HPLC-CL联用在线检测消癌平注射液清除H2O2及O2·-自由基活性

目的:利用HPLC-CL在线检测消癌平注射液(通关藤)对H2O2和O2·-自由基的清除活性,追踪其物质基础。方法:消癌平注射经HPLC后进入T型混合管(内含鲁米诺+过氧化氢溶液和鲁米诺+连苯三酚),记录化学发光信号结合LC-MS/MS鉴定其结构。结果:已鉴定出3-咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸和4-咖啡酰奎尼酸3种物质,清除自由基能力较强。结论:消癌平注射液中酚酸类成分对其清除H2O2和O2·-自由基有很大贡献;HPLC-CL在线联用技术简单、快速,可用于中药抗氧化活性成分的筛选。

柱前衍生-高效液相色谱法检测魔芋飞粉中的神经酰胺

建立了一种柱前衍生-高效液相色谱测定魔芋飞粉中神经酰胺的方法。将神经酰胺与氢氧化钾乙醇溶液在高温条件下进行脱酰基反应,再与9-氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)衍生化试剂反应,高效液相色谱分离后,采用紫外或荧光检测器检测。考察并确定了脱酰基以及衍生化反应的最佳条件,在110℃条件下用0.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液对神经酰胺标品或样品处理1.5 h,然后用10 mg/mL的FOMC-Cl对其进行在线衍生。采用Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm, 5μm)分离,甲醇/水/磷酸(体积比10/90/0.05)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为266 nm和305 nm;紫外检测器波长为262 nm。在神经酰胺浓度为20~500μg/mL范围内方法的线性关系良好,其中紫外检测器检测的相关系数(R^(2))为0.9978,荧光检测器检测的R2为0.9978,回收率为97.3%~103.6%,相对标准偏差<1.64%。所建立方法采用紫外和荧光检测器测定目标物的检测限分别为0.48μg/mL和0.0082μg/mL,定量限分别为1.6μg/mL和0.027μg/mL。

沉淀敲出法快速发现霍山产铁皮石斛生物碱及其组分抗氧化活性在线测定

为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组分,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定铁皮石斛的生物碱组分。结果表明,在本实验条件下,霍山产铁皮石斛中检出的5种生物碱中有4种可降低鲁米诺-双氧水发光体系的发光值。HPLC-UV-CL可用于铁皮石斛生物碱清除自由基活性快速测定。实验结果可为铁皮石斛质量控制、抗氧化活性成分定向分离的研究提供依据。

高效液相色谱-高锰酸钾氧化化学发光法测定水中的痕量苯二酚

基于酸性介质中甲酸对高锰酸钾-苯二酚氧化发光反应的增敏作用建立了高效液相色谱-化学发光柱后检测苯二酚的新方法。优化了高锰酸钾-苯二酚氧化发光反应及高效液相色谱分离苯二酚的条件，用甲醇，0．1mmol／L β-环糊精水溶液（体积比为30：70）作为流动相可实现对水中3种苯二酚异构体的分离，且能与高锰酸钾-苯二酚氧化化学发光反应条件很好地偶合。对所测定的苯二酚异构体，方法的线性范围达两个数量级；以信噪比为3测得邻、间、对苯二酚的检出限（n=3）分别为：5．2，4．7，3．2μg／L，对质量浓度均为0．10mg／L的3种苯二酚混合溶液连续测定11次，邻、间、对苯二酚的相对标准偏差分别为2．8％，3．4％，6．5％。将该方法与固相萃取技术相结合，对河水中的痕量苯二酚进行了测定，加标回收率为92．1％～95．4％。

固相萃取-高效液相色谱法测定七种痕量生物胺

研究了固相萃取-高效液相色谱法测定痕量7种生物胺(色胺、酪胺、组胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺)的方法。7种不同生物胺的标样混合溶液与荧光衍生剂丹酰氯在特定条件下衍生,衍生后通过C18固相萃取柱净化、富集,InertsilODS-3色谱柱分离,荧光检测器检测,流动相为乙腈和水梯度洗脱20min,流速为1mL/min。变异系数(CV%)为0.51～2.23,检测低限为1.29×10-6～2.57×10-4μg/mL。

小肽不同高效液相色谱柱前衍生化反应的实验研究

分别用氯甲酸-9-芴基甲酯（9-fluorenylmethylchloroformate，FMOCCl）、9-芴基甲氧基甲酸琥珀酰亚胺类酯（9-fluorenylmethoxy carbonyl succinimide，FMOC-OSU）和丹磺酰氯（1-dimethylaminonaphthalene-5-sulfonyl-chloride，Dns-Cl）为衍生化试剂对小肽进行了衍生化反应.研究和比较了各种衍生试剂用量、衍生缓冲体系pH条件、衍生化时间等因素对衍生反应的影响及衍生产物的稳定性.结果发现，FMOC-Cl对肽的衍生反应速度快，衍生反应完全，衍生产物稳定.

