p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值研究

目的:探讨p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值。方法:选择2021年4月至2023年2月我院收治的605例高危型HPV阳性患者为研究对象,所有患者入院后均进行阴道镜检查与病理活检,取患者细胞学样本分别进行p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测。比较两种方法单独检查与联合检测对宫颈病变阳性检出率的差异;比较三种检查方法对宫颈病变诊断效能的差异。结果:联合检测检出CIN1~3阳性率均高于p16/Ki-67双标记、HPVE6/E7mRNA检测(P<0.05);三种检测方式的浸润癌阳性检出率比较无明显差异(P>0.05)。Kappa检验分析结果显示,p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查结果与病理诊断结果具有较好的一致性(Kappa值=0.719,P<0.05);联合检测结果与病理诊断结果具有高度的一致性(Kappa值=0.894,P<0.05)。联合检测对宫颈病变的诊断灵敏度、特异性与准确率高于p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查(P<0.05)。结论:p16Ki-67双染与HPVE6/E7mRNA联合检测可准确检出宫颈病变程度,对宫颈病变疾病类型的鉴别可提供充足可靠的数据支持,联合检查的诊断效能较好,对患者后续相关治疗开展有积极指导意义。

下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

人乳头瘤病毒16型E7基因靶向调控cGAS-STING信号通路抑制宫颈癌细胞免疫功能的研究

目的:探讨HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路对宫颈癌细胞免疫功能的影响。方法:体外构建HPV16 E7过表达和干扰质粒,转染至SiHa细胞,qPCR检测HPV16 E7 mRNA表达水平,流式细胞术检测CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。在此基础上分别转染cGAS-siRNA和STING-siRNA至SiHa细胞,CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。qPCR和Western blot分别检测cGAS、STING、IFN-Ⅰ、HPV16 E7的mRNA及蛋白表达。流式细胞术检测细胞CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。结果:STING-siRNA+HPV16 E7过表达组CD95和MICA/B水平降低(P<0.05),CD73、CD39、CTLA-4和CD25水平升高(P<0.05)。cGAS、STING和IFN-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05)。STINGsiRNA+HPV16 E7干扰组结果与之相反。结论:HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路进而抑制宫颈癌细胞免疫功能。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗的构建及免疫效果评估

目的构建和评价HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗诱导的特异性CTL细胞应答及其对肿瘤生长的干预作用,从而揭示其作为候选HPV治疗性疫苗的潜能。方法首先通过IEDB网站中的MHC I Processing Predictions和MHC I Binding Predictions方法,分别预测人类HLA-A^(*)02:01、HLA-A^(*)11:01、HLA-A^(*)24:02和C57BL/6小鼠H-2b的限制性CTL表位,然后根据评分以及ELISPOT实验筛选出二者共同呈递的CTL表位,并将其构建成多表位DNA疫苗(pVAX1-10P)。从预防性和治疗性二个方面研究pVAX1-10P对小鼠移植TC-1异位癌的免疫干预作用,流式细胞术检测特异性CTL应答。结果获得10条可被人与鼠MHC分子共呈递的CTL表位,ELISPOT结果表明这10条CTL表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答;由此构建的多表位DNA疫苗pVAX1-10P无论在预防性实验还是治疗性实验中,均能诱导特异性的细胞免疫并抑制肿瘤的生长。结论构建的HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗pVAX1-10P能够诱导特异性CTL应答,显著抑制肿瘤生长,有望作为候选HPV治疗性DNA疫苗。

TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变诊断价值的meta分析

目的系统评价液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值。方法计算机检索CNKI、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library、Embase、Science数据库中关于TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测诊断子宫颈癌前早期病变的相关文献,检索时限均为建库至2023年1月。由2位评价员按纳入标准和排除标准各自筛选文献、提取资料和评价质量后,应用RevMan 5.3、Stata 15.0、Meta-Disc 1.4统计软件分析TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值,计算诊断敏感性的Spearman相关系数验证阈值效应,进行异质性检验;计算合并敏感性、特异性、阳性似然比和阴性似然比、诊断比值比、SROC曲线下面积。结果共纳入15篇文献,合计6620例患者。Meta分析显示,合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比均不存在明显异质性(I^(2)=31.6%、14.2%、10.9%、16.7%、17.2%,P=0.1162、0.2947、0.3311、0.2663、0.2610),采用固定效应模型进行统计分析,其结果分别为0.95(95%CI:0.94~0.96)、0.87(95%CI:0.86~0.88)、6.86(95%CI:6.26~7.51)、0.06(95%CI:0.05~0.07)、113.23(95%CI:86.44~148.31)。SROC曲线下面积为0.9414。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对诊断子宫颈癌前早期病变有重要价值。

