基于HPLC-Q-Exactive MS/MS和分子对接技术的通拉嘎-5抗绝经后骨质疏松药效物质基础和作用机制研究

目的阐释通拉嘎-5抗绝经后骨质疏松的药效物质基础和作用机制。方法采用HPLC-Q-Exactive MS/MS技术分析通拉嘎-5的入血原型成分,并利用分子对接技术表征入血原型成分与雌激素受体ER的结合能,探讨通拉嘎-5抗绝经后骨质疏松的作用机制。结果分析得到入血原型成分26个,主要包括生物碱类、酚酸类和挥发油类;其中,桂二萜醇、荜茇环碱、胡椒碱、二氢胡椒碱和1,3-Benzodioxle-5-propanal与ERα、ERβ结合能均≤-5 kcal·mol^(-1),鞣花酸、对羟基苯甲酸、二氢荜茇明宁碱、荜茇宁、胡椒油碱B、(2E,4E,12Z)-N-Isobutylocatadeca-2,4,12-trienamide与Erα结合能≤-5 kcal·mol^(-1)。结论通拉嘎-5中桂二萜醇、胡椒碱等11个入血原型成分可能作用于雌激素受体发挥抗绝经后骨质疏松的作用,可为该方质量控制研究和临床合理应用提供参考。

基于HPLC-Q-Exactive MS/MS的二味杜仲汤血浆成分研究

目的:通过研究蒙药二味杜仲汤(Erwei Duzhong Decoction,EDD)的血浆移行成分,进一步阐明进入血液的原型成分和可能的代谢物,为深入研究EDD的体内药效学提供科学依据。方法:采用HPLC-Q-Exactive MS/MS对给予EDD的大鼠的血浆成份进行全面表征,比较空白血浆、含药血浆、EDD方剂、杜仲和蓝刺头药材质谱图,并结合Xcalibur 3.0软件的多数据处理方法和Compound discover 3.0对入血成分进行鉴定和代谢物预测。结果:根据化学成分的准确分子量与对照品及文献数据的对比共筛选入血成分43个,包括原型成分29个和代谢产物14个。原型成分中有苯丙素类14个、黄酮类4个、木脂素类1个、环烯醚萜7个、倍半萜类1个、其他类2个。结论:初步明确了EDD入血原型成分和可能存在的代谢产物,为明确EDD体内药效形式和代谢途径奠定基础。

基于HPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS技术分析不同剂型太子参的差异化学成分

为探讨不同剂型对太子参代谢物合成积累的影响,采用高效液相色谱-串联四级杆轨道阱质谱(HPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS)结合多元统计分析技术对太子参传统中药饮片和配方颗粒的差异化学成分进行研究。基于HPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS代谢组学技术,结合软件数据库搜索进行成分鉴定。采用主成分分析(PCA),偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等方法筛选和鉴定差异化学成分。结果显示,太子参传统中药饮片和配方颗粒样品中化学成分能够显著区分,在正、负离子模式下分别找到98个和52个差异化学成分,这些差异化学成分主要集中在黄酮、有机酸、脂肪酸、氨基酸类化合物中且呈现不同的变化规律,主要涉及异喹啉生物碱生物合成代谢。该结果可为揭示不同剂型对太子参代谢物合成积累的影响规律提供基础资料。

基于HPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的异绿原酸A体内代谢产物分析

异绿原酸A(ICA)为茵陈等多种中药的主要药效成分。该研究旨在鉴定口服给药ICA的大鼠血浆、尿液和粪便中的代谢产物,并推测其潜在的代谢途径。ICA灌胃大鼠后,收集不同时间点(段)的血浆、尿液和粪便样品,利用高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱(HPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术,结合对照品比对保留时间、裂解规律总结和文献数据,对生物样品中代谢产物进行结构鉴定。从大鼠样品中初步鉴定了ICA的39个代谢产物(M1~M39),其中31个来自于血浆(M1~M10、M12~M24、M26~M28、M30、M34~M35、M38~M39)、34个来自于尿液(M1~M11、M13~M15、M19~M25、M27~M39)、11个来自于粪便(M2~M3、M6、M15、M21~M23、M32、M34、M36~M37),主要代谢途径包括水解、葡萄糖醛酸化、甲基化和磺酸化反应等。该研究揭示了ICA在大鼠血浆、尿液和粪便中的代谢情况,对深入阐明其药理活性成分提供参考。

HPLC-CAD法对黄杨宁片原料中环维黄杨星D和有关物质的定性定量研究

首次建立高效液相色谱-电喷雾检测(HPLC-CAD)法对黄杨宁片原料中环维黄杨星D及有关物质进行定量分析,并用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用技术(HPLC-Q-Exactive)对CAD检测中出现的有关物质进行了定性研究。采用XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离;乙腈-100 mmol·L^-1甲酸铵溶液(85∶15)(混合溶液用甲酸调pH 2.8)为流动相等度洗脱,流速1.1 mL·min^–1,柱温30℃;CAD雾化温度35℃,气压62.2 psi;新建立的方法能检测到除环维黄杨星D外的5个有关物质。方法学结果显示,环维黄杨星D检测限为12.588 ng,定量限为28.323 ng;平均回收率为95.74%,RSD为1.79%(n=6)。3个厂家12批原料样品中环维黄杨星D含量为79.94%~88.49%,平均值82.20%。CAD对非挥发性物质具有响应均一性,以环维黄杨星D作为对照品外标法计算5个有关物质含量,结果在15.99%~22.15%,平均值20.10%。该方法对于无发色团的黄杨生物碱类物质具有检测信号齐全和微量组分检测灵敏度高的优势,成分间分离度良好,能与MS兼容,可应用于黄杨宁片原料中成分的定性定量分析。