HPLC-MS/ESI法同时检测血浆中4种非典型抗精神病药物

目的 建立同时测定血浆中的非典型抗精神病药利培酮、氯氮平、奥氮平和奎硫平HPLC-MS/ESI法。方法样品经碱化后用乙醚2次提取,采用NUCLEODUR C18(2.0 mm×125 mm,3μm)柱,水(甲酸:2.7 mmol·L-1,醋酸铵:10 mmol·L-1)-乙腈(53:47,v/v)为流动相,以地西泮为内标,电喷雾电离源正源(ESI+)选择离子峰检测。结果 氯氮平和奎硫平在20～1000μg·L-1内,利培酮和奥氮平在1～50μg·L-1内线性关系良好,4种药物的萃取回收率均>90％,方法回收率均>95％,日间差和日内差均<15％。结论 此方法准确、灵敏、简单,适用于这4种药物的常规治疗药物浓度监测(TDM)、药物动力学及代谢机制的研究。

HPLC-MS/ESI 法同时测定人血浆中盐酸特拉唑嗪盐酸哌唑嗪和甲磺酸多沙唑嗪

目的:建立同时测定血浆中盐酸特拉唑嗪、盐酸哌唑嗪和甲磺酸多沙唑嗪的 HPLC-MS/ESI 方法。方法:血浆样品0.5mL,加入10 ng·mL^(-1)二盐酸氟哌噻吨内标液50 μL,经饱和碳酸钠200 μL碱化和1.25 mL 正已烷-叔丁基甲醚(1:1)萃取;以Hypersil GOLD C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,5 μm)为固定相,20 mmol·L^(-1)醋酸铵(0.05%甲酸,pH 4.2)-乙腈-甲醇为流动相,梯度洗脱分离,流速为0.2 mL·min^(-1);采用 HPLC-MS,选择离子检测(SIM)法测定盐酸特拉唑嗪([M+H]^+,m/z 388)、盐酸哌唑嗪([M+H]^+,m/z 384)、盐酸多沙唑嗪([M+H]^+,m/z 452和内标氟哌噻吨([M+H]^+,m/z 435)的血药浓度。结果:线性范围为1～100 ng·mL^(-1),r>0.9930(n=7);萃取回收率大于83.0%;方法回收率大于97.0%;日内、日间精密度 RSD 均小于10.0%。结论:该方法灵敏、专属、快速,适用于3种药物的血药浓度监测,以及药代动力学和生物等效性的研究。

HPLC-MS/ESI^+测定人血浆中喹硫平及其代谢产物

目的建立同时测定人血浆中喹硫平及其磺氧化-、7-羟基-和7-羟基-氮-去烷基-代谢产物浓度的高效液相色谱-电喷雾电离质谱联用法。方法采用Kromasil C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以水(含甲酸1.70mmol.L-1,醋酸铵5.8 mmol.L-1)-乙腈(65∶35)为流动相,流速0.95 mL.min-1。质谱采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+),选择离子监测(SIR)各物质准分子离子峰,样品用固相萃取法处理。结果喹硫平和磺氧化喹硫平在10~2 000μg.L-1,7-羟基-喹硫平和7-羟基-氮-去烷基喹硫平在1~200μg.L-1线性关系良好,萃取回收率均>85%,方法回收率均>95%,日内、日间RSD均<15%。结论该方法专一性强、灵敏度高、简单,可用于研究喹硫平的代谢机制以及药物动力学。

HPLC-MS/ESI同时测定人血浆中文拉法新及其3种代谢产物

目的:建立一种快速灵敏的反相高效液相色谱-质谱联用法同时测定人血浆中文拉法新(VEN)和其3种代谢产物:氧云甲基文拉法新(ODV)、氮去甲基文托法新(NDV)和氮、氰双去甲基文拉法新(DDV)的浓度。方法:以艾司唑仑为内标,样本碱化后用乙醚捉取2次,合并有机相,40℃氮气吹干,100μL流动相定容;用 BDS HYPERSIL C_(18)反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)进行分离,以乙腈-缓冲溶液(30 mmol·L^(-1)醋酸铵+2.6mmol·L^(-1)甲酸+0.13 mmol·L^(-1)三氟乙酸)(40:60,v/v)为流动相,采用梯度洗脱程序,柱温为50℃,流速为1.0 mL·min^(-1)。采用质谱电喷雾电离源(ESI)将样品离子化,选择性离子监测(SIM)准分子离子和/或主要碎片离子峰。结果:VEN、ODV、NDV、DDV 以及内标艾司唑仑在6min 内完全分离;各物质在2～900 ng·mL^(-1)时线性关系良好,相关系数均大于0.9991;萃取回收率均大于77%;方法回收率均大于91%;最低检测浓度:VEN 0.4 ng·mL^(-1)、ODV0.2 ng·mL^(-1)、NDV 0.3 ng·mL^(-1)、DDV 0.2 ng·mL^(-1);日内日间RSD 均小于11%。结论:本方法简单快速,灵敏准确,可用于药物动力学、药物代谢机制以及血药浓度的临床监护、中毒分析的研究。

