HPPH光动力学治疗鼠G422脑胶质瘤的实验研究

目的:通过对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型HPPH光动力学治疗,从肉眼、肿瘤生长曲线、病理、观察各剂量组疗效,并与对照组及HpD作对比,寻找HPPH-PDT治疗鼠G422脑胶质瘤合适的HPPH剂量。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单注射HpD组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg、0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HpD组、HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24小时后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm2;功率密度100 mW/cm2,每光斑照射34min,能量密度为204 J/cm2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm2。肉眼观察肿瘤外形变化,测量(治疗前、3、5、7、9 d)肿瘤体积,于PDT后9 d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织,作病理检查。结果:可见未经光动力治疗对照组肿瘤迅速生长,第9天体积平均长至治疗前的4.86～5.97倍,HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组与治疗前体积平均比是0.94及0.97倍,HPPH-PDT 0.15 mg/kg组是1.09倍、HpD-PDT组是1.6倍,光动力学组肿瘤的生长速度明显低于对照组,P值<0.05,有统计学差别,HPPH-PDT各组优于HpD-PDT组。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果优于HPPH-PDT 0.15 mg/kg组、HpD-PDT组(P值<0.05,有统计学差别)。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果相似。在同样能量密度时高功率密度组第9天疗效较低能量密度稍好,但无统计学差别。故由抑瘤效果层面分析HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤有抑制作用,并与HPPH剂量相关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤的抑瘤作用较HpD-PDT强。从病理观察鼠G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤各剂量HPPH-PDT组及HpD-PDT治疗组,治疗9 d后仅个别标本肿瘤组织及细胞已消失,大部分肿瘤组织明显变性坏死,但深部仍有带活性肿瘤细胞,与对照组成巢状生长大片活性肿瘤细胞有明显差别。且坏死程度,HPPH-PDT组明显优于HpD-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组优于0.15 mg/kg HPPH-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kg HPPH-PDT组两组程度相似,故0.3mg/kg是较合适的HPPH-PDT光敏剂剂量。结论:从抑瘤效果、病理分析,HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤生长有抑制作用,抑瘤效果与HPPH剂量有关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤抑瘤效果较HpD-PDT强。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤、腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15、0.3、0.45mg/kg组)、HpD-PDT 5mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24h后以波长665nm的半导体激光照射HPPHPDT组和单激光组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射17min,能量密度为204J/cm^2;以波长630nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm^2。于PDT后9d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织及血液,行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后及对照组缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)。结果:鼠G422脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤,空白、单注药和单照光三组对照组之间缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达值两两比较,P>0.05,差别无统计学意义。不同剂量HPPH、HpD光敏剂PDT治疗鼠G422脑胶质瘤脑部移植瘤,HIF-1α、VEGF平均值,HPPH-PDT各组较HpD-PDT低,0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT组低于0.15mg/kg-PDT组及HpD-PDT组,P<0.05,有显著差异。HPPH-PDT 0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT二组值接近。HPPH-PDT 0.3mg/kg-PDW组、0.45mg/kg-PDT接近正常脑值,0.15mg/kg-PDT及HpD-PDT组稍高于正常脑值,但P>0.05,无显著差异,HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注射HpD组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组),P值<0.05,有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值,血液的值较肿瘤低,接近或稍高于正常脑值。