高效液相色谱-电化学法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质及其代谢产物的方法学研究

目的:建立使用高效液相色谱-电化学法测定大鼠下丘脑、海马、皮质中单胺类神经递质及其代谢产物的方法,所测指标包括去甲肾上腺素(NE)、五羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)。方法:色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每1L中含辛烷磺酸钠2.5g,磷酸二氢钾13.6g,乙二胺四乙酸36mg,pH值3.3):甲醇:乙腈=78:19:3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V[1]。结果:脑组织中五种神经递质的保留时间分别为:去甲肾上腺素3.4min、五羟吲哚乙酸4.2min,高香草酸4.8min,多巴胺5.8min,5-羟色胺11.4min;最低检测限为4～16ng/mL。线性范围为20～320ng。脑组织样品的相对回收率为87.5%～113.9%,日内、日间精密度RSD小于7%。结论:该方法具有快速、准确、灵敏且样品制备简便等优点,可用于大鼠部分脑区内单胺类神经递质的分离测定。