HPLC-MS/ESI测定人血浆中阿立哌唑的浓度

目的建立测定人血浆中阿立哌唑的HPLC-MS,并用于研究阿立哌唑在精神分裂症患者体内的药动学。方法血浆样品中加入内标艾司唑仑,用叔丁基甲醚萃取。色谱柱为Hypersil GOLD（2.1 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-30 mmol·L^-1醋酸铵缓冲液-甲酸（42∶58∶0.1）,流速0.35 mL·min^-1。采用电喷雾电离源正源（ESI^＋）,选择离子检测方式,用于定量分析的检测离子为m/z448,450（阿立哌唑）和m/z295（内标）。结果阿立哌唑在19.90-1 119.60μg·L^-1内线性关系良好（r=0.999 9）,最低定量质量浓度为1.00μg·L^-1（S/N=10）,方法回收率在97.2%-103.5%之间,日内与日间RSD均小于8.0%（n=5）。结论该方法灵敏度高,结果准确,适用于治疗剂量阿立哌唑体内药动学的研究。

基于HPLC-MS/MS的水体与土壤中多类抗生素分析方法研究

环境中抗生素残留的准确检测对于评估其生态风险具有重要意义。研究建立了基于HPLC-MS/MS(高效液相色谱-串联质谱)技术的水体与土壤中多类抗生素同步分析方法。通过优化色谱分离条件和质谱检测参数,结合固相萃取前处理技术,实现了四环素类、大环内酯类和β-内酰胺类抗生素的高效分离与超痕量检测。方法检出限达到pg/L级水平,线性范围为0.1~500μg/L,加标回收率为75.8%~95.7%。

Preclinical Evaluation of the Antidiabetic Effect and Phytochemical HPLC-MS ESI-QTOF Analysis of Sclerocarya birrea (A. Rich) Hoscht Bark of Trunk Aqueous Extract in Alloxan-Induced Diabetic Wistar Rat

Introduction: Diabetes is a serious public health problem requiring complex treatment. Numerous ethnopharmacological studies have reported the traditional use of Sclerocarya birrea in managing diabetic patients. This study aims to demonstrate, preclinically, the antidiabetic effects of the aqueous decoction of S. birrea trunk bark. Methods: Phytochemical analysis was performed by HPLC-MS. The effects of the extracts (Sb5 and Sb25) and 0.9% NaCl on the normal blood glucose levels of the animals were determined. Diabetes induction was performed intraperitoneally by administering a single dose of alloxan (150 mg/kg) in normoglycemic rats. The antidiabetic effects of the extracts (Allox + Sb5, Allox + Sb25) and glibenclamide (Allox + Glib5) were determined in Alloxan-induced diabetic animals for four weeks. Results: Interpretation of mass spectra obtained by HPLC-MS allowed the tentative identification of vanillic acid-4-sulfate and rhamnetin in Sb extract. Investigated doses of Sb extract showed an antidiabetic impact similar to the reference, glibenclamide, with a return to normal blood glucose in all treated rats only after 4 days of treatment. Furthermore, Sb extract treatments reduced weight loss in diabetic rats. Sb had no negative impact on the balance of total cholesterol, triglycerides, high-density lipoprotein (HDL), and low-density lipoprotein (LDL). Conclusion: The present study demonstrated the antidiabetic efficacy and, to some extent, the beneficial effects of Sb extract on Alloxan-induced diabetic rats’ health. Detection of antidiabetic phytochemicals such as vanillic acid-4-sulfate and rhamnetin would justify this pharmacological property of the aqueous decoction of S. birrea trunk bark.