不同剂量HPPH、HPD光敏剂PDT治疗鼠G422胶质瘤腋部皮下移植瘤HIF-1α、VEGF平均值,HPPH-PDT各组较HpD-PDT低,0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT组低于0.15mg/kg-PDW组及HpD-PDT组,P<0.05,有显著差异,HPPH-PDT0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT二组值接近。HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注HpD对侧未治疗组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组),且P<0.05,有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值,血液的值较肿瘤低,接近或稍高于正常脑值。结论:HPPH-PDT能诱导缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达降低,与HpD-PDT相比,表达更低。HPPH-PDT疗效优于HpD-PDT,本实验条件下HPPH-PDT 0.3mg/kg是较合适的光敏剂剂量。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤突变型p53蛋白和p16蛋白表达的影响

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤突变型p53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH组(0.45mg/kg)、单665nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15mg/kg组、0.3mg/kg组、0.45mg/kg组)、HpD-PDT组(5mg/kg)。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24h后以波长665nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单激光组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射17min,能量密度为204J/cm^2;以波长630nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm^2。于PDT后9d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后突变型p53蛋白(mutant type p53 protein,mtp53)和p16蛋白表达变化。结果:空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT各剂量组与空白对照组比较,mtp53蛋白表达值明显降低,p16蛋白表达值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。0.3mg/kg组和0.45mg/kg组与0.15mg/kg组相比,mtp53蛋白表达值降低,p16蛋白表达值升高,差异有统计学意义(P<0.05),0.45mg/kg组mtp53蛋白表达值稍低于0.3mg/kg组,p16蛋白表达值稍高于0.3mg/kg组,差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT0.3mg/kg组和0.45mg/kg组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT组,p16蛋白表达值高于HpD-PDT组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPPH-PDT0.3mg/kg是适宜的HPPH剂量。HPPH-PDT诱导mtp53蛋白表达降低,p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比,HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低,p16蛋白表达更高。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤各部位突变型p53蛋白和p16蛋白表达及与HpD-PDT对比

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤各部位mtp53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单注射HPD 5 mg/kg组、单665 nm激光照射组、单630n m激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg组、0.3 mg/kg组、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HPD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂,24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm^2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm^2。于PDT后9 d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后肿瘤及对照组各部位(肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织)、血液突变型p53蛋白(mutant type p53 protein,mtp53)和p16蛋白表达变化。结果:空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT各剂量组及HPD-PDT组与空白对照组比较,mtp53蛋白表达值明显降低,p16蛋白表达值明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。且接近正常脑组织值,或p16蛋白表达稍低于正常脑值,mtp53蛋白值表达稍高于正常脑组织值。