核转录因子κB家族蛋白及HPV E6/E7 mRNA与早期宫颈癌复发的关系

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)家族蛋白表达及人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA水平与早期宫颈癌复发的关系。方法 收集2017年1月至2020年12月在开滦总医院妇产科接受宫颈癌根治术的163例早期宫颈癌患者的临床资料,设为宫颈癌组;另收集医院同期收治的101例非宫颈癌患者的临床资料,设为非宫颈癌组,根据病理结果分为3个亚组:对照组(子宫肌瘤患者,n=31)、低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)组(n=26)、高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)组(n=44)。比较宫颈癌组与非宫颈癌组及非宫颈癌3个亚组间宫颈组织中c-Rel、p65、p50核表达及HPV E6/E7 mRNA表达情况,分析c-Rel、p65、p50核表达及HPV E6/E7 mRNA在不同临床病理特征宫颈癌患者中的差异性表达,采用Kaplan-Meier法分析c-Rel、p65、p50及HPV E6/E7 mRNA表达与宫颈癌术后无复发生存的关系,Cox法分析宫颈癌术后复发的影响因素。结果 宫颈癌组c-Rel、p65、p50及HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于对照组(P<0.05),HSIL组c-Rel、p50及HPV E6/E7 mRNA阳性率均高于对照组(P<0.05),LSIL组HPV E6/E7 mRNA阳性率高于对照组(P<0.05)。c-Rel表达与脉管浸润程度有关,p65表达与FIGO分期、宫旁浸润及淋巴结转移有关,p50表达与间质浸润有关,HPV E6/E7mRNA表达与肿瘤直径、宫旁浸润及间质浸润有关(P<0.05)。随访36(12~75)个月期间,163例宫颈癌患者复发率为19.63%(32/163),Kaplan-Meier结果显示,c-Rel、p50阳性患者与阴性患者的无复发生存率差异无统计学意义(LogRankχ^(2)=0.820、3.181,P=0.367、0.075),p65、HPV E6/E7 mRNA阴性患者无复发生存率分别优于阳性患者(LogRankχ^(2)=10.597、4.474,P=0.001、0.034)。多因素Cox回归分析显示,FIGO分期IIa期、淋巴结转移、p65阳性、HPV E6/E7 mRNA阳性可增加宫颈癌术后复发风险(HR=1.617、1.506、3.180、1.460,P<0.05)。结论 转录因子NF-κB家族核表达、HPV E6/E7 mRNA表达在宫颈病变进展过程中存在差异,其表达水平与早期宫颈癌多种病理特征有关,且p65、HPV E6/E7 mRNA可影响宫颈癌术后复发,可作为评估早期宫颈癌术后复发的可靠参考指标。

p16/Ki-67双染联合HPV E6/E7 mRNA检测筛查宫颈病变的Meta分析

目的:评价p16/Ki-67双染联合HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变中的筛查价值。方法:检索CNKI、万方、PubMed数据库,收集自建库至2022年5月发表的有关p16/Ki-67双染和HPV E6/E7 mRNA联合检测进行宫颈病变筛查的文献。根据纳入和排除标准进行文献筛选,应用Stata12.0进行诊断性试验的Meta分析。结果:共纳入文献7篇,p16/Ki-67双染与HPV E6/E7 mRNA联合检测在诊断宫颈病变的合并灵敏度为0.964(95%CI 0.923~0.984),合并特异度为0.825(95%CI 0.788~0.858),合并的诊断比值比为127.623(95%CI 62.062~262.444)。联合检测的灵敏度优于单项检测,诊断比值比高于HPVE6/E7 mRNA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在宫颈病变的诊断中,p16/Ki-67双染与HPV E6/E7 mRNA联合检测相对于单项检测灵敏度高,诊断比值比较好,特异度相当,具有较好的诊断价值,可以应用在宫颈病变筛查中。

TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值

目的:探讨液基薄层细胞学检查(TCT)联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值。方法:选择在郑州大学第一附属医院病理科行细胞学筛查并在1个月内行宫颈组织病理学检查的女性患者624例,年龄18~81岁,均进行了TCT、p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测。对比病理学结果,评价各项检测方法单独或联合的诊断价值。结果:病理组织学结果显示624例患者中阴性(慢性炎症)183例,阳性441例(低级别鳞状上皮内病变176例、高级别鳞状上皮内病变227例、鳞状细胞癌38例);TCT阳性376例,阴性248例;p16/Ki-67双染阳性317例,阴性307例;HPV E6/E7 mRNA阳性360例,阴性264例;TCT+p16/Ki-67双染阳性425例,阴性199例;TCT+HPV E6/E7 mRNA阳性434例,阴性190例;3项联合阳性367例,阴性257例。以病理组织学结果为金标准,TCT+p16/Ki-67、TCT+HPV E6/E7 mRNA和3项联合诊断宫颈鳞状上皮内病变的敏感度分别为87.30%、89.11%、77.32%,特异度分别为78.14%、77.60%、86.34%。结论:TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测可提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能。

Reid阴道镜评分、HPV E6/E7 mRNA表达量在宫颈癌中的临床应用价值研究

目的研究Reid阴道镜评分(以下简称Reid评分)、高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)mRNA表达量与宫颈癌国际妇产科联盟(FIGO)分期、血清常规肿瘤标志物水平的相关性及对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。方法选取2021年3月至2022年5月在菏泽市立医院就诊的100例宫颈癌患者作为宫颈癌组,另选同期诊治的50例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者作为LSIL组,50例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者作为HSIL组。比较3组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清常规肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]水平;分析宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清常规肿瘤标志物水平及宫颈癌FIGO分期的相关性;根据宫颈癌组患者术后随访结果分为术后有淋巴结转移和无淋巴结转移,比较有无淋巴结转移患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平,分析Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。结果宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于HSIL组、LSIL组(P<0.05);HSIL组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于LSIL组(P<0.05)。宫颈癌患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清CA125、CEA水平均呈正相关(r=0.405~0.705,P<0.05)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期呈正相关(r=0.415、0.501,P<0.05)。宫颈癌组术后淋巴结转移患者的Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于无淋巴结转移的患者(P<0.001)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.756(95%CI:0.657~0.838)、0.760(95%CI:0.662~0.841)、0.803(95%CI:0.710~0.877)、0.768(95%CI:0.670~0.848)。将CA125、CEA联合检测作为常规预测方案,Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA联合检测作为新预测方案,常规预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI:0.724~0.889),新预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的AUC为0.955(95%CI:0.892~0.987),新预测方案预测的AUC明显大于常规预测方案(Z=1.981,P=0.045)。与常规预测方案比较,新预测方案的净重新分类指数为0.021(95%CI:0.015~0.039)、综合判别改善指数为0.046(95%CI:0.033~0.069),均P<0.05。结论Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期及血清CEA、CA125水平相关,且在预测宫颈癌术后淋巴结转移方面具有一定价值。

PRDX2调控HPV16 E6对宫颈癌Siha细胞活性的影响

目的探究PRDX2在宫颈癌组织中的表达以及对宫颈癌Siha细胞的恶性生物学行为的影响。方法免疫组化方法检测宫颈癌组织以及癌旁组织中PRDX2的表达;将宫颈癌Siha细胞设置为4个组:Siha组、siRNA NC组、siRNA PRDX2组与siRNA HPV16 E6组。EDU染色法检测Siha细胞的生长活性;Transwell实验方法分析Siha细胞的侵袭数量;流式细胞术检测Siha细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹方法分析Siha细胞中PRDX2/HPV16 E6蛋白的表达水平。结果与宫颈癌旁组织比较,宫颈癌组织PRDX2的表达上调。与Siha组和siRNA NC组比较,siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞增殖能力下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞侵袭数量下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞凋亡率增加(P<0.05);siRNA PRDX2组的Siha细胞的HPV16 E6蛋白表达下调(P<0.05)。结论PRDX2在宫颈癌组织中表达增加,抑制PRDX2表达后,Siha细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与PRDX2调节HPV16 E6蛋白的表达相关。

