真空负压免疫组化法检测尖锐湿疣和假性湿疣HPV抗原

应用真空负压免疫组化法检测 50例尖锐湿疣和 2 8例假性湿疣HPV抗原。结果显示尖锐湿疣组中阳性率为 72 %(3 6/50 ) ,假性湿疣组中未见有阳性。阳性反应物颜色呈均匀淡黄色或棕黄色 ,分布在凹空细胞和角化不全细胞核内。

LSAB和ABC法显示尖锐湿疣HPV抗原形态定量及敏感性探讨

LSAB法是链霉卵白素——生物素染色技术,ABC是亲和素——生物素复合物技术,这两种染色技术是病理诊断中最常用的免疫组织化学方法。LSAB技术是从链霉菌中提取出Streptavidin代替卵清来源的Avidin,由于它不含糖基,中性不存在Avidin的弊端并且大大地提高了实验的敏感性,近年来被很多人的采用。本文比较了LSAB和ABC两种方法显示常规石蜡切片尖锐湿疣HPV抗原的敏感性及第一抗体的稀释度与染色时间的关系。

HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成

目的 预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位 ,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽。方法 采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法 ,对靶抗原HPV16E7的HLA A2限制性细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyte ,CTL)表位进行预测 ,并运用固相合成法合成多肽 ,经RP HPLC纯化及纯度分析 ,用质谱进行定性鉴定。结果 分别预测出了 16个、10个和 3个九肽表位 ,确定其中 5个九肽为候选合成表位 ,各合成肽的纯度都在 95 %以上。经质谱分析 ,各肽的分子量测定值与理论值相符。结论 超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率 ,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽 ;所合成的多肽为高纯度靶肽 。

利用重组HPV16L1抗原检测宫颈癌抗L1或VLP抗体的对比

为了评价重组大肠杆菌表达的HPV16L1蛋白和重组腺病毒表达的HPV16L1 VLP两种抗原在检测宫颈癌抗 16L1或VLP抗体及在宫颈癌血清学诊断意义上的差别 ,应用PCR技术从宫颈癌组织的DNA中扩增出全长15 35bp的HPV16L1基因片段 ,克隆至 pUC18 T载体中 ,进行DNA测序鉴定。然后 ,将HPV16L1基因克隆至pGEX 2T表达载体中 ,并诱导表达HPV16L1融合蛋白 ,分子量为 83kD ,能被HPV16L1单克隆抗体所识别。经GST柱层析法纯化后 ,与重组腺病毒表达的HPV16L1 VLP分别经酶联免疫吸附 (ELISA)法检测 12份宫颈癌患者和 35份献血员血清。 12例宫颈癌血清标本中 ,抗HPV16L1蛋白的抗体阳性率为 7例 (占 5 8.3% ) ;抗HPV16L1 VLP的抗体阳性率为 8例 (占 6 6 .7% )。经大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1检测为HPV16抗体IgG(+)的 7份患者血清 ,利用HPV16L1 VLP试剂盒检测均阳性 ;经大肠杆菌表达的重组抗原检测为HPV16抗体IgG( )的 5份患者血清 ,利用HPV16L1 VLP试剂盒检测有 1份阳性。两者对HPV16抗体的阳性检出率并无显著差异 (P >0 .0 5 )。本实验结果说明HPV16与宫颈癌高度相关 ,利用大肠杆菌表达的重组抗原HPV16L1和HPV16L1 VLP重组抗原检测抗体的敏感性并不受影响。利用重组抗原HPV16L1对宫颈癌的抗体进行定性。

ELISPOT与Cultured ELISPOT检测宫颈癌HPV16抗原多肽特异性CTL反应分析

目的比较酶联免疫斑点法(ELISPOT)和Cultured ELISPOT检测宫颈癌HPV16全基因组抗原多肽特异性CTL反应水平差异。方法选择2015年9月-2017年3月新疆医科大学附属肿瘤医院病理明确诊断宫颈鳞状细胞癌32例患者,采用ELISPOT试验(19例,ELISPOT组)和Cultured ELISPOT试验(13例,Cultured ELISPOT组),比较2组HPV16抗原多肽特异性CTL反应频率及强度差异。观察HPV16全基因组抗原多肽E1-1、E1-2、E2、E4、E5、E6、E7、L1及L2刺激后的免疫反应。结果 Cultured ELISPOT组各孔HPV16抗原多肽E1-1、E1-2、E2、E4、E5、E6、E7、L1及L2斑点数高于ELISPOT组。ELISPOT组与Cultured ELISPOT组各肽段间特异性CTL反应频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Cultured ELISPOT组特异性CTL细胞数显著高于ELISPOT组,2组E1-1、E1-2、E2、E4、E6、E7、L1及L2肽段特异性CTL反应强度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。从反应频率及强度观察,L1肽段略高于其他肽段。结论 Cultured ELISPOT检测法与ELISPOT相比有较高的灵敏性,该方法可用于特异性优势肽段筛选。