胃差分化腺癌根治术后辅助化疗的临床研究

目的：观察和比较HELF方案和HELF／HPLF交替方案对胃差分化腺癌（低分化腺癌、粘液腺癌、印戒细胞癌）根治术后患者无病生存期（DFS）、总生存期（OS）的影响。方法：经组织学证实为低分化腺癌、粘液腺癌及印戒细胞癌的Ⅱ-Ⅲ期胃癌根治术后患者，随机分配至A组（单独HELF方案化疗）或B组（HELF／HPLF方案交替化疗），术后3—5周开始化疗，化疗4—6周期。结果：共入组80例患者，72例可按要求随访及评价不良反应，A组、B组各36例。全组患者共随访7—98月，A组与B组中位随访期差异无统计学意义（30月vs．33月，P=0．383）。A组患者的DFS为4～97月（中位值20月），B组为5～98月（中位值39月），两组差异有统计学意义（P=0．025）。A组的OS为10～97月（中位值28月），B组为7～98月（中位值48月），以B组生存时间更长（P=0．042）。主要不良反应为骨髓抑制及消化道反应，多为Ⅰ-Ⅱ度。结论：HELF方案与HPLF方案交替用于差分化胃腺癌根治术后的辅助治疗，在推迟肿瘤复发转移及延长生存期方面可能优于单用HELF方案。

IL-1ra调节人牙周膜成纤维细胞ALP活性的实验研究

目的：观察人重组ＩＬ－１β对人牙周膜成纤维细胞（ＨｕｍａｎＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＬｉｇａｍｅｎｔａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＰＬＦ）的碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响以及ＩＬ－１ｒａ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏ－ｎｉｓｔ，ＩＬ－１ｒａ）对ＩＬ－１β这一生物活性的阻断作用。方法：用碱性磷酸酶测定法。结果：经ＩＬ－１β作用后，ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性降低，经一定浓度的ＩＬ－１ｒａ作用后，ＩＬ－１β的这一作用相对减弱，ＡＬＰ活性增高。结论：ＩＬ－１ｒａ能够有效地阻断ＩＬ－１β对降低ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性的作用。

牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞的生物学效应

目的：观察在牛血小板衍化生长因子作用下人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ和胶原蛋白合成的情况。方法：采用体外细胞培养技术和核素掺入法。结果：２０ｎｇ／ｍｌ～６０ｎｇ／ｍｌ牛血小板衍化生长因子可明显促进人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ合成，４０ｎｇ／ｍｌ浓度使细胞ＤＮＡ合成在２４ｈ达最高峰；对细胞的胶原蛋白合成无明显促进作用。结论：牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ合成有促进作用，在牙周组织的创伤修复中可能起重要作用。

牛血小板衍化生长因子对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

目的：对经牛血小板衍化生长因子作用的人牙周膜成纤维细胞超微结构进行观察。方法：透射电镜观察。结果：发现细胞超微结构发生了明显的变化，包括粗面内质网扩张和增多，发达的线粒体与大量的多聚核糖体形成，胞核增大，核内常染色质增多等。结论：牛血小板衍化生长因子可促进人牙周膜成纤维细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白质合成旺盛，代谢、增殖活跃。提示这些变化可能与细胞在该因子作用下生物学功能增强有密切关系。

p38丝裂原激活蛋白阻断剂对机械压力诱导人牙周膜成纤维细胞表达白介素-6的影响

目的分析p38丝裂原激活蛋白(MAPK)在压力诱导人牙周膜成纤维细胞(HPLF)合成炎症因子白介素(IL)-6过程中所起的作用。方法以p38MAPK阻断剂SB203580对HPLF预处理60min,然后用酶联免疫吸附法检测HPLF受200kPa压力刺激后培养上清内IL-6蛋白水平,比较预处理组与对照组2之间IL-6含量的差异。结果加压后16和24h两时间点加力组均较对照组1IL-6表达量显著增高;而预处理组较对照组2IL-6表达量下降。结论p38MAPK是机械压力诱导HPLF产生IL-6的重要环节。

中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖(LPS)抑制人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响,并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐(MTT)比色试验和透射电子显微镜技术(TEM)。结果LPS浓度为100μg/ml时明显抑制细胞活性,同时加入LPS和黄芩苷后,细胞活性明显增强(P<0.05)。100μg/mlLPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤,特别是线粒体损伤严重,同时加入LPS和黄芩苷(10μg/ml)后,与LPS组比较,超微结构损伤减轻,细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖,对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用,其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响。方法:分离培养HPLFS,随机分为21%O2对照组和10%、5%、2%O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果:MTT法检测,与对照组比,12h、24h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2%O2)24h组具有统计学差异;48h、72h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义。透射电镜下,重度缺氧24h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72h细胞发生退变,溶酶体增多。结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因。

