HPLC-UV-CAD串联指纹图谱应用于黄芪的质量评价

目的建立黄芪药材的HPLC-UV-CAD串联指纹图谱,对24批不同产地的黄芪药材进行质量评价。方法通过HPLC串联指纹图谱检测,并结合相似度计算和主成分分析(PCA)进行研究。结果由黄芪指纹图谱相似度计算可知,黄芪药材相似度范围为0.822~0.992(UV检测器),0.916~0.995(CAD检测器);由PCA结果可知,3个主成分的总累积方差贡献率为85.953%,主成分综合得分模型为F=0.477f_(1)+0.253f_(2)+0.130f_(3),由此对24批黄芪药材的综合质量进行了排名,从而对其质量进行评价。结论该HPLC-UV-CAD串联指纹图谱方法较全面准确,能反映黄芪药材化学成分分布的总体质量特征,并为黄芪或含黄芪的复方汤剂以及中成药的质控提供参考。

消核糖浆的指纹图谱及含量测定研究

目的 建立消核糖浆的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并测定其中10个有效成分的含量。方法 以12批消核糖浆为对象,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,以Athena C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm。色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》建立消核糖浆指纹图谱并进行相似度评价。采用ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.01%甲酸乙腈-0.01%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,结合高分辨质谱仪,以电喷雾离子源进行正负离子扫描,测定12批消核糖浆中各主要成分的含量。结果 12批样品共标定33个共有峰,相似度均大于0.97;确认其中10个色谱峰,分别为王不留行黄酮苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮苷、迷迭香酸、新橙皮苷、丹酚酸B、延胡索乙素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D;含量测定结果显示,上述10个成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(R 2>0.999),其含量分别为0.35~0.64、3.15~5.61、0.11~0.17、1.68~3.17、1.59~1.90、1.15~1.64、0.78~1.48、0.11~0.26、0.06~0.13、0.33~0.61 mg/mL。结论 12批消核糖浆的主要成分相似但含量有所差异;本研究建立的HPLC指纹图谱和UPLC-MS/MS含量测定方法可用于消核糖浆的全面质量评价。

基于气相色谱-串联质谱指纹图谱与化学模式识别法鉴定不同品种药用红景天

目的基于气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)指纹图谱与化学模式识别相结合的方法对5种常见药用红景天进行比较研究。方法收集具有质量标准的5种药用红景天,采用GC-MS/MS对5种药用红景天进行差异性成分鉴定,建立各品种化合物GC-MS/MS数据库,并建立GC-MS/MS指纹图谱进行相似度评价;采用ChemPattern2017先进化学计量学系统解决方案软件对5种药用红景天建立化学模式识别法。结果分别建立5种药用红景天的GC-MS/MS指纹图谱并进行相似度评价;建立的5种药用红景天的化合物GC-MS/MS数据库可以为红景天品种鉴别提供技术支撑;采用分类模式识别分析法测试2批较细碎性状难以辨识的未知红景天,结果1批为长鞭红景天,1批为狭叶红景天;经正交偏最小二乘法分析,样品可明显分为5组,其中大花红天素、酪醇和红景天苷的VIP值>0.9,为主要差异性成分,其中大花红天素为大花红景天的独有成分;经聚类分析后分为两大类,大花红景天单独聚为一类,其余4种红景天聚为一大类,唐古红景天和长鞭红景天可单独聚为一小类,部分狭叶红景天和高山红景天混聚为一类,表明大花红景天与其余4种红景天差异特征明显,狭叶红景天和高山红景天存在一定的相似性。结论建立的方法可有效区分5种药用红景天,为5种药用红景天的质量控制、质量评价和鉴定提供了参考。

高效液相色谱-飞行时间-串联质谱和随机森林算法的蜜炙百合与生百合指纹图谱研究

采用指纹图谱结合化学计量学对不同产地蜜炙百合与生百合质量进行评价。收集23批不同来源的蜜百合与生百合进行高效液相色谱(HPLC)分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004药典版)建立两类百合对照指纹图谱,采用随机森林算法对其进行判别分析,筛选其主要差异性组分;并利用HPLC-飞行时间-串联质谱(TOF-MS/MS)法对差异峰进行鉴别。结果显示23批不同来源蜜炙百合与生百合共获得13个共有峰;利用随机森林算法准确地分辨了蜜炙百合与生百合,发现王百合苷D和王百合苷B对分辨两类百合具有重要贡献。