DABS-Cl柱前衍生-HPLC法测定豆豉中的γ-氨基丁酸含量

建立DABS-Cl柱前衍生-HPLC法测定豆豉中的γ-氨基丁酸,样品使用10%三氯乙酸超声提取,经磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-Cl)衍生,默克RP C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相A(乙腈∶甲醇为75∶25),流动相B(0.04mmol/L醋酸钠,pH为7.3),检测波长430nm;该方法线性范围为1.50~24.00μg/mL,R=0.9997。重现性相对标准偏差为3.17%,加样回收率为100.83%,该方法样品前处理步骤简单、测定快速、灵敏度高,可用于对该类豆制品物质的测定。

应用RP-HPLC对芳香胺定量分析方法的研究

以氯甲酸 9 芴基甲酯 (FMOC Cl)为柱前衍生试剂 ,对 9种单环芳香胺 (邻甲苯胺、4 氯邻甲苯胺、苯胺、2 ,4 ,5 三甲基苯胺、3 氨基对甲苯甲醚、对氯苯胺、4 氨基联苯、邻氨基苯甲醚、2 萘胺 )进行了高效液相色谱分离和定量分析方法研究 .对衍生反应的最佳条件进行了摸索 .FMOC Cl对单环芳香胺的衍生反应速度快 ,衍生产物稳定 ,衍生完全 .衍生化明显改善了芳香胺色谱峰的峰形 ,获得了满意的分离效果 .

固相萃取-高效液相色谱化学发光法测定食品中微量苏丹红染料

以C18固相萃取（SPE）小柱净化样品，富集苏丹红，并基于苏丹红Ⅰ～Ⅳ对鲁米诺一KIO。体系发光强度的增敏作用，建立了同时测定苏丹红染料的新方法。实验采用PursuitC18色谱柱（250×4．6mm，i．d．，5gm），以乙腈～水体系为流动相进行梯度洗脱，在0．001～0．50gg／mL范围内，苏丹红工～Ⅳ的浓度与发光强度呈良好的线性关系，相关系数在0．9981以上，苏丹红工～Ⅳ的检出限分别为0．3、0．2、0．3、0．2ng／mL，加标回收率在90．0％～96．7％之间。该方法能有效地去除基质干扰，具有简单、快速、灵敏的特点，适用于苏丹红染料的分析检测。

对酞内酰胺苯磺酰氯柱前衍生HPLC法测定仲丁胺残留量

本实验采用对酞内酰胺苯磺酰氯（Ｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｙｌ－ｂｅｎｅｚｅｎｅｓｕｌｐｈｏｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ，简称Ｐｈｉｓｙｌ－Ｃｌ）衍生反相ＨＰＬＣ法进行仲丁胺残留分析，以紫外检测器测定，最低检出限６．２ｐｍｏｌ。

新型荧光衍生试剂用于尿样中痕量游离雌二醇和雌三醇的反相高效液相色谱-荧光检测和质谱定性

合成了新型高灵敏度的荧光标记试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC)。采用EASC柱前衍生化实现了雌二醇(E2)和雌三醇(E3)的反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光分析及柱后质谱鉴定。试剂EASC比丹磺酰氯(DNS-Cl)具有更高的紫外、荧光和质谱检测灵敏度,其荧光发光强度是丹磺酰氯的1 000倍以上。EASC与E2和E3在NaHCO3缓冲液(pH10.5)中,于60℃下反应3min即可获得稳定的荧光产物,最大激发波长(λex)和最大发射波长(λem)分别为270nm和430nm。所建立的方法具有良好的重现性,线性回归系数大于0.999 0;检出限(S/N=3)为31fmol和40fmol。对实际根田鼠尿样中的雌二醇和雌三醇含量进行了测定,结果令人满意。