根管消毒药物体外细胞毒性和细胞回复能力的研究

目的:探讨5种常用根管消毒药物的细胞毒性以及毒性的可逆性,寻找一种较理想的根管消毒药物。方法:用体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs),通过MTT法、ALP活性测定法以及透射电镜等方法,系统评价甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、甲硝唑、氢氧化钙和中药制剂的细胞毒性及其毒性的可逆性。采用SPSS11.5软件包,所有数据均经正态分布检验、方差齐性检验、t检验和方差分析。结果:FC和CP对HPLFs的增殖、ALP活性均有显著抑制作用(P<0.01、P<0.05)。FC的细胞毒性为3～4级,细胞回复度<30%。CP的细胞毒性为1～3级,细胞回复度<30%。甲硝唑对HPLFs的增殖、ALP活性有轻微抑制作用,细胞毒性为1级,细胞回复度为32%～85%。氢氧化钙和中药制剂对HPLFs的增殖和ALP活性均无显著抑制作用(P>0.05),细胞毒性为0～1级,细胞回复度>90%。通过透射电镜观察,HPLFs的超微结构显示,FC、CP有重度毒性,甲硝唑有轻度毒性,而氢氧化钙和中药制剂基本无毒性。结论:FC、CP细胞毒性大,且毒性不可逆;甲硝唑有轻微细胞毒性,但毒性可逆;氢氧化钙和中药制剂无细胞毒性。临床上可用氢氧化钙或中药制剂作为较理想的根管消毒药替代有毒性的FC、CP。

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同程度缺氧对人牙周膜成纤维细胞(HPLFS)增殖、分化的影响。方法:随机将HPLFS分为4组:210mL/LO2对照组、100、50、20mL/LO2缺氧组(轻中重缺氧组),用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒分别检测HPLFS的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:第24小时,重度缺氧可促进HPLFS细胞增殖,第48、72小时,重度缺氧则明显抑制了细胞增殖;中、重度缺氧对细胞碱性磷酸酶活性表达随缺氧时间则明显受到抑制。结论:缺氧时间、程度对HPDLFs增殖和ALP活性表达存在效应关系,长期中、重度缺氧不利HPLFS的生长及向成骨分化能力,提示牙周组织改建修复功能降低。

IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究

目的通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料。方法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定。取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强。结论IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关。

涎腺腺样囊性癌来源外泌体促进成纤维细胞PD-L1表达

目的:研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)来源的外泌体(exosome,EXO)对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法:通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型;使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育,以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取;将EXO与HPLF细胞共孵育后,全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因,GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路;使用qPCR、Western blotting和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果:SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF细胞内吞摄取;EXO处理HPLF细胞后,细胞中PD-L1分子显著上调表达(Fold change=10.19),差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反应信号通路;体外实验证明EXO可以从mRNA和蛋白水平显著促进HPLF细胞中PD-L1的表达(24.7±4.75 vs 1.03±0.11,P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞来源EXO可以促进HPLF细胞中免疫检查点配体PD-L1的表达。

人牙周膜成纤维细胞体外培养条件的优化

目的 优化体外人牙周膜成纤维细胞(HPLF)培养条件,以提高原代HPLF培养成功率。方法 采用玻璃及塑料培养瓶、DMEM、RPMI1640培养液以及胎牛血清、小牛血清,分别比较原代牙周膜成纤维细胞游出率。结果 塑料培养瓶细胞游出率以及细胞游出最短时间均优于常用玻璃培养瓶;两种不同血清比较,胎牛血清的组织块贴壁以及细胞游出率均明显优于小牛血清;RPMI1640比DMEM培养液更适合于HPLF培养。结论 商品塑料培养瓶、胎牛血清、RPMI1640是提高体外HPLF培养成功率的关键。

从夏侧金盏花种子中分离得到新的强心甾类化合

作者从夏侧金盏花种子中分离得到4个新化合物，其中3个新的强心甾类及其苷类化合物，同时评估了上述化合物对Hsc．2、HSc．3、HSC．4、HL．60、HGF、HPLF、HPC细胞株的细胞活性。

肿瘤坏死因子－α对人牙周膜纤维细胞碱性磷酸酶活性的抑制效应

为探讨肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）在尖周病、牙周病发病中的作用，以寻求新的治疗途径。本研究采用人基因重组型ＴＮＦ－α在体外培养下，观察其对人牙周膜纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＰＬＦ）碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响。结果发现，ＨＰＬＦ经ＴＮＦ－α作用后，ＡＬＰ活性显著低于空白对照组，该抑制效应有明显的浓度依赖性。研究表明，ＴＮＦ－α对人牙周膜纤维细胞的碱性磷酸酶活性有显著抑制作用。

IL-1ra对人牙周膜成纤维细胞骨钙素分泌的调节作用

目的 观察白细胞介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)与IL 1β对人牙周膜成纤维细胞 (HPLF)骨钙素分泌的影响。方法 采用骨钙素放射免疫测定法。结果 经IL 1β单独作用的HPLF的骨钙素浓度与对照组相比有显著性差异 ;一定浓度的IL 1ra与IL 1β共同作用HPLF后 ,骨钙素浓度比单独IL 1β作用组的低。结论 IL 1ra能竞争性地抑制IL 1β的生物学活性 。

IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达研究

目的:研究IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达水平的变化,为细胞因子网络调控牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法:采用原代培养的人牙周膜成纤维细胞,取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用RT-PCR法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果:在正常的人牙周膜成纤维细胞中未见TRAF6基因表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随着IL-1β干预的浓度增高,其表达水平上调。结论:IL-1β干预后TRAF6在HPLFs中的表达水平的变化提示TRAF6可能是参与牙周膜成纤维细胞功能调控的重要信号分子。