HPLC-MS／ESI测定人血清中丙戊酸浓度

目的:建立HPLC-MS/ESI测定人血清中丙戊酸浓度的方法,并用于临床血药浓度监测。方法:采用Waters XTerraTM MS C18色谱柱(150 mm×3.9 mm,5μm),以10 mmol·L-1醋酸铵水溶液-乙腈(60:40)为流动相,流速0.80 mL·min-1,柱温45℃,以双氯芬酸为内标。采用电喷雾电离源(ESI)负源,用各物质准分子离子峰的选择离子监测(SIR)进行定量分析,血清样品用乙腈直接沉淀后进样。结果:丙戊酸在7.25-188.10μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9997),最低检测浓度为0.50μg·mL-1(S/N≥3)。日内与日间RSD均小于10%(n=5),方法回收率在98.7%-105.1%之间。结论:该方法操作简单,结果准确,血药浓度监测时间很短,灵敏度高;适用于丙戊酸血药浓度监测及药代动力学研究。

HPLC-MS／ESI法测定人血浆中文拉法新及其代谢产物氧去甲基文拉法新对映体血药浓度

目的:建立反相高效液相色谱-质谱法同时测定人血浆巾文拉法新(VEN)及其主要代谢产物氧去甲基文拉法新(ODV)对映体的浓度。方法:使用万古霉素手性柱(CHRIOBIOTIC V^(TM))(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-醋酸铵缓冲液(30 mmol·L^(-1))(15:85,pH 6.0)为流动相对两化合物进行手性拆分,流速设为1.0 mL·min^(-1),柱后分流比为3:1。采用质谱电喷雾电离正源(ESI^+)将样品离子化,选择性离子监测(SIM)准分子离子峰。结果:在所建立的色谱条件下,VEN 与 ODV得到很好的手性分离。S-(+)与 R-(-)-VEN 在5.0～400 ng·mL^(-1)S-(+)与 R-(-)-ODV 在4.0～300 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9991;萃取回收率均大于76%;方法回收率均大于92%;最低检测浓度:S-(+)与R-(-)-VEN 为1.0 ng·mL^(-1),S-(+)与 R-(-)-ODV 1.5ng·mL^(-1);日内及日间 RSD 均小于9%。结论:本方法简单、快速、灵敏、准确,可用于 VEN 人体内立体选择性代谢的研究。

高粱原花青素的ESI-MS分析及其低聚体的RP-HPLC-MS/MS法分离鉴定

以高粱加工后的副产物——高粱外种皮为原料,采用电子喷雾离子化质谱(electrospray ionization-massspectroscopy,ESI-MS)对ADS-17大孔树脂纯化的高纯度高粱原花青素(sorghum procyanidins,SPC)的组成进行分析,并通过反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)-质谱(RP-HPLC-MS/MS)联用对Toyopearl HW-40凝胶色谱分离的SPC-5级分进行分离鉴定。结果显示:SPC为低聚体原花青素,包含有儿茶素/表儿茶素单体、原花青素二～六聚体;SPC-5由8种三聚体和1种二聚体组成。

HPLC-MS/ESI同时测定人血浆中米屈肼和左卡尼汀

目的:建立一种快速、准确、灵敏的高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)法同时测定人血浆中米屈肼和左卡尼汀的浓度。方法:以卡巴胆碱作为内标,血浆样品经蛋白沉淀法处理,用氰基色谱柱(Ultimate XB-CN,4.6 mm×250 mm,5μm)进行分离,以乙腈-30 mmol·L^(-1)醋酸铵水溶液(含0.08%甲酸)(80:20,v/v)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),柱温40℃,柱后分流比为4:1,HPLC-MS/ESI^+法选择性监测准分子离子峰[M+H]^+(米屈肼m/z 147.1,左卡尼汀m/z 162.1,内标卡巴胆碱m/z147.1)。结果:米屈肼、左卡尼汀及内标卡巴胆碱在氰基柱上保留较好,分离完全;米屈肼、左卡尼汀线性范围分别为0.1～30.0μg·mL^(-1)(r=0.9985)和0.4～12.8μg·mL^(-1)(r=0.9994);最低定量限分别为0.1μg·mL^(-1)和0.4μg·mL^(-1);平均萃取回收率均大于80%,方法回收率为92%～114%;日内日间RSD均小于12%。结论:本方法简便准确,可用于同时测定人血浆中米屈肼和左卡尼汀的浓度,考察服用米屈肼对血浆中内源性物质左卡尼汀浓度的影响。

HPLC-MS/MS法同时测定治伤胶囊中9种成分的含量

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定治伤胶囊中腺苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、关附甲素、关附壬素、关附辛素、欧前胡素、羌活醇、升麻素苷、异欧前胡素的含量。方法分析采用Agilent Porshell EC-C_(18)色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;正离子扫描;分时间段多反应监测模式。结果9种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9950),平均加样回收率97.52%~99.87%,RSD1.3%~2.4%。结论该方法简便灵敏,准确可靠,可用于治伤胶囊的质量控制。

