丙烯酰胺诱导人白血病HL-60和NB_4细胞hprt基因的分子突变谱

为了研究丙烯酰胺的遗传毒理作用 ,采用单细胞克隆培养 ,双向筛选计数 ,多重PCR扩增与电泳分析 ,研究了诱导HL 6 0和NB4 两种细胞hprt基因突变率及分子突变谱 .发现只有丙烯酰胺高剂量组 (70 0mg·L- 1)才对两种细胞有明确的致hprt基因突变作用 ;丙烯酰胺诱发突变主要由点突变和缺失两部分组成 (40 .0 %～ 6 6 .7% ,33.3%～ 6 0 .0 % ) ,而自发突变几乎全是点突变 (90 .0 %以上 ) ,两种细胞均无全基因缺失型 ;缺失突变可以发生于hprt基因上的每个外显子 (除外显子 7/ 8以外 ) ,较集中于基因的 3′末端 ,且诱发突变中绝大多数是点突变与单个外显子缺失 (93.3% ,86 .1% ) ,两种细胞情况类似 .结果提示 ,丙烯酰胺具有较弱的诱导hprt基因突变的作用 ,且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样 。

昆明山海棠诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究

为研究昆明山海棠(THH)的遗传毒性和药理作用，采用单细胞克隆培养,双向筛选计数，多重PCR扩增与电泳分析，研究了THH诱导HL－60细胞HPRT基因突变率及分子突变谱。发现随着染毒剂量的增加，细胞接种存活率逐渐下降，突变频率明显升高；THH诱发突变主要由缺失和点突变两部分组成(46.6％和53.4％)，而自发突变几乎全是点突变(92.3％)；HPRT基因突变位点在各个外显子的分布较集中于基因的3′末端，且外显子1缺失只出现于全基因缺失中，外显子7/8与9多表现为连锁缺失(71.4％)。结果提示，THH具有明确的诱导HPRT基因突变的作用，且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样，这可能与其作用机制有关。上述发现有助于阐明THH遗传毒性作用机理。

镉和氯化汞致体细胞hprt基因位点突变的作用和突变频率的研究

目的 了解镉和汞对细胞hprt基因位点的影响 ,探讨化学诱变物致机体损伤早期检测的敏感指标。方法 采用多核细胞法研究化学诱变物氯化汞和镉对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果 氯化汞可诱发大鼠血淋巴细胞hprt基因位点突变 ,突变频率随着染毒浓度的增加而升高 ,突变频率 ^Y (10 -3 )与氯化汞浓度C (mg/kg)之间拟合成 ^Y =0 0 4 2 3C +1 0 4 6 3的直线回归方程。不同浓度金属镉也能致hprt基因突变 ,镉浓度与突变频率之间有剂量反应关系。 结论 氯化汞和镉对血淋巴细胞hprt基因位点及突变频率有影响 。

用BrdU法研究γ射线外照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变

用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法检测 ,不同剂量γ射线外照射诱发正常人外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率 (MFs) ,并研究其剂量效应关系。抽取正常成年人静脉血 ,分成 5组 ,分别用 0 .0— 4 .0Gy的不同剂量γ射线照射 ,全血培养后用BrdU法检测淋巴细胞HPRT基因MFs。结果表明 ,正常人外周血淋巴细胞的MFs随外照射剂量的增加而上升 ,且剂量效应关系符合线性平方模型。研究证明了BrdU法是一种快速、简便、较敏感的检测外照射诱发HPRT基因突变的方法 ,HPRT基因辐射突变可作为生物剂量计。

氯化汞诱发人离体血细胞hprt基因位点突变频率的研究

为了解化学诱变物对血细胞hprt基因位点的影响 ,采用多核细胞法 (CB法 )研究了不同浓度氯化汞对人血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果表明 :5 0 μg/ml以下的氯化汞可诱发人淋巴细胞hprt基因位点突变 ,且突变频率随着体外染毒浓度的增加而升高 ,突变频率 ^Y (10 -3)与氯化汞的浓度C (μg/ml)之间可以拟合成 ^Y =0 9948+ 0 0 10 6C的直线回归方程。