p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变检出效能的比较

目的比较p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变的检出效能。方法收集2021—2022年接受宫颈癌前病变筛查的患者112例,液基薄层细胞检测(TCT)宫颈细胞的病变情况,并经病理学检查确诊。根据宫颈HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒检测宫颈脱落细胞的HPV E6/E7 mRNA水平,利用CINtec PLUS细胞学试剂盒检测宫颈细胞p16/Ki-67双染情况。分析p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA单独或联合检测对宫颈癌前病变检出效能的影响。结果112例宫颈癌前病变筛查患者的病理学结果显示,低度鳞状上皮内病变(LSIL)33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)79例。HPV E6/E7 mRNA阳性72例(64.3%),阴性40例(35.7%);p16/Ki-67双染阳性83例(74.1%),阴性29例(25.9%)。不同癌前病变组间HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段癌前病变组间差别有统计学意义(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA联合p16/Ki-67双染检测宫颈癌前病变的敏感度和准确性均高于两者单独检测,阴性预测值高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。两者联合检测HSIL的敏感度、特异度和阳性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测,准确性和阴性预测值均高于两者单独检测。另外,p16/Ki-67双染检测HSIL的敏感度、准确性和阴性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA和p16/Ki-67双染联合检测在宫颈癌前病变检出中具有临床价值。

HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌筛查中的价值

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA、HPV E6/E7蛋白和液基薄层细胞学检查(thin-prep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌筛查中的价值。方法 选取2021年7月至2022年6月于诸暨市人民医院妇科接受早期宫颈癌筛查的成年女性190例为研究对象,分别进行HPV DNA、HPVE6/E7蛋白及TCT检测,并进一步行阴道镜活检检查。比较不同病变患者的HPVDNA、HPVE6/E7蛋白和TCT对高级别病变的诊断效能。结果 CIN3及宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于宫颈炎患者(P<0.05),宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于CIN1患者(P<0.05)。CIN2+患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT及三者联合检测的阳性率显著高于CIN1-患者。HPVDNA、HPVE6/E7蛋白、TCT三者联合诊断高级别病变的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。结论 HPV DNA、HPV E6/E7蛋白及TCT可作为筛查宫颈癌和癌前病变的手段,且三者联合检测的敏感度最高。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

RNAscope技术对子宫颈鳞状上皮内病变HPV E6/E7 mRNA检测的应用价值

目的探讨RNAscope技术检测HPV E6/E7 mRNA的表达对子宫颈鳞状上皮内病变分级诊断的影响。方法收集子宫颈活检组织80例,其中高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)34例和低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)32例,子宫颈炎症标本14例。所有病例均进行RNAscope原位杂交检测并统计分析。结果子宫颈鳞状上皮内病变中,HPV E6/E7 mRNA在炎症组、LSIL组和HSIL组间的表达差异有统计学意义(χ^(2)=45.037,P<0.001)。统计分析显示,LSIL组中B型表达模式高于HSIL组、D型表达模式低于HSIL组(P<0.05),两组A型、C型和E型表达模式差异无统计学意义(P>0.05)。HSIL组中4种着色模式的阳性率均高于LSIL组,两组的模式③、④阳性率差异有统计学意义(P<0.05),模式①、②阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA在HSIL中高表达,且其表达可能反映HPV感染的分期,其分层表达和着色模式为子宫颈病变分级诊断提供指导意义。