DABS-Cl柱前衍生高效液相色谱法测定海参中羟脯氨酸含量

建立了测定海参中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量的高效液相色谱法。样品经酸水解后,用4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(DABS-Cl)衍生,以乙腈-柠檬酸溶液为流动相梯度洗脱,经C18柱分离,436nm下紫外检测器检测。结果表明,羟脯氨酸衍生物与样品基质很好分离,在40～2000μg/L范围内线性关系良好(r>0.999),平均回收率84.2%～104%,RSD<10%。此法灵敏、准确,适用于海参中羟脯氨酸含量的测定。

HPLC测定8－CL－CAMP血药浓度的方法研究

本文介绍用反相ＨＰＬＣ法测定兔血清及人血清中８－ＣＬ－ＣＡＭＰ的浓度。以化合物ＣＡＭＰ［Ⅱ］为内标，血样用甲醇作蛋白沉淀剂，使用ＫｅｓｈｅｎｇＯＤＳＣ_（１８）（４．６ｍｍ＝×２５０ｍｍ，１０μｍ）色谱柱，流动相为０．０２ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾－甲醇（９２∶８），检测波长为２５９ｎｍ，药［Ⅰ］和内标［Ⅱ］峰的分离度好。保留时间分别为３６ｍｉｎ和２２ｍｉｎ，血药浓度的线性范围在１００～１０００ｎｇ／ｍｌ，最小检测浓度为５０ｎｇ／ｍｌ。此方法简便、灵敏度高。

空气中CL-20粉尘测试方法研究

以六硝基六氮杂异伍兹烷为例,研究建立了工作场所空气中火炸药成分浓度的紫外分光光度和高效液相色谱测定方法。经过试验和验证,方法各项指标符合《工作场所空气中毒物检测方法的研制规范》的要求,适用于工作场所空气中火炸药成分浓度的测定,为制定空气中火炸药测定方法的国家军用卫生标准提供了依据。

动物源食品中四环素、土霉素、盐酸克伦特罗HPLC-PDA同时快速检测方法的研究

[目的 ]建立动物源性食品中抗生素、盐酸克伦特罗的高效液相色谱 (HPLC)分析方法。 [方法 ]以WatersNova PakC184μm柱为分析柱 ,Na2 HPO4∶乙晴为 75∶2 5 ,Waters 2 695二极管矩阵检测器 (PDA)为检测器。 [结果 ]线性回归方程和相关系数为 :土霉素 y =0 5 5 0 0 7x -0 0 0 4176,r =0 99980 ;四环素y =0 5 945x + 0 0 2 764 ,r =0 9998;盐酸克伦特罗 y =0 0 14 3 5x + 0 0 2 63 46,r =0 9975。平均回收率为 93 82 5 %、93 760 %和 94 745 %。[结论 ]HPLC PDA法同时检测动物源性食品中的土霉素、四环素和盐酸克伦特罗 ,定性准确 。

柱前衍生-高效液相色谱法检测安立生坦的手性拆分剂L-脯氨酸甲酯

采用4-氯-7-硝基苯-2-（嗯）-1,3-二唑（NBD-Cl）作为柱前衍生试剂,建立了柱前衍生化-高效液相色谱法（HPLC）结合荧光检测器测定安立生坦合成过程中使用的手性拆分剂L-脯氨酸甲酯的方法.考察了衍生反应温度、时间、衍生试剂加入量、缓冲液pH对L-脯氨酸甲酯衍生反应的影响.结果表明,衍生反应优化条件为：反应温度60℃,反应时间60 min,衍生试剂加入量为每毫升反应体系中加入0.3 mg NBD-Cl,衍生反应缓冲液pH为9.0.同时对此方法进行了方法学验证,L-脯氨酸甲酯在0.625～7.5 μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 4;检测限为2.5×10-3μg/mL,定量限为7.5×10-3μg/mL;平均回收率为91.9％～ 106.4％;重复性实验中RSD为0.33％;此方法耐用性良好,L-脯氨酸甲酯样品溶液及衍生产物溶液体系稳定.此方法灵敏、简便、专属性强,能对安立生坦原料药中残留的杂质L-脯氨酸甲酯进行检测及定量分析.