0.3mg/kg和0.45mg/kg HPPH-PDT组与0.15 mg/kg HPPH-PDT组及HPD-PDT相比,mtp53蛋白表达值降低,p16蛋白表达值升高,P<005,差别有统计学意义,0.45 mg/kgHPPH-PDT组mtp53蛋白表达值稍低于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,p16蛋白表达值稍高于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT0.3 mg/kg组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT5 mg/kg组,p16蛋白表达值高于HpD-PDT 5 mg/kg组,P<0.05,差别有统计学意义。肿瘤边缘mtp53蛋白值稍高于肿瘤值,血液低于肿瘤值;p16蛋白值肿瘤边缘稍低于肿瘤值,血液高于肿瘤值。结论:HPPH-PDT能诱导mtp53蛋白表达降低,p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比,HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低,p16蛋白表达更高。本次实验条件下HPPH 0.3 mg/kg是适宜的HPPH-PDT剂量。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤肿瘤生长实验研究的磁共振表现

目的:以不同剂量新型光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞瘤模型,通过磁共振平扫及增强扫描来测定各组肿瘤的大小,绘出生长曲线,选择最佳的治疗剂量并与传统HPD-PDT(血卟啉光动力学疗法)作对比,并以病理、电镜检查作验证。方法:建立大鼠C6脑胶质细胞瘤模型建立,设立对照组(肿瘤未治疗组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单注射HPD5mg/kg组、单波长667nm激光照射组、单波长630nm激光照射组),光动力学治疗组(HPPH-PDT各组(0.15、0.30、0.45mg/kg组)、HpD-PDT 5mg/kg组)。单注射HPPH 0.45mg/kg组、HPPH-PDT组和单注射HPD 5mg/kg组、HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,光动力学组注光敏剂18h后照激光。以波长667nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单667nm激光照射组肿瘤,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2;以波长630nm的半导体激光照射HpDPDT组及单630nm激光照射组肿瘤,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2。肉眼观察鼠行为变化,以磁共振平扫及增强扫描测量治疗前、治疗后第7、14天或对照组肿瘤生长第7、14、21天肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,于PDT后14天或对照组肿瘤生长21天鼠脑,磁共振增强扫描测量后处死鼠,取脑组织作病理、电镜检查。结果:大鼠PDT治疗后,光动力学治疗组疗效较好的鼠,未出现异常表现,而对照组及光动力学治疗疗效较差组出现大鼠消瘦、萎靡或偏瘫、视盲。所有鼠均未出现皮肤红斑、水肿等光毒性反应。磁共振增强扫描测定肿瘤生长不同时间体积,并绘出肿瘤生长曲线。光动力学治疗前及治疗后14天肿瘤体积比(P14/P0),即肿瘤生长第21天与7天比(T21/T7),HPPH 0.15、0.30、0.45mg/kg-PDT组、HPD5mg/kg-PDT组值为4.43±4.80、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组单注药HPPH 0.45mg/kg组、单注药HPD5mg/kg组、单激光667nm照射组、单激光630nm照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75。T检验治疗组与对照组有显著及非常显著差别(P值<0.050、0.001),治疗组中HPPH各组疗效优于HPD5mg/kg-PDT组,T检验有显著差异(P值<0.050)HPPH-PDT组中HPPH 0.3mg/kg-PDT组、HPPH 0.45mg/kg-PDT组疗效接近,T检验无显著差别(P值>0.050),但明显优于HPPH0.15mg/kg-PDT组,T检验有显著差异,(P值<0.050)各对照组间无明显差异(P值>0.050)。病理检查正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗对照组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH 0.15mg/kg-PDT较差一些、而HPPH 0.3mg/kg-PDT、HPPH 0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞,而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。电镜变化:大鼠正常脑可见神经元细胞及有髓鞘轴突及无鞘轴突。大鼠C6脑胶质细胞移植瘤未治疗对照组:均是活的肿瘤细胞,细胞体积大,细胞膜、核膜完整,核大,有核仁,有核切迹。大鼠C6脑胶质细胞移植瘤光动力学治疗组出现不同程度细胞凋亡及凋亡坏死的表现,核固缩,染色质边集的凋亡细胞,凋亡小体,细胞质空泡变性,线粒体空泡变性,细胞膜、核膜破裂。随着剂量增加,肿瘤细胞凋亡、坏死程度增加。HPPH 0.15mg/kg-PDT早期凋亡肿瘤细胞多见,有较多有活性肿瘤细胞;0.30mg/kg及0.45mg/kg HPPH-PDT组肿瘤凋亡及坏死程度增加。程度相似,但边缘脑组织有少许神经元固缩,程度0.45mg/kg HPPH-PDT组大于0.30mg/kg HPPH-PDT组。HPD-PDT组也是以早期凋亡肿瘤细胞多见,有较多有活性的肿瘤细胞,肿瘤的凋亡程度较HPPH 0.15mg/kg-PDT差。结论:磁共振增强扫描成像分析,能在无创情况下动态观察大鼠接种C6胶质瘤脑组织内肿瘤的生长情况,测量肿瘤肿块大小。HPPH-PDT能治疗大鼠脑C6胶质瘤,疗效优于HPD-PDT,HPPH 0.3mg/kg为HPPH-PDT最佳光敏剂剂量。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤实验研究的磁共振波谱技术MRS的变化

