IL-1β作用于人牙周膜成纤维细胞后TRAF6蛋白表达的研究

目的通过研究IL-1β干预下,TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的蛋白表达,为细胞因子网络对细胞功能调控作用的研究提供新资料。方法原代培养人牙周膜成纤维细胞,并进行免疫学鉴定。取5～8代细胞以IL-1β梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果TRAF6在正常的人牙周膜成纤维细胞中呈阴性表达,IL-1β干预后,TRAF6呈阳性表达,并且随IL-1β干预的浓度的升高而增强。结论IL-1β作用后,TRAF6在牙周膜成纤维细胞出现表达,且与IL-1β作用浓度相关。

根管消毒药物体外细胞毒性和细胞回复能力的研究

目的:探讨5种常用根管消毒药物的细胞毒性以及毒性的可逆性,寻找一种较理想的根管消毒药物。方法:用体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs),通过MTT法、ALP活性测定法以及透射电镜等方法,系统评价甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、甲硝唑、氢氧化钙和中药制剂的细胞毒性及其毒性的可逆性。采用SPSS11.5软件包,所有数据均经正态分布检验、方差齐性检验、t检验和方差分析。结果:FC和CP对HPLFs的增殖、ALP活性均有显著抑制作用(P<0.01、P<0.05)。FC的细胞毒性为3～4级,细胞回复度<30%。CP的细胞毒性为1～3级,细胞回复度<30%。甲硝唑对HPLFs的增殖、ALP活性有轻微抑制作用,细胞毒性为1级,细胞回复度为32%～85%。氢氧化钙和中药制剂对HPLFs的增殖和ALP活性均无显著抑制作用(P>0.05),细胞毒性为0～1级,细胞回复度>90%。通过透射电镜观察,HPLFs的超微结构显示,FC、CP有重度毒性,甲硝唑有轻度毒性,而氢氧化钙和中药制剂基本无毒性。结论:FC、CP细胞毒性大,且毒性不可逆;甲硝唑有轻微细胞毒性,但毒性可逆;氢氧化钙和中药制剂无细胞毒性。临床上可用氢氧化钙或中药制剂作为较理想的根管消毒药替代有毒性的FC、CP。

涎腺腺样囊性癌来源外泌体促进成纤维细胞PD-L1表达

目的:研究涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)来源的外泌体(exosome,EXO)对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法:通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型;使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育,以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取;将EXO与HPLF细胞共孵育后,全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因,GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路;使用qPCR、Western blotting和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果:SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF细胞内吞摄取;EXO处理HPLF细胞后,细胞中PD-L1分子显著上调表达(Fold change=10.19),差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反应信号通路;体外实验证明EXO可以从mRNA和蛋白水平显著促进HPLF细胞中PD-L1的表达(24.7±4.75 vs 1.03±0.11,P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞来源EXO可以促进HPLF细胞中免疫检查点配体PD-L1的表达。