HPLC-MS/MS法同时测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦、拉莫三嗪浓度及其临床应用

目的 建立HPLC-MS/MS法测定微量血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦和拉莫三嗪的浓度,同时应用于儿童治疗药物监测。方法 取含药血浆10μl,用蛋白沉淀法对样本进行前处理。色谱柱为Agilent C18(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水和甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 ml/min。采用电喷雾离子源正离子模式,监测甲氨蝶呤m/z 455.1→308.2,甲氨蝶呤-D3 m/z 458.1→311.1(内标);左乙拉西坦m/z 171.1.4→126.2,左乙拉西坦-D6 m/z177.2→132.2(内标);拉莫三嗪m/z 256.1→211,拉莫三嗪-13C3-D3 m/z 262.1→217.1(内标)。结果 甲氨蝶呤在25~1 500 ng/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=0.251 6X+0.003 4(r=0.998 9),定量下限为25 ng/ml;左乙拉西坦在1~50μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=16.687 6X+0.000 2(r=0.991 1),定量下限为1μg/ml;拉莫三嗪在0.5~25.0μg/ml线性关系良好,标准曲线方程:Y=46.369 5X-0.059 9(r=0.999 1),定量下限为0.5μg/ml。样本批内、批间准确度和精密度符合要求、基质效应符合规定。本方法验证后成功用于1 348例临床患儿样本的检测。结论 本方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于人血浆中甲氨蝶呤、左乙拉西坦及拉莫三嗪的分析,适用于儿童治疗药物监测。

HPLC-MS/MS法同时测定患者全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分的浓度

建立HPLC-MS/MS法同时测定人全血中他克莫司和五酯胶囊4种主要成分五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度,并用于免疫抑制剂他克莫司联用保肝中药五酯胶囊临床药物浓度监测的研究中。采用了WatersAcquity UPLC■BEH C18色谱柱(50×2.1mm,1.7μm),以5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液为水相,乙腈为有机相,流速为0.3mL/min,柱温60℃。各成分均采用他克莫司同位素化合物(13C,2H4)作为内标(IS),全血样本首先经硫酸锌处理,再加入含内标的乙腈沉淀蛋白,最后离心后取上清液进样,质谱采用电喷雾离子源,以多反应离子监测(MRM)、正离子扫描模式检测。建立的HPLC-MS/MS法在1~100ng/m L范围内,他克莫司和五酯胶囊的4种主要成分色谱响应与浓度相关性良好,定量下限均为1ng/m L;他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲以及内标的保留时间分别为2.54、2.33、2.65、1.14、1.56、2.54min;准确度、回收率和经内标校准后的基质效应及稳定性数据均符合相关要求。方法灵敏、专属性强、准确性好,适用于人全血中他克莫司、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲的浓度测定。

HPLC-MS-MS法测定人血清中氟西汀、文拉法辛及其代谢产物与应用

建立可同时快速测定人血清中氟西汀(Fluoxetine, FXT)、文拉法辛(Venlafaxine, VEN)及其活性代谢产物N-去甲氟西汀(Norfluoxetine,N-FXT)、O-去甲文拉法辛(O-Desmethylvenlafaxine,O-VEN)浓度的方法,并应用于临床,监测相关药物在人体中的代谢情况。临床样本,以甲醇-甲酸混合溶剂作蛋白沉淀剂,处理后,离心后取上清,进样高效液相色谱-串联质谱系统(HPLC-MS/MS),使用Phenomenex Kinetex Biphenyl色谱柱(2.1 mm×50 mm, 2.6μm),流动相为含0.1%甲酸和1 mmol/L甲酸铵的水和甲醇,流速0.4 mL·min^(-1),柱温45℃,进样量5μL,采用电喷雾正离子多反应监测模式检测。检测方法特异性和选择性较好,血药质量浓度分别在10~1 000,32~3 200,18~1 800,18~1 800 ng/mL范围内线性良好,回收率在85%~115%之间,批内批间精密度RSD均小于15%,临床样本在室温放置24 h、反复冻融、长期冻存保存下,检测准确度在85%~115%之间,相对基质效应均在20%以内,临床检测患者血药浓度,VEN加O-VEN,结果平均(263.89±176.67) ng/mL;FXT加N-FXT结果平均(139.12±121.3) ng/mL。方法样品用量少,处理简便,准确度高,特异性强,稳定性好,适用于同时快速测定人血清中FXT、VEN及其活性代谢产物的浓度,为精准个性化用药提供可靠的方法学支持。

