基于LncRNA SENCR/MDK轴探究HPV E6宫颈癌发生发展的机制

目的 探究HPV E6通过LncRNA SENCR/MDK轴促进宫颈癌发生发展的分子机制。方法 选取宫颈癌Hela细胞,原代培养,P3代单层细胞为研究对象;Hela细胞内转染LncRNA SENCR、MDK、E6过表达质粒,构建Control组(细胞不做处理),pcDNA-SENCR组(细胞内转染SENCR过表达质粒),pcDNA-MDK组(细胞内转染MDK过表达质粒),pcDNA-SENCR+MDK组(细胞内转染SENCR、MDK过表达质粒),pcDNA-E6组(细胞内转染E6过表达质粒)。双荧光素基因检测系统确定LncRNA SENCR、MDK、E6之间靶向关系;比较各组细胞增殖、凋亡、迁移及血管生成的能力。结果 LncRNA SENCR、MDK在Hela细胞内成功过表达,二者存在靶向关系,差异有统计学意义(P<0.05);与Control组相比,SENCR过表达可以抑制Hela细胞的增殖活性、克隆及迁移能力,促进细胞凋亡性,上调Cleaved-caspase-3表达,下调Cyclin D1、VEGF、ephrin B2表达;MDK过表达可以促进Hela细胞的增殖活性、克隆及迁移能力,抑制细胞凋亡性,下调Cleaved-caspase-3表达,上调Cyclin D1、VEGF、ephrin B2表达,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SENCR的mRNA 3’非编码区预测E6结合位点,二者之间存在靶向关系(P<0.05);与Control组相比,E6过表达可以抑制LncRNA SENCR的表达,E6沉默后,LncRNA SENCR表达上调,LncRNA SENCR过表达可以下调E6表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPVE6/LncRNA SENCR/MDK轴在宫颈癌发生发展中扮演了重要作用,HPV E6通过靶向抑制LncRNA SENCR活性来促进MDK表达,提高宫颈癌细胞的增殖、克隆、迁移及血管生成能力,促进宫颈癌的发展。

68例HPV相关口咽鳞癌患者生存分析

目的:探讨口咽癌HPV适用检测方法并比较HPV阳性患者新、旧版肿瘤TNM分期降级后的预后差异,为指导HPV相关口咽癌的精准诊疗提供临床依据。方法:对171例口咽鳞状细胞癌(简称鳞癌)患者,分别行脱落细胞学、P16免疫组织化学及HPV-RNA PCR检测HPV,比较3种检测方法的结果。分析68例HPV相关口咽鳞癌患者的临床及病理资料,根据新、旧版TNM分期标准对其重新分期,了解降级情况,统计各期患者生存率,比较新、旧2版分期患者的预后,应用Kaplan-Meier方法建模,采用SPSS 22.0软件包进行统计学分析。结果:免疫组织化学P16检测、口咽脱落细胞检测和PCR检测的口咽癌HPV阳性检出率分别为25.7%、14.6%和24.0%,脱落细胞检测与其他2种检测均有统计学差异(P=0.000),免疫组织化学和PCR检测无统计学差异(P=0.205)。68例HPV阳性口咽鳞癌患者按照第7版与第8版TNM标准分期,分别为Ⅰ期3和42例,Ⅱ期7和14例,Ⅲ期17和9例,Ⅳ期41和3例。第7版与8版分期患者3年生存率比较,Ⅰ期100.0%和89.7%(P=0.672),Ⅱ期68.6%和61.9%(P=0.961),Ⅲ期66.8%和37.0%(P=0.043),Ⅳ期74.8%和0.00%(P=0.000)。第7与8版分期的早期患者(Ⅰ、Ⅱ期)生存率比较,78.8%和82.7%(P=0.585),晚期患者(Ⅲ、Ⅳ期)生存率比较,71.2%和27.8%(P=0.000)。HPV阳性患者按照第7版分期,早期与晚期患者生存率为78.8%和71.2%(P=0.982);按照8版分期,早期与晚期患者生存率为82.7%和27.8%(P=0.000)。结论:脱落细胞检查不宜作为诊断HPV阳性口咽鳞癌的单一标准,P16免疫组织化学检测和PCR基因检测各有优缺点,应根据实际情况选择。对于HPV阳性口咽鳞癌患者,新版分期更符合临床实际情况,预后分层更加清晰,能更好指导临床决策,值得临床推广应用。

HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的临床价值

目的分析不同病变程度的宫颈病变患者高危型人乳头瘤病毒(HPV)DNA和高危型HPV E6/E7 m RNA表达阳性率及拷贝数的差异,评估两者对宫颈癌早期筛查的临床价值。方法收集天津市中心妇产科医院2014年因宫颈疾患行阴道镜下宫颈活检的154例患者资料和因其他良性妇科疾患行全子宫切除术的32例患者资料(对照组),154例根据宫颈活检病理结果分为宫颈上皮内瘤变低级别组(51例)、高级别组(71例)及宫颈浸润癌组(32例)。应用杂交捕获技术(HC2)HPV DNA检测和荧光定量杂交捕获技术HPV E6/E7 m RNA检测进行定量测定,并对全部患者的术后或宫颈活检石蜡标本进行E6/E7蛋白免疫组化检测。结果 HC2 HPV DNA检测和HPV E6/E7m RNA检测显示对照组阳性率低于各级别病变组(P<0.05),高危型HPV E6/E7 m RNA检测的拷贝数随着病变级别的加重而明显增高,而HC2 HPV DNA检测的拷贝数不随病变级别的加重而改变。高级别组及宫颈浸润癌组患者中,高危型HPV E6/E7 m RNA检测拷贝数>10 000的患者比例明显增多。免疫组化结果显示对照组E6/E7阳性率低于各级别病变组,高级别组、宫颈浸润癌组的E6/E7阳性率高于低级别组(均P<0.05)。结论 HPV E6/E7 m RNA的表达及拷贝数的测定与宫颈病变程度密切相关,是宫颈癌早期筛查的有效措施之一,HPV DNA检测结果为阴性时,其排除疾病意义更高,而m RNA检测结果为阳性时,其预测疾病发生及进展的价值更好,两者结合使用有利于综合评价发生宫颈病变的风险。

表达HPV-16 E6基因siRNA真核载体的构建及体外转染效率鉴定

目的:采用RNA干扰技术选择性的沉默宫颈癌Ca Ski细胞株中HPV-16 E6基因的表达。为观察HPV-16 E6基因的小干扰片段能否在Ca Ski细胞特异性的抑制E6基因的表达,构建能在哺乳动物细胞中表达E6小干扰RNA的真核表达质粒,并观察其转染效率。方法:根据HPV-16 E6基因序列,设计特异性的小干扰片段,并将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至Ca Ski细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功的构建二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功的转染到Ca Ski细胞株中,转染效率达到50%以上。结论:siRNA真核表达载体的构建及体外转染的成功为下一步研究奠定了良好的基础。

微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后价值研究

目的研究微小RNA在宫颈癌的早期筛查中的应用及预后价值。方法采用实时定量PCR(定量PCR)测定宫颈癌肿瘤组织中miRNA的表达水平(miR-21,miR-27a,miR-34a,miR-155,miR-196a,miR-203)。结果 miR-27a在宫颈上皮内瘤变(CIN2-3)中的表达水平显著高于CIN1(P=0.023),而在鳞状细胞癌(SCC)中的表达水平高于CIN2-3(P=0.033)。此外,miR-34a在CIN2-3中的表达水平显著低于CIN1(P=0.041),在SCC中的表达水平低于CIN2-3(P=0.021)。与CIN1比较,CIN2-3的miR-27a表达水平上调(P=0.028)而miR-34a表达水平下调,HPV16阳性与宫颈癌显著相关(CIN2-3/CIN1:P=0.027;SCC/CIN2-3:P=0.036)。miR-34a的表达水平与吸烟状况和HPV16相关。结论检测miRNA表达水平有助于评估不同宫颈癌变和预测HPV感染结果。

慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用

目的研究慢病毒携带的短发夹状干扰RNA(short hairp in RNA,shRNA)对宫颈癌Cask i细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap illom a virus,HPV)16型E6表达的抑制作用。方法将靶向HPV16型E6的shRNA表达序列克隆到改建的慢病毒表达载体PLL3.7中,经限制性酶切鉴定和测序后,与3种包装质粒混合,以L ipofectam ine 2000包裹后转染293FT细胞,72 h后收取含病毒的上清液并感染宫颈癌Cask i细胞,感染48 h后加入G418筛选阳性克隆。每天对阳性细胞克隆进行细胞计数;提取细胞总mRNA,进行RT-PCR反应。结果与对照组相比HPV16型E6的表达降低70%,宫颈癌Cask i细胞生长速度减慢50%。结论慢病毒携带的短发夹状干扰RNA能干扰宫颈癌细胞中HPV16型E6的表达并有抑制癌细胞生长的作用。

