HPLC-DPPH法评价雪松松针抗氧化活性成分

目的评价雪松松针抗氧化活性成分。方法以维生素C(VC)和没食子酸为阳性对照,采用高效液相色谱(HPLC)法测定1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)溶液加入雪松松针抗氧化活性成分后DPPH峰面积的衰减情况,并通过计算DPPH自由基的清除率和半数抑制浓度(IC_(50)),来评价雪松松针3种有效部位及8个单体成分的抗氧化活性。采用Agilent Eclipse Plus-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-水(62∶38,V/V)为流动相;检测波长为517 nm;流速为1.0 mL/min;柱温为25℃;进样量为20μL。结果雪松松针各有效部位清除DPPH自由基活性的能力大小依次为总黄酮>总多酚>总木脂素,IC_(50)分别为76.10、100.50、115.40μg/mL。与阳性对照比较,除山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷外,7个单体化合物清除DPPH自由基活性的能力大小依次为二氢杨梅素>金丝桃苷>原儿茶酸>没食子酸>阿魏酸>杨梅素>山柰酚-3-O-(6″-O-E-阿魏酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷>VC>异鼠李素,IC50分别为16.50、19.40、23.73、27.24、32.10、32.20、47.60、93.20、297.20μg/mL。结论建立了HPLC-DPPH法用于评价雪松松针抗氧化活性;雪松松针具有较强的抗氧化活性,其中有效部位总黄酮、总多酚及单体成分二氢杨梅素、金丝桃苷等是具有开发前景的纯天然抗氧化剂。

HPLC-DPPH法在线分析远志抗氧化活性成分研究

建立了远志抗氧活性成分的在线快速分析方法,为其药效物质筛选研究提供了支持。采用HPLC-DPPH在线分析方法,结合对照品保留值对照与活性测定,确定了活性成分,采用抗氧化阳性样品对照分析了活性成分的抗氧化活性强度。结果表明,远志中,3,6’—二芥子酰基蔗糖、西伯利亚远志糖酯A6为主要抗氧化活性成分。在线快速分析方法简捷、高效,适用于中药远志的抗氧化活性成分的快速筛选。

HPLC-DPPH在线联用技术评价茶的抗氧化活性

基于"谱效整合指纹图谱"的研究思路,构建了HPLC-DPPH在线联用技术,并将该技术应用于茶的抗氧化活性分析。将获得的11批不同品牌茶样品的化学指纹峰(谱)和活性指纹峰(效)的数据进行统计分析处理,换算出11批茶样品的总抗氧化活性。结果显示,不同品牌茶的总抗氧化活性差异较大。该方法可以对茶等保健品中的相关活性物质进行鉴别和定量检测,可以作为对保健品及中药进行质量控制的参考方法。

HPLC-DPPH快速测定枳壳抗氧化活性成分

目的:为高效利用枳壳(Aurantii Fructus)中活性成分,建立测定枳壳中活性成分柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的方法,并同时评价其抗氧化能力。方法:采用高效液相色谱联用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(HPLC-DPPH)技术,Agilent-ZORBAX SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.04%磷酸水(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱程序,检测波长:283 nm,柱温:25℃,流速:0.8 m L·min-1。结果:柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷质量分数分别为52.64、2.41、34.27 mg·g-1;抗氧化能力贡献率(AA*):柚皮苷(58.9%)>新橙皮苷(38.3%)>橙皮苷(2.8%),DPPH自由基清除率(AA**):柚皮苷(47.8%)>橙皮苷(38.1%)>新橙皮苷(36.2%)。结论:本文通过建立HPLC-DPPH法对枳壳抗氧化活性成分进行测定和评价,为开发利用枳壳中抗氧化活性成分提供一种新思路。