目的：是研究不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞移植瘤模型,以磁共振波谱技术（MRS）无创观察不同时间的变化、评价疗效及选择光敏剂HPPH最佳剂量并与常规光敏剂血卟啉衍化物（HPD）光动力学治疗及对照组作对比。方法：建立大鼠C6脑胶质细胞瘤模型,设立对照组（空白对照组、单注射HPPH0.45mg/kg组、单注射HPD5mg/kg组、单波长667nm激光照射组、单波长630nm激光照射组）、HPPH-PDT各组（HPPH0.15、0.30、0.45mg/kg组）、HPD-PDT5mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注HPD组、HPD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,光动力学治疗组注光敏剂后18小时进行激光照射.HPPH-PDT各组和单667nm激光照射组肿瘤以波长667nm的半导体激光照射,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2;HPD-PDT组及单630nm激光照射组肿瘤以波长630nm的半导体激光照射,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2。以磁共振平扫、增强扫描及磁共振波谱技术（MRS）观察光动力学治疗组及对照组肿瘤不同时间的变化,光动力学治疗前、治疗后7、14天（P0、P7、P14天水）;接种后第7、14、21天;（T7、T14、T21天）。于PDT后14天或肿瘤生长第21天磁共振扫描后处死鼠,取脑组织作病理检查。结果：本文观察大鼠C6脑胶质瘤模型接种不同时间段波谱cho/NAA均值,正常脑cho/NAA均值在第1、7、14、21天测定在0.5左右,而接种后的大鼠C6脑胶质瘤及未光动力学治疗各组7、14、21天测定波谱cho/NAA均值为5.532±4.066-5.574±3.382、6.488±2.169-6.744±3.685、8.684±5.42-8.938±4.08,随着肿瘤的长大该均值在不断加大。正常脑与移植瘤未光动力学治疗各对照组波谱cho/NAA值T-检验,P值小于0.05或0.001有显著或非常显著差异。而移植瘤未光动力学治疗各对照组、各时间组间P〉0.05,各组间无显著差异。光动力学治疗组cho/NAA均值HPPH 0.30、0.45、0.15mg/kg-PDT、HPD-PDT为0.832±0.334、0.818±0.166、6.912±3.81、7.456±3.33,前两组明显小于后两组,疗效优于后两组,后两组,前者小于后者,疗效又优于后者。总的HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。T检验前两组HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组间比P〉0.05无显者差别,与正常脑比P〉0.05无显著差别,且接近正常脑值,与对照未治疗组比P值〈0.05有显著差别,与后两组HPPH0.15mg/kg-PDT、HPD-PDT比P值〈0.05有显著差异,后两组间比P〉0.05无显者差别。以磁共振增强扫描测定各组肿瘤体积,P14/P0（光动力学治疗后14,与光动力学治疗前）HPPH0.15、0.30、0.45mg/kgPDT组、HPD5mg/kg-PDT组值为4.43±4.8、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组T21/T7（肿瘤生长21天与肿瘤生长第7天比）单注药HPPH0.45mg/kg组、单注药HPD5mg/kg组、单激光670nm照射组、单激光630nm照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75。第21天病理表现,正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞量;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH0.15mg/kg-PDT较差一些、而HPPH0.3、0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞;而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。结论：磁共振平扫、增强、MRS技术对大鼠脑组织进行扫描分析,能在无创情况下动态观察接种C6脑胶质瘤后及光动力学治疗后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,能了解病变的能量代谢、生化改变,并对特定化合物进行定量分析。HPPH-PDT能治疗大鼠C6脑胶质瘤移植瘤,剂量以HPPH0.30mg/kg较佳。HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤实验研究的磁共振弥散成像DWI的表现

目的：研究不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞移植瘤模型,无创观察磁共振波谱技术（DWI）变化、评价疗效及选择光敏剂HPPH最佳治疗剂量并与常规光敏剂血卟啉衍化物（HPD）光动力学治疗及对照组作对比。方法：建立大鼠C 6脑胶质瘤移植瘤模型,以不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH（0.15、0.3、0.45mg/kg）光动力学治疗,尾静脉注药后18h,以波长667nm激光照射大鼠脑肿瘤,照射功率密度200mW/cm2,照射时间20min,能量密度240J/cm2,于治疗前、治疗后7、14天（P0、P7、P14）,即肿瘤接种后第7、14、21天（T7、T14、T21天）,以磁共振平扫、增强扫描及弥散技术（DWI）无创测定肿瘤大小及ADC值。并与HPD-PDT、正常脑、对照组（未治疗、单注药、单照激光）肿瘤组的ADC值作对比。最后以病理验证。结果：ADC均值正常脑在406.01±53.59-436.25±50.23间,未治疗脑肿瘤组均值T7天、T14天、T21天分别为738±219.57、660.65±105.32、551.37±103.58,由于肿瘤长大,肿瘤细胞数的增加使弥散成像ADC值下降。各单注药、单激光对照组的变化同未治疗空白组规律相似。T检验,各未光动力学治疗对照组间比P值〉0.05无明显差异,与正常脑比P值〈0.05有显著差异。