HPLC-MS/MS法同时测定月季花配方颗粒中10种成分的含量

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定月季花配方颗粒中金丝桃苷、异槲皮苷、没食子酸、鞣花酸、槲皮苷、芦丁、阿福豆苷、萹蓄苷、槲皮素-3-O-6-反式-香豆酰基-β-D-葡萄糖苷、槲皮素3-O-2″-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷的含量。方法分析采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(1.8μm,2.1 mm×150 mm);流动相甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;负离子扫描;多反应监测模式。结果10种成分在各自范围线性关系良好(r>0.9958),平均加样回收率97.3%~99.6%,RSD 0.8%~2.7%。结论该方法简便快速,灵敏度高,专属性强,可用于月季花配方颗粒的质量控制。

HPLC-MS/MS法测定盐酸拉贝洛尔中潜在基因毒性杂质

为了更好地控制盐酸拉贝洛尔中潜在的基因毒性杂质,保证用药安全,建立了高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法检测盐酸拉贝洛尔中潜在遗传毒性杂质N-亚硝基拉贝洛尔。液相色谱条件:以Waters ACQUITY UPLC CSH C_(18)(150 mm×3.0 mm,1.7μm)为色谱柱,流动相A为0.01 mol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,柱温为50℃,进样体积为10μL。以电喷雾电离源为离子源,负离子模式,采用多反应监测,建立质谱条件,对盐酸拉贝洛尔中N-亚硝基拉贝洛尔进行定量检测。结果表明:N-亚硝基拉贝洛尔质量浓度在1.01~100.60 ng/mL范围内有良好的线性关系;低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)为96.84%~99.53%;检测限和定量限分别为0.01 ng/mL和0.03 ng/mL;6批盐酸拉贝洛尔样品中N-亚硝基拉贝洛尔的含量为0.37~0.79 ng/mL。所提出的方法灵敏度高、专属性强,可用于测定盐酸拉贝洛尔中的N-亚硝基拉贝洛尔,为盐酸拉贝洛尔的质量控制提供参考。

HPLC-MS法同时测定大鼠血浆中那格列奈及其主要代谢物M1

目的建立同时测定那格列奈及其主要代谢物M1的HPLC-MS方法。方法血浆样品经过乙酸乙酯萃取,以非那西丁为内标。色谱采用岛津C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm)分离,流动相为0.1%甲酸溶液与乙腈,梯度洗脱,流速0.2 mL/min。质谱采用选择性离子监测(SIM)阳离子模式,检测对象[M+H]^(+)为:那格列奈318.2,代谢物M1334.1,非那西丁180.1。结果标准曲线线性范围为0.0625~8μg/mL那格列奈,M1为0.0313~4μg/mL。日内及日间准确度和精密度变异均<10%,血浆样品稳定性良好,提取回收率均>96%,基质效应<5%。结论本方法稳定性好、灵敏度高、重现性好,可应用于各类生物样本中那格列奈及其代谢物M1的生物等效性与药物代谢动力学研究。

QuEChERS-HPLC-MS/MS快速测定花生中4种黄曲霉素含量的研究

建立QuEChERS-高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)快速测定花生中4种黄曲霉毒素的含量。方法样品用乙腈提取之后,使用分散固相萃取纯化管(CNW dSPE)净化,选择ACQUITYBEN C18色谱柱(1.7μM,2.1MM×100MM)分离,采集模式为多反应监测(MRM),外标法定量。结果 4种待测物在范围内线性关系良好,相关系数(R)在0.995~0.999,检出限(LOD)为0.01~0.05mg/kg定量限(LOQ)为0.02~0.5mg/kg,低、中、高3个添加水平的回收率为74.50%~109.00%,相对标准偏差(RSD)为0.25%~3.55%。结论该方法净化效果良好,具有前处理操作简便、快速、高效、准确等优点,可适用于花生中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。