HPLC-DPPH在线联用技术评价制首乌的抗氧化活性

建立高效液相色谱-1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(HPLC-DPPH)在线联用技术对3种不同炮制方法的制首乌抗氧化活性进行了评价。通过分析16批制首乌样品的化学指纹峰(峰)和活性指纹峰(效),建立量效关系方程,并以活性加和的方式量化各批次何首乌的抗氧化总活性。结果表明,所建立的HPLC-DPPH在线联用技术可评价不同批次不同炮制方法的制首乌抗氧化活性,为制首乌的质量评价提供了数据支持和科学依据。

在线HPLC-DPPH指导反相液相色谱从沙棘中分离一种DPPH抑制剂

采用在线高效液相色谱-1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(在线HPLC-DPPH)活性筛选系统,结合中、高压反相液相色谱,定向分离沙棘中自由基抑制剂.该方法可以实现从沙棘复杂成分中对目标成分进行富集并快速识别活性成分.通过高压反相液相色谱对目标峰进行分离纯化,并利用ESI-MS和NMR数据对化合物进行结构鉴定.结果表明,该方法能够快速、高效地从沙棘中识别分离纯化自由基抑制剂,为进一步进行药理活性研究和从天然产物中快速制备具有抗氧化活性黄酮类化合物提供参考.

HPLC-DPPH评价剑叶龙血树中抗氧化活性成分及构效关系

目的采用HPLC-DPPH法评价剑叶龙血树主要成分的抗氧化活性并分析其构效关系。方法采用HPLC法测定剑叶龙血树中自藜芦醇、龙血素A、龙血素B、紫檀芪、7,4′-二羟基黄酮,色谱条件:PhenomenexluraC_(18)(250mmn×4.6mmn,5μm)色谱柱,甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长306 nm。通过对比剑叶龙血树药材溶液加1,1二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)反应前后的各化合物色谱峰面积衰减情况,以各化合物峰面积比值计算清除率,评价各化合物抗氧化活性。结果二苯乙烯类、二氢查耳酮类成分为剑叶龙血树中主要抗氧化活性成分;抗氧化能力强弱依次为紫檀芪(清除率73.19%)>白藜芦醇(清除率71.10%)>龙血素B(清除率39.01%)>龙血素A(清除率12.14%)。从构效关系上分析,二苯乙烯类化合物,当羟基甲基化后,其抗氧化能力并未减弱;二氢查耳酮类化合物,苯环上甲氧基取代成对称结构有助于发挥其抗氧化能力;而仅有C7,4′位羟基取代的黄酮类化合物未显示抗氧化活性。结论建立的HPLC-DPPH评价方法能量化表达剑叶龙血树中主要抗氧化成分,为筛选药效指标成分及建立全面谱效相关质量标准奠定基础。

HPLC-DPPH在线法筛选黄芩提取物中抗氧化活性成分

目的建立HPLC-DPPH在线筛选法筛选中药提取物中抗氧化活性成分,对黄芩根、茎、叶提取物进行在线抗氧化活性筛选,比较10个不同产地黄芩根提取物中抗氧化活性成分差异。方法HPLC-DPPH在线筛选系统中HPLC流动相为乙腈-甲酸水(pH=3),梯度洗脱,体积流量为1mL/min,色谱柱为Spherigel C18柱,柱温25℃,检测波长为276nm;DPPH反应体系中NaHCO3体积流量为0.1mL/min,NaHCO3质量浓度为0.1μg/mL;DPPH体积流量为0.5mL/min,DPPH质量浓度为10μg/mL,检测波长517nm。结果黄芩根、茎、叶提取物均具有抗氧化活性,但所含抗氧化活性成分有较大差异。黄芩根提取物中抗氧化活性成分因产地不同而不同,道地药材河北承德黄芩提取物中含有7种抗氧化活性成分,其中有3种抗氧化活性成分是其他产地黄芩所不具有的,但10种产地黄芩提取物中都含黄芩素、黄芩苷、二氢黄芩苷、去甲基汉黄芩素、野黄芩苷这5种抗氧化活性成分。结论该法适用于中药提取物中抗氧化活性成分的筛选,具有快速、准确、直接、重现性好的特点。