HPV-siRNA对Hela细胞生长抑制作用的实验研究

以HPV18 E6基因为靶位,研究siRNA对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用。设计并合成siRNA,脂质体siNEO FX转染Hela细胞,分别用MTT法,双层软琼脂克隆形成试验和流式细胞术分析了siRNA对Hela细胞体外生长增殖活力、细胞周期分布的作用。siRNA作用后的Hela细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,G0/G1期细胞比率增加。HPV18 E6 siRNA能抑制Hela细胞体外生长增殖能力并诱导细胞周期重新分布。

HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染人宫颈癌Ca Ski细胞,随后利用RT-PCR技术检测细胞中HPV-16 E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPV E6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P<0.05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P<0.05)。结论:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌Ca Ski细胞后,均能抑制Ca Ski细胞中HPV-16 E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡;两者联合则具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。

稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆的建立

目的构建针对HPV16 E6基因的逆转录病毒载体,感染HPV16阳性宫颈癌细胞,筛选稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆。方法采用DNA重组技术构建表达靶向HPV16 E6基因的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,脂质体法将逆转录病毒载体转染入包装细胞PA317,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,收集病毒上清,感染靶细胞SiHa,G418筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,RT-PCR检测细胞中E6 mRNA表达,细胞增殖实验检测细胞增殖力。结果获及稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,病毒感染靶细胞SiHa后,筛选出稳定表达HPV16 E6 siRNA的细胞克隆,RT-PCR示HPV16 E6 mRNA表达受到抑制。细胞增殖实验示克隆细胞增殖率明显下降。结论成功建立稳定表达HPV16 E6 siRNA细胞克隆,特异性的siRNA能抑制细胞生长、HPV16 E6 mRNA表达,HPV16 E6 siRNA可能成为治疗宫颈癌的一种新方法。

hTERC基因检测对筛查高危子宫颈病变预防宫颈癌的临床意义

目的探讨应用荧光原位杂交(FISH)技术检测人染色体端粒酶RNA组分(hTERC基因)异常扩增在子宫颈病变中的临床意义。方法收集经组织病理学确诊的子宫颈病变组织245例,包括单纯性子宫颈炎75例、CINⅠ64例、CINⅡ63例和CINⅢ43例,另取20例健康宫颈组织作对照。用FISH方法检测265例宫颈活检组织的hTERC基因表达,用表面等离子体谐振核酸检测法对其中196例进行HPV-DNA检测。结果正常宫颈组织hTERC基因的异常扩增检出率为0,宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ组织分别为2.7%(2/75)、9.4%(6/64)、61.9%(39/63)和62.8%(27/43)。正常宫颈组织HPV阳性率为10.0%(1/10),宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ组织分别为10.8%(7/65)、25.0%(11/44)和29.8%(14/47),而CINⅢ组织则高达63.3%(19/30),差异有统计学意义(P<0.05)。同时有hTERC基因异常扩增和HPV阳性的检出率在CINⅢ组织中为50.0%,显著高于CINⅡ的27.7%和CINⅠ的2.3%(P<0.05),未见于正常宫颈和宫颈炎;hTERC基因异常扩增的检出率在HPV阳性人群为55.8%(29/52),显著高于HPV阴性人群的18.1%(26/144),差异有统计学意义(P<0.05)。对宫颈病变高危性的诊断,hTERC基因异常扩增检测的敏感性为63.6%,优于HPV检测的39.0%(P<0.05)。71例CINⅡ、CINⅢ高危患者行宫颈锥切治疗,取切缘正常组织检测,hTERC基因呈阴性,术后经4个月～2年随访追踪,病灶修复部位未见有hTERC基因转为阳性。结论 hTERC基因检测有助于筛查宫颈高危病变和选择治疗方案,对预防宫颈癌有益;同时进行hTERC基因联合HPV检测将更有意义。