HPLC-MS/MS快速测定蜂蜜中五氯酚残留

文章建立了应用HPLC-MS/MS快速测定蜂蜜中五氯酚残留的分析方法。样品经氨化乙酸乙酯(9∶1,V∶V)涡旋超声提取,提取液经氮气吹干,液相色谱串联质谱测定,内标法定量。在五氯酚添加浓度为0.5、2.0、10.0μg·kg^(-1)时,回收率为93.5%~101.3%,相对标准偏差(RSD)为4.30%~6.82%,其检出限和定量限分别为0.2μg·kg^(-1)和0.5μg·kg^(-1)。结果表明,此方法操作简单快捷、灵敏度高、重复性好、环保可靠,完全适用于蜂蜜中五氯酚残留量的测定。

HPLC-MS/MS法测定黑枸杞中9种酚酸

建立了一种利用高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪测定黑枸杞中9种酚酸的方法。色谱柱为安捷伦Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×100 mm,2.7μm),以乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温30℃,进样量5.0μL。结果表明,乙酸乙酯是最优提取溶剂。在最优条件下,9种酚酸在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数R2>0.999,检出限<1.6μg/kg,定量限<5.0μg/kg。在50,100,200μg/kg这3个添加水平下,9种酚酸的回收率为76.4%~106.2%,RSD<4.1%。该方法操作简便,具有较高的准确度、灵敏度和精密度,可用于鉴定和定量分析天然植物提取物中的酚酸类化合物成分。

HPLC-MS/MS法同时测定清心滋肾方中27种成分

目的建立HPLC-MS/MS法同时测定清心滋肾方中去甲乌药碱、莲心季胺碱、N-甲基衡州乌药碱、莲心碱、木兰花碱、异莲心碱、甲基莲心碱、斯皮诺素、表小檗碱、黄连碱、去氢钩藤碱、异钩藤碱、钩藤碱、巴马汀、小檗碱、缝籽嗪甲醚、梓醇、没食子酸、丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、莫诺苷、马钱苷、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的含量。方法该药物水煎液的分析采用Agilent ZORBAX SB C 18色谱柱(4.6 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.5%甲酸-[甲醇-乙腈(1∶1)],梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果27种成分在各自范围线性关系良好(r≥0.9956),平均加样回收率90.2%~105.3%,RSD 1.6%~9.1%。结论该方法快速准确,可靠灵敏,可为清心滋肾方质量控制提供参考依据。

HPLC-MS/MS法测定人血浆丙戊酸浓度的不确定度评定

目的对HPLC-MS/MS法测定人血浆中丙戊酸浓度的不确定度进行评定与分析。方法测定人血浆中丙戊酸浓度,用A类评定评价重复性测量引入的不确定度,用B类评定对对照品称量、对照品纯度、溶液配制、含药血浆配制、提取回收率、基质效应、标准曲线拟合和仪器测定引入的不确定度进行评定,并计算合成和扩展不确定度。结果当P=95%置信概率(k=2)时,人血浆中低(1200 ng/mL)、中(12000 ng/mL)、高(75000 ng/mL)质量浓度丙戊酸的扩展不确定度分别为345.09、589.73、2789.74 ng/mL。结论方法准确度高,适用于丙戊酸的药动学研究和血药浓度监测。不确定度主要来源于标准曲线拟合、基质效应和提取回收率,低浓度时标准曲线拟合引入的不确定度值较中、高浓度的高。设定合理的线性范围、优化提取方式和色谱条件等可提高测定结果准确性。

小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的HPLC-MS/MS定量分析方法建立与药代动力学特征研究

目的 建立小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的高效液相色谱-质谱联用(HPLC/MS-MS)定量分析方法,并研究其在小鼠体内的药代动力学特征。方法 KM小鼠采用尾静脉注射(20 mg/kg)、腹腔注射(20、40和60 mg/kg)和灌胃(200、400和600 mg/kg)给药后,在0、5、30 min及1、2、4、6、8、12、16和24 h眼底静脉丛取血,分离血浆样品,HPLC-MS/MS分析样品中黄卡瓦胡椒素B的浓度,计算药代动力学参数,并评价不同途径给药下黄卡瓦胡椒素B的生物利用度。结果 在0.2~800.0 ng/mL浓度范围内,黄卡瓦胡椒素B线性关系良好(r=0.9995),定量下限为0.2 ng/mL,准确度在-8.50%~12.50%,精密度在1.73%~12.03%,且无明显基质效应(88.68%~102.04%),确证该方法适用于小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的定量分析。药代动力学结果显示,黄卡瓦胡椒素B腹腔注射和灌胃给药后在体内吸收迅速,血药浓度在给药0.083 h即为峰值,在腹腔注射20~60 mg/kg和灌胃200~600 mg/kg给药范围内呈现良好的线性药代动力学过程。黄卡瓦胡椒素B的绝对生物利用度腹腔注射给药为53.29%,灌胃给药为1.38%。结论 本研究建立的HPLC-MS/MS定量分析方法,操作简便、准确、灵敏度高,成功应用于小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的药代动力学特征研究。