超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱指纹图谱检测毒蕈中4种鹅膏肽类毒素

建立了基于超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱技术(UPLC-ESI-Q-TOF)的4种鹅膏肽类毒素特征信息的色谱和质谱指纹图谱和分析鉴定方法。样品用含0.1%TFA的甲醇溶液提取后,再用Oasis HLB固相柱净化,洗脱液经UPLC HSS T3色谱柱分离后,采用ESI-TOF MS和ESI-Q-TOF MS2进行测定;建立了包含毒素准分子离子准确质量数及其同位素特征,以及二级质谱特征子离子信息的指纹图谱;方法定量测定的线性范围在50～1000μg/L,相关系数在0.9974～0.9985之间;4种毒素的检出限均为10μg/L;定量限为50μg/L;加标回收率在68.2%～88.2%之间;相对标准偏差为7.2%～11.8%。对采集的20余种野生菌样品进行分析,有5种样品检测出含有毒素。本方法快速、准确、选择性好、特异性强,适用于突发毒蕈中毒事件样品中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽的确证分析。

丹参四波长串联定量指纹图谱与抗氧化活性谱相关研究

目的建立丹参(Danshen,DS)四波长HPLC指纹图谱和四波长串联指纹图谱,结合9个Markers定量分析和抗氧化活性研究来评价丹参药材质量的一致性。方法用高效液相色谱法采集30批DS在270、280、290、326 nm的指纹图谱和在线DAD 190~400 nm数据,采用系统指纹定量法(SQFM)评价各批次丹参药材质量,并基于Sm、Pm和α参数评价DS质量一致性。采用紫外分光光度(UV)法测定30批DS样品的IC50数据,用IC50倒数值与290 nm指纹峰面积进行相关分析。结果对四波长下定量指纹图谱用均值法整合,除RFP外,有6批质量极好(1级),8批质量很好(2级),13批质量好(3级),1批质量良好(4级),1批质量中(5级),1批质量一般(6级)。定量测定到9个Markers:原儿茶酸(PHA)、原儿茶醛(PHD)、丹参素钠(PPA)、咖啡酸(CFA)、迷迭香酸(RMA)、紫草酸(LSA)、丹参酮2A(T2A)、丹酚酸B(SAB)和丹酚酸A(SAA),证明其中7种具有很强的抗氧化能力。用四波长串联HPLC指纹评价丹参质量的结果与均值法整合四波长HPLC指纹图谱的评价结果基本一致。结论 30批DS质量均一性良好,用四波长串联HPLC指纹的评价结果与均值法整合四波长HPLC指纹图谱的评价结果基本相当,多波长串联指纹图谱为中药生产质量控制提供了一种便捷定量指纹图谱控制方法,同时结合抗氧化活性谱分析为丹参质量一致性评价提供一种新方法。

柴胡安心胶囊挥发性成分气相色谱串联质谱指纹图谱研究

目的建立柴胡安心胶囊挥发性成分的气相色谱串联质谱(GC-MS)指纹图谱。方法色谱柱为DB-5ms毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),载气为高纯度氦(纯度≥99.999%),流速为1.0 m L/min,进样口温度为250℃,进样量为1μL,程序升温,分流比为20∶1,分流进样;电子轰击离子源,轰击能量为70 e V,离子源温度为230℃,传输线温度为250℃,溶剂延迟时间为4 min,质荷比为55~550。采用"中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3.0"软件,以峰面积最大的色谱峰为参照峰,确定共有峰;采用系统指纹定量法判定样品质量等级;根据美国国家标准与技术局标准质谱数据库及文献检索指认共有峰。结果12批样品的GC-MS图谱有53个共有峰,鉴定出44种化学成分(占总峰面积的99.57%);10批样品质量均在良好以上,2批样品质量为中等;44种化学成分主要包括糠醛(22.50%)、丹皮酚(15.80%)、棕榈酸(12.33%)、桉叶油醇(4.48%)等。结论所建立的GC-MS指纹图谱稳定、可靠,可用于柴胡安心胶囊挥发性成分的研究及整体质量控制,还可为后续药效学研究提供参考。