HPLC-MS/MS法同时测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦、拉莫三嗪浓度及其临床应用

目的 建立HPLC-MS/MS法测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦和拉莫三嗪的浓度,同时应用于儿童治疗药物监测。方法 取含药血浆10μl,用蛋白沉淀法对样本进行前处理。色谱柱为Agilent C18(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水和甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 ml/min。采用电喷雾离子源正离子模式,监测甲氨蝶呤m/z 455.1→308.2,甲氨蝶呤-D3 m/z 458.1→311.1(内标);左乙拉西坦m/z 171.1.4→126.2,左乙拉西坦-D6 m/z177.2→132.2(内标);拉莫三嗪m/z 256.1→211,拉莫三嗪-13C3-D3 m/z 262.1→217.1(内标)。结果 甲氨蝶呤在25~1 500 ng/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=0.251 6X+0.003 4(r=0.998 9),定量下限为25 ng/ml;左乙拉西坦在1~50μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=16.687 6X+0.000 2(r=0.991 1),定量下限为1μg/ml;拉莫三嗪在0.5~25.0μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=46.369 5X-0.059 9(r=0.999 1),定量下限为0.5μg/ml。样本批内、批间准确度和精密度符合要求、基质效应符合规定。本方法验证后成功用于1 348例临床患儿样本的检测。结论 本方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于人血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦及拉莫三嗪的分析,适用于儿童治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法同时测定土茯苓七味散中12种成分的含量

目的 建立HPLC-MS/MS法同时测定土茯苓七味散中小檗碱、黄连碱、没食子酸、柯里拉京、栀子苷、川楝素、芦丁、绿原酸、木犀草素、木犀草苷、大黄素、落新妇苷的含量。方法 分析采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm);流动相甲醇-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.25 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果 12种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 0),平均加样回收率94.83%~104.42%,RSD 1.30%~4.88%。结论 该方法简便、快速、准确,可用于土茯苓七味散质量控制。

HPLC-MS/MS法测定大豆及其加工产品中12种蛋白类抗营养因子含量

大豆中含有多种蛋白类抗营养因子,如过敏原蛋白、凝集素等,它们引起的抗营养反应在一定程度上影响了其在饲料中的应用。由于这些蛋白结构复杂且缺乏标准品,因此很难实现其在大豆及大豆加工产品中的准确定量检测。为此,本实验旨在建立一种基于高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS/MS)的大豆中主要蛋白类抗营养因子的同步检测方法。首先将采集到的样品通过Tris-HCl缓冲液超声提取得到蛋白提取液,经过胰蛋白酶酶膜上酶解得到多肽洗脱液,同时将同位素标记的内标标准肽段加入到酶解多肽洗脱液中,然后将所得上清液转移到样品瓶中进行HPLC-MS/MS分析。HPLC-MS/MS分析采用Waters XBridge■Peptide BEH C_(18)色谱(2.1 mm×100.0 mm,3.5μm),以含有0.3%甲酸的水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,在18 min内即可完成一个样品的检测,质谱数据采集采用多反应监测模式。结果表明:15种蛋白的定量肽段在3.2~1000 ng/mL内呈现良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.995~0.999,空白发酵豆粕基质添加各肽段的平均回收率为84.9%~122.3%,相对标准偏差小于12.3%,可以满足大豆和大豆加工产品中蛋白类抗营养因子的测定需求。通过对实际样品的检测与分析,发现几种加工工艺中酶解法消敏效果最佳,膨化法与大豆浓缩蛋白的消敏效果次之,发酵法消敏效果最差。此外,通过本实验的样品检测结果,可以得出大豆和大豆加工产品中12种蛋白类抗营养因子的含量,这些数据可以为大豆加工工艺的评估和改进提供技术支持。

QuEChERS/HPLC-MS/MS法测定渔用饲料及饵料中地西泮及其代谢物

研究建立了一种同时测定渔用饲料及饵料中地西泮及其代谢物的分散型固相萃取(QuEChERS)/高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法。样品采用乙酸乙酯提取,提取液经50 mg C18和PSA分散固相萃取净化,40℃下氮吹浓缩近干,加入80%乙腈1.0 mL复溶,过滤后采用HPLC-MS/MS法进行测定。目标物采用飞诺美Kinetex C18系列色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)分离,以0.1%体积比甲酸水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱。电喷雾离子源(ESI+)、选择反应监测(SRM)模式下进行测定,基质匹配内标法定性定量。结果显示,该方法在0.5~50.0μg/kg范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,检出限和定量下限分别为0.5μg/kg和1.0μg/kg。在3个不同的添加水平下,地西泮及其代谢物的平均回收率为82.3%~109.4%,相对标准偏差为3.62%~6.33%。研究表明,该方法具有快速、准确度高与灵敏度高的优点,可满足渔用饲料及饵料中地西泮及其代谢物的残留检测需求。