HPLC-MS/MS分析麻口皮子药内生真菌培养基条件下次生代谢产物与原药材

采用液质联用技术(HPLC-MS/MS)分析麻口皮子药内生真菌在不同培养基条件下的次生代谢产物,并与麻口皮子药原药材进行比较。HPLC指纹图谱显示,13种培养基条件下的次生代谢产物与原药材具有一定的相似性,其中J2、D8培养基条件下的次生代谢产物与原药材具有多个共有峰。总离子流(TIC)图谱显示,13种培养基条件下的次生代谢产物与原药材有3个相同化合物,分子量分别为565(t_(R)=50.2 min)、679(t_(R)=52.3 min)、792(t_(R)=53.5 min),这3个化合物均未见文献报道,数据库中也无相关数据,推测为新化合物;其它培养基条件下的次生代谢产物之间成分各有异同,通过二级质谱及裂解规律,推导出了部分可能的化合物及其分子式。表明,可通过选择合适的培养基条件定向调控特定有效组分的合成,为提高麻口皮子药活性成分含量提供了一种新途径。

基于HPLC-MS/MS的藤丹胶囊中14个成分的定量分析

目的通过HPLC-MS/MS方法对藤丹胶囊治疗高血压疾病的部分活性成分进行定性定量研究。方法采用Waters XTerraMSC18色谱柱(2.1×100 mm,3.5μm),以0.1%乙酸-乙腈(0.1%乙酸)为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI源),以多反应监测(MRM)扫描模式正负离子同时检测的方法测定藤丹胶囊中14种化学成分的含量。结果14种化合物在测定浓度范围内线性关系良好,相关系数均>0.995,平均加样回收率为87.3%~100.9%,回收率的RSD≤7.7%,样品中14种成分的含量范围介于12.35μg/g~3089.83μg/g。结论本研究为中成药藤丹胶囊的质量控制和开发利用奠定了一定基础。

基于超滤-HPLC-MS/MS技术的苦荞提取物抑制线粒体肿胀活性研究

为了阐明苦荞对肝脏线粒体肿胀的抑制作用和物质基础,采用超滤技术,结合HPLC-MS/MS分析,研究苦荞中靶向肝脏线粒体发挥活性的功能成分。结果表明,苦荞含有丰富的总酚和总黄酮,其中以乙醇-麸皮粉提取物(YF)中总酚和总黄酮含量最高,为(32.48±0.37)mg GA/g DW和(63.06±0.21)mg rutin/g DW,丙酮和水提取物次之。同时,YF对FeSO 4-VC诱导的肝脏线粒体肿胀抑制效果最好,超滤-HPLC-MS/MS分析发现,苦荞YF中发挥肝脏线粒体肿胀抑制作用的主要活性成分为槲皮素、山奈酚、大黄素和L-苹果酸,其中槲皮素和山奈酚的效果优于大黄素和L-苹果酸。细胞实验进一步证实,槲皮素和山奈酚可有效恢复高脂诱导的线粒体膜电位下降,降低ROS水平,发挥线粒体保护作用。

HPLC-MS/MS法测定猪肉中齐帕特罗残留量及不确定度评定

采用HPLC-MS/MS方法测定猪肉中齐帕特罗残留量,并进行不确定度评定分析。根据检验标准,构建数学模型,分析猪肉中齐帕特罗残留量测定过程引入的不确定度来源,通过计算合成不确定度,得到齐帕特罗残留量测定扩展不确定度。经测定猪肉中齐帕特罗残留量为1.270μg/kg时,其扩展不确定度为U=0.24μg/kg。不确定度评定的结果显示此方法测量误差较小,测定结果可信度高;引入的测量不确定度来源主要来自标准曲线拟合、标准溶液的配制、样品重复性和方法的回收,在实际检测应用中需加强控制。