宫颈脱落细胞HPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用

目的研究宫颈脱落细胞E6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用价值。方法选取2018年3月至2020年3月安康市妇幼保健院收治的268例宫颈癌疑似病变患者作为研究对象,取宫颈脱落细胞作为实验标本,检测E6/E7mRNA阳性率及拷贝数,并行HPV分型检查。以病理诊断为金标准,其中140例纳入宫颈癌组,128例为非宫颈癌组。并对268例患者进行HPV分型,高危型HPV组212例,低危型HPV组15例,低危混合型HPV组41例,记录宫颈癌发生率。采用多因素回归分析宫颈癌与高危型HPV的影响因素,利用受试者工作曲线(ROC)分析各影响因素单项和联合对检测宫颈癌与HPV分型的准确性。结果宫颈癌组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于非宫颈癌组,高危型HPV组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于低危型及低危混合型HPV组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示受教育程度初中及以下(95%CI:0.187~0.836)、孕次≥3次(95%CI:1.079~1.625)、初次性生活时间<18岁(95%CI:1.075~1.611)、鳞状细胞癌抗原(SCC)(95%CI:1.058~1.782)及HPVE6/E7mRNA阳性(95%CI:1.251~2.049)是宫颈癌的高危因素(P<0.05)。年龄(35~65岁)(95%CI:1.134~1.436)、孕次≥3次(95%CI:1.346~2.472)、性伴侣≥3个(95%CI:1.526~2.386)、阴道分泌物异常(95%CI:1.021~1.778)及HPVE6/E7 mRNA阳性(95%CI:1.216~1.920)是高危型HPV的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示孕次、初次性生活时间、SCC及HPVE6/E7 mRNA多项联合检测宫颈癌的AUC为0.826,高于单项检测(P<0.05)。年龄、孕次、性伴侣、阴道分泌物及HPVE6/E7 mRNA联合检测高危型HPV的AUC为0.880,高于单项检测(P<0.05)。结论HPVE6/E7 mRNA阳性是宫颈癌和高危型HPV共同的独立影响因素,基于HPVE6/E7 mRNA的多项联合检测较单项检测能显著提高检测宫颈癌与HPV分型的准确性。

DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测及HPV筛查在宫颈病变诊断中的价值

目的比较分析宫颈病变筛查中人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA基因分型检测、DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测的价值。方法选取宫颈病变筛查者258例作为研究对象,均接受HPV DNA基因分型检测、HPV E6/E7 mRNA、DNA倍体定量分析及宫颈组织病理检查,对比DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测与宫颈组织病理检查结果,统计分析DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测的价值。以宫颈组织病理检查为金标准。结果DNA倍体定量分析的灵敏性为70.00%(42/60),特异性为77.27%(153/198),准确性为75.58%(195/258),阳性预测值为48.28%(42/87),阴性预测值为89.47%(153/171)。HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性为86.67%(52/60),特异性为59.60%(118/198),准确性为65.89%(170/258),阳性预测值为39.39%(52/132),阴性预测值为93.65%(118/126)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性为95.00%(57/60),特异性为39.39%(78/198),准确性为52.33%(135/258),阳性预测值为32.20%(57/177),阴性预测值为96.30%(78/81)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析(P<0.05)。结论宫颈病变筛查中HPV DNA基因分型检测的价值高于DNA倍体定量分析及HPV E6/E7 mRNA检测,值得应用。

探讨HPV E6/E7mRNA检测联合光动力治疗对宫颈低级别鳞状上皮内病变患者分流诊治的价值

目的了解HPV E6/E7mRNA检测联合光动力治疗对低级别鳞状上皮内病变(LSIL)的分流诊治价值。方法选取100例LSIL女性患者,均进行HPV分型检测及E6/E7mRNA检测,然后采用光动力治疗。比较治疗后不同时间临床疗效及HPV转阴情况。结果与组织学检测结果比较,HPV分型检测结果的诊断准确率为90.0%,E6/E7mRNA检测结果的诊断准确率为88.0%。治疗6个月后,患者总有效率和HPV转阴率为91.0%、62.0%,均分别高于治疗3个月时的71.0%、42.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV E6/E7mRNA检测方法的联合应用,对判断LSIL具有较高的准确性;而对患者提供光动力治疗,疗效显著,可以显著改善症状,促进病情快速恢复。

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响,伤口愈合试验检测细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平,Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象,在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤,验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同,对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用,对HeLa细胞增殖无显著影响,对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组CaSki和HeLa细胞中HPV16 E6 mRNA表达水平降低,p53和p21 mRNA表达水平在3种细胞中均升高(P<0.05)。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组3种细胞波形蛋白表达量降低,E-钙黏蛋白、p53和p21表达量增加(P<0.05)。结论:β-D-葡聚糖抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6表达并上调p53和p21表达,抑制HPV16阳性宫颈癌细胞的增殖、迁移,调节细胞周期,促进细胞凋亡,并在体内发挥抗肿瘤作用。