基于HPLC指纹图谱及UPLC-Q-TOF-MS的藏药“榜间”多基原品种化学型研究

目的对不同品种藏药“榜间”HPLC指纹图谱进行研究,比较分析不同品种“榜间”的化学成分差异并进行分类探讨,为其质量控制、临床安全用药提供参考。方法采用HPLC法建立不同品种的“榜间”指纹图谱,UPLC-Q-TOF-MS法分析主流品种化学成分的异同并确定特征鉴别峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对指纹图谱数据进行相似度评价。采用化学计量学进行聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。结果93批“榜间”样品共鉴别出11个色谱峰。HCA与PCA可将93批“榜间”分为2类,OPLS-DA可更为细致的将其分为3类,并根据VIP>1的原则筛选出4个主要差异成分。UPLC-Q-TOF-MS和化学计量学结果表明藏药“榜间”可根据化学型分为以大花龙胆为代表的含苯甲酰基片段的环烯醚萜化学型和以蓝玉簪龙胆为代表的单环环烯醚萜化学型,其中后者根据成分含量又可分为高山龙胆组亚型和多枝组华丽系亚型。化学型分类证明“榜间”传统分类有一定的物质基础科学性但也存在纰漏。结论本次研究表明建立的HPLC指纹图谱可将复杂基原的“榜间”有效分类,以期为“榜间”质量标准的提升和临床安全用药提供有效参考。

少棘蜈蚣的DNA指纹图谱鉴别研究

目的:建立基于2个引物组合的DNA指纹图谱技术,鉴别少棘蜈蚣药材及其混伪品。方法:收集蜈蚣属少棘蜈蚣及11个易混淆种共39批样品,使用通用鉴别引物12S-L1091/12S-H1478和16S-L3428/16S-H3667扩增并进行短串联重复序列(STR)分型,获得DNA指纹图谱。结果:少棘蜈蚣12S迁移峰为420.1 bp或424.7~426.8 bp,16S迁移峰为175.5~175.6 bp,均不同于其他物种。结论:基于荧光STR分型原理建立了一种简单快捷、可用于蜈蚣药材及其混伪样品的通用DNA指纹图谱鉴别,能够完成对少棘蜈蚣药材的鉴定,并且通过2个引物结合能够鉴别蜈蚣属其他物种。

贵州传统小曲酵母菌分子指纹图谱分析

采用26S rRNA基因D1/D2区域序列分析方法将59株分离自贵州5个不同地区传统小曲的酵母菌鉴定为6个酵母菌种:1株阿萨丝孢酵母(Trichosporon asahii)、32株扣囊覆膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)、8株Saccharomycopsis malanga、4株伯顿丝孢毕赤酵母(Hyphopichia burtonii)、6株异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)和8株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。本研究展示了6个酵母菌种的WL培养基菌落特征和5.8S rRNA基因ITS区限制性片段长度多态性酶切图谱特征,为这6个菌种的快速鉴定提供依据。在菌种鉴定的基础上,本研究进一步采用串联重复-tRNA指纹图谱法分析酵母菌的种内差异,共展示了17个基因型,H.burtonii、W.anomalus与S.fibuligera分别鉴定出4、3种和8种基因型,其中S.fibuligera基因型10、11、12、15、16与17之间的遗传关系较近,而其余菌种内部基因型之间的遗传关系相对较远。

乌头类生物碱组分在CYP450中的代谢指纹图谱及对CYP450活性的影响

利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的多反应监测(MRM)技术,结合多探针底物方法,对单酯型及双酯型乌头类生物碱组分对细胞色素P450(CYP450)亚型的活性影响进行了研究;同时利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对单酯型和双酯型乌头类生物碱组分在CYP450中的代谢指纹图谱进行了研究.活性影响研究结果表明,单酯型生物碱组分对CYP2C及2D的抑制能力较强,其IC50值分别为7.44和6.74μmol/L;双酯型生物碱组分对CYP1A2,3A,2C和2D均有较弱的抑制作用,其IC50值分别为39.48,70.44,17.36和86.04μmol/L.代谢指纹图谱显示,双酯型生物碱组分在大鼠肝微粒体中有6个特异性产物可以作为该反应的特征峰.