HPLC-DPPH·-UV/Vis-MS法筛选窄叶鲜卑花叶提取物中的抗氧化活性成分

目的:利用HPLC-DPPH·-UV/Vis-MS技术筛选并鉴定窄叶鲜卑花叶中的抗氧化活性成分,并比较不同产地的差异。方法:窄叶鲜卑花叶提取物通过Agilent 1260液相色谱系统进行分离,流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为325 nm;DPPH·反应液用岛津SPD^(-1)0Avp系统输送,检测波长为517 nm。通过单因素试验优化抗氧化活性物质的筛选方法。利用电喷雾飞行时间质谱(负离子模式),得到各个组分的结构信息,并结合对照品及相关文献进行鉴定。结果:在线衍生的最佳条件为DPPH·甲醇溶液,浓度为30μg·m L^(-1),流速为0.3 m L·min^(-1),PEEK反应管(0.254 mm)长度为11 m。从窄叶鲜卑花叶中筛选出14个抗氧化活性物质,其中7个成分得到鉴定,10个为不同产地样品共有成分,青海西宁市郊和祁连县样品含较为丰富的抗氧化成分。结论:该筛选方法快速、准确、重现性好,适用于窄叶鲜卑花叶中抗氧化活性物质的筛选。

猴耳环双标多测法及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分快速筛选法的建立

目的:建立猴耳环中5个成分的双标多测法及其抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的快速筛选法。方法:采用HPLC法,以双标线性校正法准确定位猴耳环中5个成分色谱峰,以没食子酸为参照物,计算没食子酸与其余4个成分的相对校正因子,对各成分进行定量,将所得结果与外标法进行比较。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法快速筛选猴耳环中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。结果:双标线性校正法相比于相对保留时间更能准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间;相对校正因子法和外标法结果的RSD<2.00%。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法可以快速筛选出猴耳环中7-没食子酰基特利色黄烷、杨梅苷等不同程度抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。结论:该研究建立的双标多测同时测定猴耳环中5个成分的方法准确可行,采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法能快速、灵敏、高通量筛选猴耳环中的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。

总氧自由基清除能力法研究进展

总氧自由基清除能力法(Total Oxyradical Scavenging Capacity Assay,TOSCA)是一种基于气相色谱(gas chromatography,GC)技术的定量抗氧化能力的有效方法。该文系统介绍了TOSC法的原理、方法及特点,其与HPLC-DPPH在线联用技术法的对比;并综述近年来TOSC法的国内外研究进展,尤其是在抗氧化药物评价中的应用;阐述了TOSC法作为一种以GC为基础的,反映整体性和综合性抗氧化作用的评价方法,应当在中药抗氧化评价中给予一定重视。

HPLC-DAD-MS-DPPH在线筛选与定性黑脉羊肚菌抗氧化活性成分

为建立在线高效液相色谱-高分辨质谱-2,2-二苯代苦味酰基苯肼(high-performance liquid chromatogra phy-diode array detection-mass spectrometry-DPPH,HPLC-DAD-MS-DPPH) 快速筛选和定性黑脉羊肚菌(Morchella angusticeps)中抗氧化活性成分的方法,对黑脉羊肚菌样品的水提物、50%乙醇提取物、95%乙醇提取物和氯仿提取物进行检测,并应用高分辨质谱对筛选所得抗氧化活性成分进行定性分析.结果 显示,黑脉羊肚菌水提物抗氧化活性最优,筛选获得抗氧化活性成分3个,应用高分辨质谱进行定性分析,获得抗氧化成分分别为山梨醇、未知化合物和柠檬酸.故可知,黑脉羊肚菌抗氧化活性成分主要为水溶性小分子极性化合物,以水提取物中含量最为丰富.本方法直观、快速、准确,适用于复杂天然产物中抗氧化活性成分的快速筛选与定性.