HPLC-MS/MS法测定食品接触材料中四溴双酚A的含量

通过HPLC-MS/MS外标定量法测定食品接触材料中四溴双酚A含量,食品接触材料经剪碎后,采用甲醇超声萃取,滤膜过滤后得到待测样品。研究仪器条件、预处理工艺条件、加标回收率等因素对四溴双酚A测定的影响。结果表明,该分析方法平均加标回收率和相对标准偏差分别为84.2%~106.3%和1.8%~4.4%(n=6),适合检测现有材料中四溴双酚A的含量。优化了色谱柱、流动相和质谱参数、萃取溶剂等条件,降低了方法的检出限,提高了检测方法的灵敏度。该方法能够快速、准确检测塑料食品接触材料中四溴双酚A含量,可为食品质量监测提供技术保障。

HPLC-MS/MS法测定注射用盐酸头孢甲肟中7种N-亚硝胺类杂质

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定注射用盐酸头孢甲肟中7种N-亚硝胺类基因毒性杂质(N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基二乙醇胺、N-亚硝基-N-甲基苯胺、N-亚硝基-N-乙基苯胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二正丁胺)。方法色谱柱为ACE EXCEL 3 C18-AR(3μm,100 mm×4.6 mm),流动相为0.1%甲酸甲醇溶液(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱,流速0.6 mL·min^(-1),采用APCI离子源,以正离子、多重反应监测(MRM)模式进行检测。结果7种N-亚硝胺类基因毒性杂质在1~20ng·mL^(-1)与峰面积线性关系良好。回收率在78.9%~89.6%,RSD均小于6.1%。检测限低于1.5ng·g^(-1)。样品中各杂质均未检出。结论该方法灵敏度高、专属性强,可用于注射用盐酸头孢甲肟中7种N-亚硝胺类基因毒性杂质的质量控制。

HPLC-MS/MS法测定人体血清中7种B族水溶性维生素浓度及应用

建立同时测定人血清中水溶性维生素VB1、VB2、VB3、VB5、VB6-C00H、5-MTHFA、VB12的液相串联质谱法。具体方法是 选择同位素标记的维生素VB1、VB2、VB3、5、VB6-C00H、5-MTHFA、MMA等做内标,用6%BSA溶液做为新鲜血清的替代基质溶剂,对正己烷进行化学萃取,按质谱分析法则选择ESI的正离子MRM模型,按色谱分析法柱采用MerCkHS-C18柱(4.6×mm,),流动的A液为0.5%甲酸水+0.5%甲酸铵+水溶液(1:1:8),B液为纯甲醇,流量以0.6ml/min进行梯度弥散洗脱。结果 维生素VB1、维生素VB2、维生素VB3、维生素VB5、维生素VB6-C00H、5-MTHFA、VB12的质量浓度在范围内线性良好,其测定的批间与批内变异系数,稀释回收率、添加回收率及基质效应评价等均符合检测要求。结论 经过液相串联质谱仪的技术验证,我们建立了一种快速、精准、特异性强的分析方法,它能够一次性从水溶性维生素中有效地提取出有价值的物质,并且能够在临床实践中有效地检测出VB1、VB2、VB3、VB5、VB6-C00H、5-MTHFA和VB12的质量浓度。

Semi-Pre-HPLC与HPLC-MS联用的二维色谱分析系统对代谢相关脂肪性肝病肝线粒体中滇黄精药源成分的检测

目的检测代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)肝线粒体中滇黄精药源成分的分布情况。方法24只6周龄雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组和滇黄精水提物组,每组8只。正常组以普通饲料喂养,其他组以高脂饲料喂养。建立模型同时滇黄精水提物组按照8 g/(kg·d)灌胃滇黄精水提物,正常组与模型组灌胃等体积的生理盐水,连续14周。最后一次给药1 h后,取各组大鼠肝组织,分离得到线粒体,采用Semi-Pre-HPLC联合HPLC-MS二维色谱分析系统分析各组肝线粒体药源成分。结果MAFLD大鼠肝线粒体中检测到10种药源成分,其中7种已报道脂代谢调节活性,分别为薯蓣皂苷元、薯蓣皂苷、菝葜皂苷元、Pratioside D1、异甘草素、β-谷甾醇、常春藤皂苷元。结论检测到的10种药源成分可能是滇黄精调节线粒体缓解MAFLD的主要活性物质。