注射用丹参多酚酸UPLC的指纹图谱与组分分析

目的建立注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱分析方法,并结合Q-TOF-MS法及IT-TOFMS法对其化学成分进行定性分析。方法采用水(含体积分数0.2%甲酸)-乙腈(含体积分数2%甲醇)为流动相,梯度洗脱,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(150 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,同时采用LC-Q-TOF-MS法提供的化合物准确相对分子质量和LC-Q-TOF-MS法分析获得的化合物多级质谱信息对注射用丹参多酚酸进行成分分析。建立了注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱集与共有模式,并以夹角余弦与相关系数对21批注射用丹参多酚酸样品进行相似度评级。结果鉴定酚酸类化合物23个;21批样品的相似度均大于0.960,确立了指纹图谱共有模式中的23个特征吸收峰。结论本方法可用于注射用丹参多酚酸的质量控制。

复方板蓝根颗粒APCI-MS指纹图谱及化学成分的LC-APCI-MS^n研究

建立了复方板蓝根颗粒提取物的大气压化学电离质谱(APCI-MS)的指纹图谱分析方法,并利用液相色谱-大气压化学电离-串联质谱(LC-APCI-MS^n)技术对主要指纹峰的归属进行确认。结果表明:质谱指纹图谱确定了10批不同来源复方板蓝根颗粒提取物的10个共有峰,各提取物的指纹图谱相似度均在97%以上。化学成分的LC-APCI-MS^n分析鉴别了复方板蓝根颗粒提取物中吲哚类、奎唑酮类、有机酸类和卟啉类等12个化合物,并确定了5个质谱指纹峰的归属。采用体外实验研究对复方板蓝根颗粒提取物的抗病毒活性进行评价,结果表明,其具有一定的抗病毒活性。该指纹图谱的精密度、稳定性和重现性良好,化学成分分析快捷、灵敏,结合化学成分分析和药效学研究,可为复方板蓝根颗粒质量控制标准的制订奠定基础,同时也为深入研究其药效物质基础和谱效关系提供理论依据。

运用GC-QqQ/MS方法建立香精香料指纹图谱的研究

运用三重串联四极杆气质联用方法(GC-QqQ/MS)通过对10批次香精香料进行多反应模式(MRM)检测,建立了香精香料的标准指纹图谱的研究方法。试验过程中,首先运用全扫描(SCAN)模式进行检测,对其中20种含量最高的组分定性分析,然后建立MRM检测方法,对其进行定量分析,10批香精香料的相似度均在99.9968%以上。该方法操作简单、节省时间、重现性好、检测限低,可用于控制香精香料的批次稳定性。

黄芩提取物多指标成分鉴定及指纹图谱的研究

目的:应用超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种活性成分及其指纹图谱同时检测的方法。方法:以ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,流速0.2 m L·min-1,检测波长275 nm,柱温30℃。结果:4种成分色谱显示分离度良好,经质谱得到各成分离子碎片,查阅相关文献均得以证实,并在同一色谱条件下检测指纹图谱,结果显示相似度良好。结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于黄芩提取物的质量控制研究。

基于HPLC-UV-ELSD指纹图谱法同时测定绞股蓝中4种成分及不同产地药材质量评价

目的:建立绞股蓝药材高效液相色谱-紫外-蒸发光散射器(HPLC-UV-ELSD)串联指纹图谱方法,并同时测定槲皮素、芦丁、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX的含量,对其质量优劣进行全面综合评价。方法:采用HPLC-UV-ELSD串联法和相似度评价软件,对15批不同产地绞股蓝药材进行指纹图谱研究,并对绞股蓝中槲皮素、芦丁、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX 4种指标性成分中的含量进行测定与分析。结果:建立了绞股蓝药材HPLCUV-ELSD串联指纹图谱法,标定了11个共有峰,指认了其中4个色谱峰;不同产地绞股蓝药材中槲皮素、芦丁、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷XLIX 4种成分的含量高低不一,质量存在差异。结论:建立了绞股蓝药材HPLC-UVELSD指纹图谱法,并结合相似度评价和4种成分的定量分析结果,较全面地反映该药材的质量,该法可用于不同产地绞股蓝药材质量的有效评价。

葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱研究

目的建立葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法。方法以0.2%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C_(18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)。结果建立了葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了39个共有峰,并利用UPLC-MS/MS及对照品定性鉴别了其中8个共有峰,对12批不同产地和品种的葛根芩连汤药材相似度进行了考察,其相似度在0.891~0.997之间。结论成功建立了葛根芩连汤的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,其精密度、重复性及稳定性良好,为葛根芩连汤的质量控制、配伍机制、制备工艺研究提供参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析技术的胡桃楸根HPLC指纹图谱分析

目的:构建胡桃楸根指纹图谱,并采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析鉴定胡桃楸根中的化学成分。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)建立胡桃楸根HPLC指纹图谱,通过相似度评价和主成分分析对23批胡桃楸根药材进行质量分析。并采用UPLC-Q-TOF-MS/MS,根据化合物的精确分子量和碎片信息,结合文献数据与课题组前期的研究结果鉴定胡桃楸根中的化学成分。结果:23批胡桃楸根样品中确定了18个共有峰,其相似度为0.731~0.986。主成分分析表明,12个成分对不同批次胡桃楸根指纹图谱的差异贡献率较大。在胡桃楸根样品中共鉴定了88个化学成分,其中包括16个共有成分和11个对胡桃楸根指纹图谱差异贡献率较大的成分。结论:胡桃楸根HPLC指纹图谱的建立以及化学成分的鉴定,为胡桃楸根的质量评价奠定了基础。

基于UPLC-Q-TOF MS的广佛手指纹图谱建立及炮制前后成分差异分析

采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)建立生、制广佛手的指纹图谱,并通过化学模式识别方法分析两者的差异成分。采用Agilent Poroshell 120 EC-C18(3.0 mm×150 mm×2.7μm)色谱柱进行分离,以0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,离子源为电喷雾电离源(ESI),在正、负离子模式下采集数据。根据分子离子峰精确质量数、二级谱图等信息,结合文献和化合物数据库并经标准品验证,共鉴定生、制广佛手中37个化学成分,包括:10个黄酮及黄酮苷类、4个香豆素类、12个有机酸类、5个糖苷类、2个柠檬苦素类及4个其它类。将采集的UPLC-Q-TOF MS数据整理并导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件,分别建立生、制广佛手的指纹图谱,其中生广佛手确定了24个共有峰,识别和鉴定出19个峰成分;制广佛手确定了22个共有峰,识别和鉴定出14个峰成分。将数据预处理后,以SIMCA-P软件建立主成分分析(PCA)与正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)统计模型,分析生、制广佛手的差异成分。PCA结果显示生、制广佛手区分明显,表明生广佛手炮制后的化学成分发生变化;采用OPLS-DA法筛选显著性差异成分为:诺米林酸、5-异戊烯氧基-7-甲氧基香豆素、棕榈酸、油酸、水合氧化前胡素,其中5-异戊烯氧基-7-甲氧基香豆素的相对含量变化最显著,可作为区分生、制广佛手的化学标志物。该研究可为生、制广佛手的质量标准以及药效学研究提供数据支持。

僵蚕水溶性物质指纹图谱及共有峰识别研究

目的采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对僵蚕水溶性物质中化学成分进行定性分析,建立僵蚕的指纹图谱和共有峰识别的分析方法。方法采用Acclaim PA 25μm C;色谱柱(4.6 mm×250.0 mm),流动相A和B分别为0.2%磷酸溶液和乙腈,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为265 nm。采用电喷雾离子源正负离子模式,检测LC-MS/MS获得的特征峰的分子量和分子碎片,并进行特征峰结构指认。结果僵蚕水溶性成分的指纹图谱发现19个共有峰,通过LC-MS/MS识别出其中10个共有峰。10批不同产地的僵蚕药材指纹图谱的相似度评价结果显示,相似度值为0.985~1.000。结论本研究建立的基于LC-MS/MS的僵蚕指纹图谱分析方法具有选择性好、专属性强和灵敏度高等优点,可以为僵蚕药材的质量评价提供技术参考。