芙蓉李中抗氧化活性成分的高通量筛选评价

目的:建立快速筛选芙蓉李中抗氧化活性成分的HPLC-DPPH·法,比较各活性成分清除自由基的抗氧化能力。方法:通过HPLC-DPPH·法,比较芙蓉李总多酚抗氧化提取物中分离的8个活性成分与DPPH·反应前后峰面积下降的百分比,筛选出抗氧化活性成分,通过计算各化合物的IC50值,评价它们的抗氧化能力大小。结果:已分离的芙蓉李总多酚抗氧化提取物中的8个代表性成分均具有抗氧化活性;在一定浓度范围内,表现出明显的浓度依赖性;对DPPH·的清除能力从大到小顺序依次为:槲皮素-3-O-L-呋喃阿拉伯糖苷>槲皮素>(-)-表儿茶素>化合物1>芦丁>化合物3>化合物2>柚皮素-7-O-β-葡萄糖苷。结论:芙蓉李总多酚抗氧化提取物中分离的8个代表性活性成分具有较强的体外抗氧化活性,可作为有效的天然自由基清除剂,芙蓉李总多酚抗氧化提取物的活性也与它们有关,故均具有广阔的开发利用前景。HPLC-DPPH·法快速直观,操作简便,重复性良好,可作为抗氧化活性成分高通量筛选的评价方法。

植物多酚清除自由基活性高通量筛选技术研究

目的:构建植物化学物在线清除自由基活性高通量筛选技术,创建植物化学物抗氧化活性研究新方法。方法:以附带2个检测器的高效液相色谱(HPLC)装置和流动注射技术为手段,引入二苯基三硝基苯肼(DPPH)有机自由基分别与经HPLC分离的植物化学物发生在线清除反应,优化流速、反应管尺寸等条件,比较反应前后DPPH吸收信号的变化。结果:确定和验证了两类植物多酚化学物茶多酚和丹酚酸在线清除自由基活性HPLC-DPPH表征方法。反应环聚醚醚酮(PEEK)盘管规格为长10m、内径0.254mm,DPPH·浓度为1.0×10-5mol/L,流速为0.7～0.8ml/min。结论:HPLC-DPPH流动注射在线表征技术能够实现对多组分植物化学物抗氧化能力的高通量筛选。

基于导向分离的杜仲叶抗氧化活性成分研究

目的:建立高效液相色谱(HPLC)-1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)在线筛选系统分析杜仲叶抗氧化活性成分;应用制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)和高速逆流色谱仪(HSCCC)建立抗氧化成分的富集和分离方法。方法:采用大孔树脂AB-8对杜仲叶的提取物进行分离,收集水洗脱组分,采用HPLC-DPPH在线检测系统筛选抗氧化活性成分;应用Prep-HPLC对筛选目标抗氧化活性成分建立富集方法,并应用HSCCC纯化抗氧化活性成分。同时,结合分子对接和体外DPPH自由基清除率对其进行抗氧化活性评价。结果:采用HPLC-DPPH在线筛选系统及Prep-HPLC建立抗氧化活性成分的筛选和富集方法,并应用HSCCC色谱进一步分离纯化5个抗氧化活性成分,分别为儿茶素(1)、绿原酸(2)、咖啡酸(3)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(4)和槲皮素(5);通过分子对接和体外抗氧化活性实验进一步验证该5种化合物的抗氧化活性。分子对接显示,5种成分的结合能范围为−6.4~−4.8 kcal/mol,其中儿茶素和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷的结合能最大;体外DPPH自由基清除率显示,5种成分对DPPH自由基清除能力由大到小依次为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、儿茶素、槲皮素、咖啡酸、绿原酸。结论:应用HPLC-DPPH在线筛选系统和Prep-HPLC能够有效筛选和富集天然产物中的抗氧化活性成分,同时应用HSCCC能够实现活性成分的进一步纯化;分离得到的抗氧化活性成分中,儿茶素和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷均表现出较强的抗氧化活性。