HPLC-MS/MS法测定儿童微量血浆中白消安和甲氨蝶呤的浓度

目的建立高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定血浆中白消安和甲氨蝶呤的浓度,并用于儿童血液病患者的治疗药物监测。方法血浆样本经甲醇沉淀蛋白前处理,采用Phenomenex Kinetex EVO C18色谱柱分离,流动相为水(含2 mmol·L^(-1)乙酸铵+0.07%甲酸)和甲醇,梯度洗脱;流速为0.5 mL·min^(-1)。质谱检测方式为电喷雾离子源正离子模式,多反应监测(MRM)扫描,监测离子对:白消安m/z 264.1→151.0、内标白消安-D8 m/z 272.0→159.0;甲氨蝶呤m/z 455.1→m/z 308.2、甲氨蝶呤-D3(内标)m/z 458.1→m/z 311.1。结果白消安在62.50~4000 ng·mL^(-1)内与峰面积线性关系良好(r=0.9984),甲氨蝶呤在15.63~1000 ng·mL^(-1)与峰面积线性关系良好(r=0.9990)。准确度、精密度、基质效应和稳定性均符合要求。结论本方法操作简便、快速准确、专属性强且稳定性好,适用于血浆中白消安和甲氨蝶呤的快速分析,可用于儿童血液肿瘤患者的临床治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法同时测定月季花配方颗粒中10种成分的含量

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定月季花配方颗粒中金丝桃苷、异槲皮苷、没食子酸、鞣花酸、槲皮苷、芦丁、阿福豆苷、萹蓄苷、槲皮素-3-O-6-反式-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷、槲皮素3-O-2″-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的含量。方法分析采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(1.8μm,2.1 mm×150 mm);流动相甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式。结果10种成分在各自范围线性关系良好(r>0.9958),平均加样回收率97.3%~99.6%,RSD 0.8%~2.7%。结论该方法简便快速,灵敏度高,专属性强,可用于月季花配方颗粒的质量控制。

HPLC-MS/MS法同时测定患者全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分的浓度

建立HPLC-MS/MS法同时测定人全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度,并用于免疫抑制剂他克莫司联用保肝中药五酯胶囊临床药物浓度监测的研究中。采用了WatersAcquity UPLC■BEH C18色谱柱(50×2.1mm,1.7μm),以5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液为水相,乙腈为有机相,流速为0.3mL/min,柱温60℃。各成分均采用他克莫司同位素化合物(13C,2H4)作为内标(IS),全血样本首先经硫酸锌处理,再加入含内标的乙腈沉淀蛋白,最后离心后取上清液进样,质谱采用电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)、正离子扫描模式检测。建立的HPLC-MS/MS法在1~100ng/m L范围内,他克莫司和五酯胶囊的4种主要成分色谱响应与浓度相关性良好,定量下限均为1ng/m L;他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲以及内标的保留时间分别为2.54、2.33、2.65、1.14、1.56、2.54min;准确度、回收率和经内标校准后的基质效应及稳定性数据均符合相关要求。方法灵敏、专属性强、准确性好,适用于人全血中他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度测定。

HPLC-MS/MS指纹图谱模式识别结合化学计量学对文王一支笔特征标志物的差异分析

文王一支笔为蛇菰科植物筒鞘蛇菰(Balanophora involucrate Hook.f.)的干燥全草,是鄂西地区特色民族珍稀药材。本研究首先利用HPLC-MS/MS技术建立了鄂西十堰地区5个产地10个批次文王一支笔的根茎、花茎和花序3个部位的化学指纹图谱,标定了其中29个共有峰,并推断了27个色谱峰的化学结构,包括13个酚酸类和8个黄酮类成分。聚类分析(CA)及主成分分析(PCA)结果显示,文王一支笔地下(根茎)与地上(花茎、花序)部位化学成分差异较大,花茎与花序间化学成分差异较小。正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)中VIP值分析结果表明,峰12、8、2、3、17、21、9和22是引起文王一支笔不同药用部位化学成分差异的潜在标志性成分(Q-marker),可作为其质量控制的依据。