高效液相色谱-DAD-化学发光法在线检测麦冬清除超氧阴离子活性

利用高效液相色谱-DAD-化学发光法(HPLC-DAD-CL)在线检测麦冬对超氧阴离子(O2.-)的清除活性,追踪其抗氧化活性的物质基础。将麦冬水提物分成乙醚和正丁醇两个萃取部位,以化学发光的降低作为检测指标,测定麦冬中主要活性成分对邻苯三酚-鲁米诺-碳酸缓冲液体系产生的O2.-的清除能力,并利用HPLC-DAD-MS/MS和对照品对其进行结构鉴定。采用槲皮素为阳性对照,通过标准效价方程分别评价了主要活性成分的抗氧化活性。研究结果表明,麦冬中直接清除超氧阴离子作用主要来自乙醚部位中的高异黄酮成分。HPLC-DAD-CL在线联用技术简单、快速,可用于中草药抗氧化活性成分的筛选。

HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸中不同衍生方式的比较研究

针对HPLC法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸（GABA）所用衍生剂缺乏系统的比较分析,研究了3种常见衍生剂及其色谱方法比较。以邻苯二甲醛（OPA）、丹磺酰氯（Dansyl-Cl）、6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）3种物质作为柱前衍生剂,色谱柱为intertsil ODS-C18柱（前两者使用）、Waters AccQ Tag氨基酸分析柱,均为梯度洗脱,紫外吸收波长分别为332 nm、386 nm、250 nm,线性方程分别为Y=9.0×106X＋2062.5（R2=0.9989）、Y=7.0×106X＋11337（R2=0.9982）、Y=7.1×106X＋10025（R2=0.9999）,检出限分别为0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.001 mg/mL,同一样品中测得GABA峰面积的RSD分别为1.16%、1.98%、0.94%,加标回收率分别为98.5%～106.9%、95.8%～110.6%、99.4%～103.4%,同一样品中测得GABA含量分别为11.24、10.67、13.47 mg/100 g干重。从上述结果得知,HPLC法测定GABA的3种衍生剂中,测定结果最准确的是AQC,其次是OPA和Dansyl-Cl。AQC作为一种新型衍生剂,在γ-氨基丁酸乃至氨基酸分析中前景广阔。

柱前衍生化RP-HPLC法检测聚明胶肽注射液中交联剂残留量

目的：建立测定聚明胶肽注射液中残留交联剂六亚甲基二异氰酸酯水解产物1,6-己二胺含量的柱前衍生化RP-HPLC法,用于控制注射液中交联剂残留量。方法：采用丹酰氯作为衍生化试剂,色谱柱为Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm,5 m）,流动相为甲醇-水-醋酸铵-醋酸（75：25：0.2：0.2）,检测器为荧光检测器（激发波长：340 nm,发射波长：515 nm）,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为30℃,进样量为20μL。结果：制剂中其他成分无干扰,1,6-己二胺在0.0510.0 mg·L-1范围内的质量浓度与其双丹酰化衍生物峰面积的线性关系良好（r=0.9988）,平均回收率为96.79%（RSD=13.6%,n=6）,测得各批号注射液中1,6-己二胺的含量均小于5.0 mg·L^-1。结论：该方法灵敏度高,专属性强,准确性好,适用于聚明胶肽注射液中1,6-己二胺含量检测及交联剂残留量控制。

乙醇萃取-HPLC法快速分析亚麻籽油中四种环肽研究

本文旨在利用乙醇快速富集亚麻籽油环肽,以期替代柱层析富集环肽法。在常温下,95%乙醇与亚麻籽油以料液比(g/mL)为5∶8震荡混合5 min,随后,将其在6 000 r/min下离心5 min,重复富集3次,收集上层清液并在40℃旋蒸,除去溶剂,用甲醇定容,根据HPLC外标法建立标准曲线,对环肽A、环肽C、环肽D和环肽E进行定量分析。通过加样回收试验可得,环肽C、环肽E、环肽D和环肽A的标准样品加样回收率分别为:99.5%、104.6%、109.7%、97.6%,相对标准偏差RSD分别为:1.4%,2.0%,2.5%和1.4%,证明了乙醇富集亚麻籽油环肽的方法准确可靠。此外,乙醇萃取法与传统的正相SPE硅胶柱分离法相比,操作简单,溶剂用量节省,富集效果更好。