15种柑橘果实主要酚类物质的体外抗氧化活性比较

为了明确柑橘果实主要酚类物质单体的抗氧化活性差异,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)法、2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiozoline-6)-sulphonic acid,ABTS)法、铁离子还原(ferric reducing/antioxidant power,FRAP)法3种离线法,以及两种在线高效液相色谱-DPPH/ABTS(high performance liquid chromatography-DPPH/ABTS,HPLC-DPPH/ABTS)柱后衍生系统联用技术分别对15种柑橘果实主要酚类物质单体的抗氧化活性进行测定和比较分析。结果表明:抗氧化活性综合(antioxidant potency composite,APC)指数可有效反应各单体的抗氧化活性,柑橘果实15种主要酚类物质抗氧化活性明显不同,4种酚酸的抗氧化活性最强,依次为:没食子酸(92.32%)>咖啡酸(85.29%)>绿原酸(69.75%)>阿魏酸(50.97%)。圣草酚(39.38%)、圣草次苷(39.36%)和芦丁(27.42%)的抗氧化活性中等,橙皮素、柚皮素、地奥司明、橙皮苷、川陈皮素、甜橙黄酮、柚皮苷和橘皮素的抗氧化活性较小(<5%)。酚羟基的糖基化或甲基化会都降低柑橘酚类物质的自由基清除能力,酚羟基数目越多,抗氧化活性越强。

酶辅助提取莲房原花青素工艺及其抗氧化活性研究

主要用纤维素酶和果胶酶对莲房组织进行酶解,以提高莲房原花青素提取率。采用四因素三水平正交实验对酶解时间、加酶量和酶解温度等提取工艺参数进行优化,获得了最佳工艺参数为纤维素酶添加量为0.7%,果胶酶添加量0.1%,酶解温度55℃,酶解时间2.5h,优化后的提取工艺与直接醇提法相比,能将莲房原花青素的提取率提高约48%。在此基础上采用DPPH法进行了抗氧化性的对比,结果表明酶辅助提取和醇提法提取的原花青素有着相同的抗氧化性。

贮藏条件对苹果多酚成分及抗氧化活性的影响

苹果是以鲜销为主的果品,属于典型的呼吸跃变型果实,贮藏条件对其品质的影响很大。本研究以红富士苹果贮藏地点的温度、湿度和气体成分作为影响贮藏效果的主要因素,检测同一贮藏期苹果的多酚含量、成分及DPPH自由基清除率。结果表明,在0℃、相对湿度95%、O2含量4%、CO2含量2%的贮藏条件下,苹果的DPPH自由基清除率为52.1%,多酚含量为25.7mg/mL,3个月内苹果的多酚成分变化不大。

补骨脂抗氧化活性指纹图谱研究

[目的]建立补骨脂抗氧化活性指纹图谱,评价不同产地补骨脂药材的抗氧化活性和明确抗氧化活性成分的贡献率。[方法]采用高效液相色谱-二极管阵列检测器-1,1-二苯基-2-苦基肼(HPLC-DAD-DPPH)方法。[结果]建立了补骨脂抗氧化活性指纹图谱,确定了补骨脂酚为最主要的抗氧化活性成分。[结论]抗氧化活性指纹图谱可用于补骨脂质量评价,为全面提高中药质量控制水平提供了新方法。

贮藏后期苹果的多酚组成及抗氧化性研究

对贮藏后期苹果不同部位的多酚组成及抗氧化性进行了初步研究。首先,利用HPLC和Folin-Ciocalteu法对苹果皮、肉及籽中多酚组成及含量进行了分析。之后,利用DPPH法对其抗氧化性也进行了检测。结果表明,贮藏后期苹果籽和肉中多酚类以绿原酸、花色素、栎精糖苷、儿茶素类为主,皮中多酚以绿原酸、根皮苷为主,而且苹果肉、籽中总酚含量远大于皮中总酚。总酚清除DPPH·自由基的能力也与其含量成正比。