液基细胞学、HPV检测及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值

目的:研究液基细胞学、人乳头瘤病毒(HPV)检测及人类染色体端粒酶(hTERC)基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法:选取2010年12月—2011年3月满足条件的河南省人民医院妇产科就诊者1000例,对其分别进行液基细胞学(TCT)检测、HPV-DNA检测(SPR法)、hTERC基因检测[荧光原位杂交(FISH)技术],对以上3种检测任一结果阳性者行阴道镜下宫颈活检,以病理学为金标准,评价3种方法对宫颈癌筛查的敏感度、特异度、约登指数及符合率。结果:1000例患者中,平均年龄为(41±9)岁,TCT结果异常者119例,占11.9%;HPV阳性者共136例,占13.6%;hTERC基因扩增阳性共58例,占5.8%。229例行阴道镜下宫颈活检,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)共36例,其中CINⅠ13例(5.68%),CINⅡ13例(5.68%),CINⅢ8例(3.49%),宫颈鳞状细胞癌(SCC)2例(0.87%)。单独应用一种筛查方案时,TCT的敏感度最高(83.3%)。应用任两种方案联合筛查时,TCT+HPV的敏感度最高(94.4%),但特异度最低(29.6%);TCT或HPV与hTERC基因检测联合都可使敏感度和特异度同时升高。随着病理级别的升高,各筛查方案检出率逐渐升高(P<0.05)。结论:联合筛查方案优于单一筛查方案;HPV检测+hTERC基因检测联合筛查效果最佳,但成本最高。TCT+HPV检测联合筛查不失为一种经济而相对高效的筛查方案,可作为基本筛查进行。应根据经济条件及筛查成本选择适合的筛查方案。

贵州部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性分析与比较

背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性。方法:用FISH检测hTERC基因的扩增,结合免疫组化检测端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、HPV16/18 E6抗原和HPV16 E7抗原的表达,分析和比较了贵州省部分地区少数民族(苗族、侗族和土家族)与汉族宫颈癌患者之间的扩增或表达的差异。结果:少数民族与汉族之间在hTERC扩增,hTERT、E6和E7表达上差异无统计学意义(P>0.05);在少数民族和汉族中,hTERC基因的扩增与hTERT表达差异无统计学意义(P>0.05),但HPV16/18感染与hTERC扩增或与hTERT表达之间具有显著相关性(P<0.01)。说明宫颈癌中,HPV感染可能是导致hTERC扩增与hTERT高表达的主要原因之一。结论:检测HPV16/18 E6和hTERT表达,并结合测定hTERC扩增可提高贵州省部分地区少数民族以及汉族妇女宫颈癌筛查的准确率。

小干扰RNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达

目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴性对照组(阴性对照组),无关序列siRNA对照组(无关序列对照组)及转染HPV18 E6-siRNA实验组(siRNA实验组)。设计并合成HPV18 E6-siRNA及无关序列siRNA,转染Hela细胞后,RT-PCR检测转染后48、120 h细胞内HPV18E6、E7mRNA的变化,Western blotting检测转染后48 h细胞内HPV18 E7和P53蛋白的变化。结果:siRNA转染Hela细胞的效率约为85%。siRNA转染后48 h,实验组细胞内HPV18E6、E7mRNA及E7蛋白含量降低,其含量分别为阴性对照组的33.33%、36.78%及33.84%;实验组细胞内P53蛋白含量增加,其含量为阴性对照组的2.194倍。siRNA转染后120 h,实验组细胞HPV18E6、E7mRNA含量恢复为阴性对照组的90.91%、101.60%。结论:HPV18 E6-siRNA体外能明显抑制宫颈癌Hela细胞HPV18E6、E7基因的表达,增加细胞内肿瘤抑制因子P53蛋白的水平。

荧光定量PCR法在人类宫颈癌RNA干扰中的应用

研究荧光定量PCR法在RNA干扰(RNA i)技术抑制宫颈癌Caski细胞人乳头瘤病毒16型E6基因(HPV16 E6)的应用情况,并与传统使用的灰度值分析法进行比较。构建shRNA重组质粒干扰载体转染至Caski细胞中。通过荧光定量PCR法和灰度值分析法检测干扰后细胞HPV16 E6基因的mRNA及蛋白质表达水平。实验表明HPV16 E6基因mRNA及蛋白质的表达量都有明显降低,与阴性对照空白质粒组相比有显著差异(P<0.01);RNA i对宫颈癌Caski细胞中HPV16 E6基因的表达具有较高的抑制率;荧光定量PCR法较之传统的灰度值分析法更为准确。

高危型HPV DNA和HPV RNA检测分别联合TCT应用于宫颈癌初筛的临床意义

目的:研究高危型HPV DNA和HPV RNA检测分别联合宫颈液基细胞学检测(TCT)应用于宫颈癌筛查的意义。方法:收治宫颈癌患者160例,随机分为A组和B组。A组采用HPV RNA联合TCT,B组采取HPV DNA联合TCT,比较两组检出率及诊断有效率。结果:A组检出率和诊断有效率明显低于B组(P<0.05)。结论:高危型HPV DNA联合TCT应用于宫颈癌初筛的效果优于HPV RNA联合TCT,临床价值较高。