光动力学治疗组P0组与未治疗对照组相似ADC均值在609.78-705.96之间;P7天,ADC均值由于治疗后脑组织的水肿均有升高,以HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组均值上升较多（782.2±95.6、779.01±291.1）,其次HPPH 0.15mg/kg-PDT组（765.22±110.13）,HPD-PDT组降低一些（644.13±94.17）;P14天,ADC均值明显下降,由于肿瘤细胞光动力学治疗后的凋亡、死亡,ADC均值下降,HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组435.86±46.04、429.34±70.05接近正常脑值;HPPH 0.15mg/kg-PDT组稍高619.98±93.49,HPD-PDT组550.13±94.48,这两组由于肿瘤细胞的凋亡死亡较差,有较多的肿瘤细胞存在,影响弥散值,HPPH0.15mg/kg-PDT组ADC值高于HPD-PDT组,肿瘤细胞较后者少。各组ADC值T检验,光动力学治疗组间HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT两组比P〉0.05无显著差别,上两组与HPPH0.15mg/kg-PDT、HPD5mg/kg-PDT,P值〈0.05有显著的差别,与正常脑比P值〉0.05无显著差异,与未光动力学治疗对照组比P值〈0.05有显著差别;HPPH 0.15mg/kg-PDT、HPD5mg/kg-PDT二组间比,P值〉0.05无显著差别,上两组与正常脑比,P值〈0.05有显著差异,与未光动力学治疗对照组比,P值〉0.05无显著差别。以磁共振增强测定各组肿瘤体积,P14/、P0HPPH0.15、0.30、0.45mg/kg-PDT组、HPD5mg/kg-PDT组均值为4.43±4.8、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组T21/T7单注药HPPH0.45mg/kg组,单注药HPD5mg/kg组、单670nm激光照射组、单630nm激光照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75.大鼠脑接种肿瘤第21天病理表现正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH 0.15mg/kgPDT较差一些、而HPPH 0.30、0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞;而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。结论：磁共振增强、DWI技术能在无创情况下动态观察接种C6脑胶质瘤后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,了解肿瘤细胞的凋亡情况以及肿瘤细胞密集区域,测量肿瘤肿块大小。HPPH-PDT能治疗大鼠C6脑胶质瘤移植瘤,光敏剂剂量以HPPH 0.30mg/kg较佳。HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。

HPPH光动力学治疗鼠G422脑胶质瘤诱导肿瘤细胞凋亡的实验观察

目的:通过对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型的HPPH光动力学治疗,从电镜、FCM测定细胞凋亡率,观察各剂量组疗效,并与对照组及HpD-PDT作对比,寻找HPPH-PDT治疗鼠G422脑胶质瘤合适的HPPH剂量。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单注射HpD组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15、0.3、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HpD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂,24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm^2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm^2。于PDT后9 d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织,作电镜、FCM细胞凋亡检查。结果:以流式细胞仪及电镜观察肿瘤细胞凋亡,显示鼠G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤HPPH-PDT各剂量组、HpD-PDT组与空白、单注药和单照光三组对照组比较,肿瘤细胞凋亡率明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。HPPH-PDT各组细胞凋亡率高于HpD-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组的细胞凋亡率明显高于0.15 mg/kgHPPH-PDT组,HpD-PDT组,P<0.01,差别有统计学意义,0.45 mg/kg HPPH-PDT组细胞凋亡率稍高于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,P>0.05,差别无统计学意义。故HPPH0.3 mg/kg是适宜的HPPH-PDT光敏剂剂量。HPPH-PDT0.3 mg/kg组和HpD-PDT组比较,肿瘤细胞凋亡率明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。故由肿瘤细胞凋亡率和电镜分析,HPPH-PDT能诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡,凋亡率与HPPH剂量相关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较HpD-PDT强。结论:从电镜、FCM观察HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤生长有抑制作用,能诱导肿瘤细胞凋亡及死亡。凋亡率与HPPH剂量有关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较HpD-PDT强。