酸的水:甲醇:乙腈(6:3:2)为洗脱液,高效液相色谱电化学柱后衍生,荧光法测定。结果:方法的选择性较好,线性关系(r>0.999),线性范围:AFB1为0.07μg/kg^9.08μg/kg;AFB2为0.02μg/kg^2.70μg/kg;AFG1为0.07μg/kg^9.0μg/kg;AFG2为0.03μg/kg^2.79μg/kg,相对标准偏差0.5%~3.5%之间,检测限和定量限值(μg/kg):AFB1为0.02,0.07;AFB2为,0.01,0.02;AFG1为0.02,0.07;AFG2为0.01,0.03,回收率为80%~105%。结论:该方法快速、准确,能同时测定AFB1、AFB2、AFG1。