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了 60 Coγ射线 0～ 4 .0 Gy照射诱发的体细胞 HPRT基因突变 ,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明 ,HPRT基因突变频率 Y随照射剂量 D ( Gy)的增加而增加 ,在 0～ 4 .0 Gy剂量范围内可拟合为 Y=0 .4 0 2 2 +0 .2 710 D - 0 .0 4 60 D2 ,在 0～ 1.0 Gy低剂量范围内 ,更适于拟合直线模型 Y =0 .382 7+0 .2 94 8D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性。说明 HPRT基因突变可以用于低 LET辐射剂量估算 ,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。

5例原发性痛风患者HPRT基因的克隆和序列分析

原发性痛风是先天性嘌呤代谢缺陷症,与嘌呤代谢相关酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT,EC 2.4.2.8)、磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)等缺陷有关。克隆了正常中国人和4个中国原发性痛风家族5位患者的HPRT基因,序列分析表明,正常中国人及Case5患者的HPRT编码区序列与报道的序列(GeneBank登录号M26434)完全一致,而在3个中国痛风家族4位患者的HPRT基因编码区中共发现11个新突变,包括3个同义突变、1个无义突变和7个错义突变。这是关于中国大陆原发性痛风患者HPRT基因突变的首次报道。

肿瘤患者HPRT基因的调查

目的了解肿瘤患者与健康人群体细胞HPRT基因突变频率,探讨体细胞HPRT基因突变与肿瘤发生的关系。方法采用多核细胞法研究肿瘤患者外周血淋巴细胞HPRT基因位点的突变频率,并与正常人群进行对比。结果肿瘤患者外周血淋巴细胞转化率较正常对照组低(P<0.05);而淋巴细胞HPRT基因突变率较正常对照组高(P<0.05);不同种类癌症患者外周血HPRT基因突变频率无显著差异。结论HPRT基因突变频率分析可作为患癌风险评估的生物学标志。

小鼠胚胎干细胞hprt基因的定位致变

利用DNA的同源重组原理，通过基因打靶技术，在小鼠胚胎干细胞（ES细胞）中将pMCl－neo导入hprt座位，实现了基因组内指定基因的定位致变．通过电穿孔导入质粒pRV4．0线性化DA，分别用G418与6－TG筛选HPRT突变子．经抗性检验及DNA印迹分析，证明得到了一株预期的定位转化细胞，转化效率为1．32×108．载体的非同源序列对定位致变的效率和整合方式没有影响．由于采取了有效的措施，所获HPRT－ES细胞株仍维持了未分化和二倍体状态，保留了胚胎于细胞的特性．

hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估

目的:探讨hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估作用。方法:取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为10～60Gy时的外周静脉血,采用多核细胞法检测hprt基因突变率。结果:在照射累积剂量为30、40和50Gy时,hprt基因突变率在照射后升高,与照射前相比,差别有统计学意义(P<0.05)。当累积剂量达60 Gy时,hprt基因突变率虽然较照射前升高,但差别无统计学意义(P>0.05)。在0～40 Gy,hprt基因突变率基本呈线形上升,且突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系(r=0.900,P<0.05)。回归方程为y=0.459+0.014x。结论:在累积剂量0～40 Gy范围内,hprt基因突变率在放疗后明显升高,呈现良好的剂量-效应关系,可用于评价放疗造成的损伤,是具有应用潜质的生物剂量计。

多核细胞法和Brdurd法检测辐射诱发体细胞HPRT基因突变的比较研究

目的 研究放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变及其剂量 -效应关系 ,比较不同方法对HPRT基因位点突变的检出率。方法 给大鼠尾静脉注射晚期混合裂变产物后不同时间心脏穿刺取血。用多核细胞法和Brdurd法分别检测HPRT基因突变细胞 ,计算突变率 ,拟合出辐射诱发HPRT基因位点突变的剂量 -效应关系函数。结果 用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发HPRT基因位点突变率 (y ,‰ )和剂量 (D ,cSv)相关函数为y =1 14 98+0 1199lnD,r =0 970 6 ;用Brdurd法检测的相关函数为 y =6 5 310× 10 -2 +3 4 5 4 2× 10 -3 D ,r =0 984 6。多核细胞法检测HPRT基因位点突变检出率比Brdurd法高 11～ 17倍之多。结论 体细胞HPRT基因对电离辐射敏感 ,有可能作为辐射生物剂量计。

氯化镉对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响及锌的作用

目的了解氯化镉(CdCl2)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)hprt基因位点突变频率的影响及锌的拮抗作用,探讨镉的遗传毒性机制。方法采用克隆形成法了解CdCl2对V79细胞的慢性毒性作用;在此基础上采用克隆法研究不同浓度CdCl2对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响,并采用生理浓度的氯化锌(ZnCl2)与CdCl2同时作用后,观察锌对于镉致突变效应的影响。同时观察不同浓度CdCl2预先染毒24 h后,对过氧化氢(H2O2)所致hprt基因位点突变效应的影响及锌的拮抗作用。结果克隆形成实验中,CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增高,呈线性关系;CdCl2可以引起V79细胞hprt基因位点突变频率增加,在0.1和8μmol/L染毒浓度处分别有两个峰值。CdCl2与H2O2联合作用表现为协同效应。ZnCl2可以拮抗这种效应。结论在本实验条件下,CdCl2可以导致V79细胞hprt基因位点突变,并可使其他致突变物的致突变性增强,而锌可以拮抗此效应。

放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因突变

[目的 ]研究放射性核素内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞次黄嘌呤乌嘌呤磷酸核糖转移酶 (HPRT)基因位点突变及其剂量 效应关系。并比较多核细胞法和 5 溴脱氧尿嘧啶核苷 ( 5 Brdurd)法测定HPRT基因位点突变的检出率。 [方法 ]用多核细胞法和Brdurd法研究的两批大鼠均分别随机分为 1个对照组和 4个不同剂量组 ,每组 6只。对照组尾静脉注射生理盐水(pH 3 0 ) ,注射容积为 0 5ml/10 0g体重 ,注射后 1d心脏穿刺取血。多核细胞法的不同剂量实验组大鼠尾静脉注射比活度为 3 6 4× 10 5Bq/ml放射性晚期混合裂变产物 ,注射容积同对照组 ,于注射后 1、3、6和 9d心脏穿刺取血。Brdurd法的不同剂量实验组大鼠尾静脉注射比活度为 3 40× 10 5Bq/ml的放射性晚斯混合裂变产物 ,注射容积同前 ,于注射后 1、5、15和 2 0d心脏穿刺取血。每鼠分别取抗凝血 1 5ml于离心管中 ,加入Hank s液 8ml,混匀后 15 0 0r/min离心 10min ,去上清后再重复洗涤一次。将沉积细胞悬浮于生长培养液 (内含 90 %RPMI16 40 ,10 %灭活小牛血清 ,庆大霉素 10 0IU/ml,PHA适量 )中至 1 5ml ,取上述血细胞 0 5ml接种于 4 5ml生长培养液中。每个样本培养 2瓶 ,其中 1瓶加入 6 巯基乌嘌呤 ( 6 TG)。终浓度为 1× 10 -5mol/L。①多核细胞法 :将样本?

氡及其子体诱发大鼠体细胞HPRT基因位点的突变

[目的]用多核细胞法研究氡及其子体诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变情况。[方法]Wistar雄性大鼠24只,采用HD-3型多功能移动式氡室进行动态吸入染毒,按照氡染毒的累计暴露量,分为3个实验组和1个对照组;获取大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞,以多核细胞法检测该两种细胞的HPRT基因突变频率。[结果]大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变频率均随氡累积暴露剂量的增加而相应增加,剂量-效应关系明显,拟合的函数分别为(?)=1.785×10^(-5)D^2+ 1.174×10^(-3)D+1.054和(?)=3.538×10^(-5)D^2+8.338×10^(-4)D+1.032。[结论]氡及其子体能诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变,呈现一定的剂量-效应关系。

克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变探讨

目的 探讨克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变 ,为后续研究打下基础。方法 参照文献提供的克隆法 ,靶细胞为外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞时 ,选取自体或异体的外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞作为滋养细胞 ,比较相应的克隆率。结果 无论靶细胞为外周血淋巴细胞还是脾淋巴细胞 ,自体来源的滋养细胞组的克隆率高于异体来源的滋养细胞组 ,脾淋巴细胞为滋养细胞时克隆率较高。结论 自体来源的滋养细胞优于异体来源的滋养细胞 。

成人外周血淋巴细胞HPRT基因突变率及其影响因素的研究

目的 研究年龄范围在 2 1～ 5 0岁健康成年人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变率及其影响因素。方法 用多核细胞法检测淋巴细胞HPRT基因位点突变率 ,拟合HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数。结果 成年人淋巴细胞HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数为 :y =0 .75 5 5 +0 .0 44 0x ,r =0 .982 9(P <0 .0 5 )。吸烟对健康成人HPRT基因突变率有影响 (P <0 .0 5 ) ,而不同性别间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 成年人HPRT基因位点突变率随年龄增长而增加 ,年递增率为 0 .0 44 0‰ ;吸烟对HPRT基因突变有影响 ,而性别则无影响。

克隆法研究辐射诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因突变

本文目的是用克隆法研究γ射线诱发人外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸抗糖转移酶(HPRT)基因突变的量效关系。从健康成年人外周血分离淋巴细胞 ,每份分成两等份 ,其中一份加滋养细胞 ,另一份不加滋养细胞 ,种于 96孔板 ,进行淋巴细胞的克隆和突变细胞的筛选 ,比较二者结果 ;剂量效应关系实验为取一健康成年男子外周血 2 5mL分成 5等份 ,分别用 0、1、2、4和 6Gy照射 ,分离淋巴细胞 ,种于 96孔板 ,不加滋养细胞条件下观察淋巴细胞的克隆效率和HPRT基因突变频率的变化。结果表明加滋养细胞组的克隆效率高于不加滋养细胞组 (p <0 0 1 ) ,但二者HPRT基因突变频率无差别 (p >0 0 5 )。在一定剂量范围内 ,人外周血淋巴细胞克隆效率与照射剂量呈负相关 。

醋酸铅体外诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变的研究

目的 了解醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响 ,以探讨铅的致突变性。方法 采用多核细胞法体外研究醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响及突变频率。结果 0 2 5mmol/L醋酸铅即可诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变 ,且突变频率随着染毒浓度的增加而升高 ,突变频率Y (1 0 -3 )与醋酸铅浓度C (mmol/L)之间存在一定的剂量 -效应关系 ,直线方程分别为 :Y =1 0 5 6 6 +0 1 6 6 1C (r=0 95 82 )和Y =1 0 76 2 +0 1 987C (r =0 94 34)。结论 在一定条件下 ,醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点及突变频率有影响 。

晚期混合裂变产物内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变率与剂量率关系的研究

运用多核细胞法及胞质分裂阻断微核（CBMN）法对5组Wistar雄性大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变频率及微核进行检测。实验组注射不同放射性比活度的晚期混合裂变产物，在达到累积剂量近似相等（约4.66cSv）时心脏穿刺取血。结果显示，在总累积剂量近似相等条件下，HPRT位点突变频率、微核细胞率、微核率均随剂量率的增加而增加，4个剂量率点间的HPRT位点突变频率、微核细胞率和微核率总体上均有显著差异（P＜0．01）。HPRT基因位点突变频率、微校率与剂量率之间的关系可分别用函数Y=a＋blnX表示。HPRT位点突变频率与微核率间存在线性相关。

hprt基因突变分析方法及其在辐射生物学中的应用

hprt基因(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因)由于其本身所具有的独特生物学特性,逐渐成为基因突变机制和修复机制理想的研究靶点,hprt基因突变分析法也逐渐成为很有价值并被广泛应用的生物剂量计。系统地综述了hprt基因的生物学特性、突变的检测方法学及其在辐射事故分析、放射治疗和宇航事业研究中的应用和进展。