HPV检测和免疫治疗进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的疾病包括良性增生性疾病、宫颈癌、头颈与直肠恶性肿瘤。全球发病率居高不下,不仅影响健康也造成很大经济负担。快速、可靠和有效的HPV检测对疾病诊断和预防非常重要。目前检测方法包括聚合酶链反应(PCR),DNA原位杂交、杂交捕捉法HC-2、高危HPV感染相关生物学标记的免疫组织化学检测、以及高危型HPV E6/E7 mRNA检测等。HPV病毒蛋白免疫组化以及DNA/RNA微阵列或芯片技术在HPV检测中的应用价值非常大但尚未推广普及。对HPV免疫学机制和致癌机制的最新研究促进了HPV相关肿瘤免疫治疗的研究。预防性HPV疫苗不能诱导细胞免疫清除HPV感染、尤其无法治疗HPV相关肿瘤,故迫切需要寻求治疗HPV感染和相关肿瘤的有效手段。已经研发的几种类型治疗性疫苗,包括活载体、蛋白质或肽、核酸和基于细胞的疫苗已在进行临床前和临床试验研究。另外一些新的免疫治疗策略,如免疫检查点抑制剂、过继性T细胞疗法等仅在临床前评估阶段。

MicroRNA联合TCT、HC2-HPV检测高危人乳头瘤病毒对早期宫颈癌的诊断价值

目的分析micro RNA联合宫颈液基薄层细胞学检测(TCT)、二代杂交捕获法检测高危人乳头瘤病毒(HC2-HPV)与病理学分析对早期宫颈癌诊断价值。方法选取2016年3月-2017年3月于河南大学淮河医院进行就诊的疑似宫颈癌患者150例,根据病理学诊断结果分析TCT、HC2-HPV及micro RNA检测的诊断价值。结果 TCT诊断结果 [正常范围(NR)、意义不明的不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)]与病理学结果 [良性细胞改变(BCC),不典型增生轻度(CIN-I),中度(CIN-II),重度(CIN-III),鳞状细胞癌(SCC)]比较差异有统计学意义。TCT诊断结果≥ASCUS有73例呈阳性占48.67%(73/150),病理学结果≥CIN-I有79例,占52.67%(79/150)。病理学诊断结果(BCC,CIN-I,CIN-II,CIN-III及SCC)与HC2-HPV阳性率差异较大,且其随宫颈癌变严重程度逐渐升高,差异有统计学意义(χ~2=23.710,P=0.000)。病理学诊断结果与micro RNA相对表达量有关,Mi RNA-21与Mi RNA-193b表达量随宫颈癌变严重程度逐渐升高;而Mi RNA-124与mi RNA-195表达量随宫颈癌变严重程度逐渐降低。HC2-HPV阳性率随宫颈癌变严重程度逐渐升高,差异有统计学意义(χ~2=40.896,P=0.000)。micro RNA联合TCT、HC2-HPV检测的敏感性为98.73%,特异性为98.59%,诊断符合率为98.67%,均高于单项micro RNA、TCT、HC2-HPV或者联合micro RNA+TCT、HC2-HPV+TCT及micro RNA+HC2-HPV的比较,差异有统计学意义(P<0.05);此外,micro RNA的敏感性、特异性及诊断符合率优于单一TCT及HC2-HPV。结论采用micro RNA联合TCT、HC2-HPV,用于早期宫颈癌患者的诊断,具有较高的敏感性、特异性及诊断符合率。

组织微小RNA-21表达及高危型HPV病毒载量与宫颈癌发生发展的相关性研究

目的探索组织微小RNA-21(miR-21)表达、高危型HPV病毒载量与宫颈癌发生发展的相关性研究。方法选择在2011年2月1日至2016年2月1日接受治疗的患有宫颈病变并行宫颈活检的患者150例。经细胞学(诊断标准采用TBS系统报告)及病理学诊断分为正常、炎或疣组14例、不典型鳞状细胞(ASCUS组)15例、宫颈上皮内瘤样病变Ⅰ级(CINⅠ组)29例、鳞状上皮中度非典型增生Ⅱ级(CINⅡ组)34例、鳞状上皮重度非典型增生Ⅲ级(CINⅢ组)31例和子宫颈癌包括宫颈鳞癌和宫颈腺癌(CC组)27例。采集各组患者脱落细胞或病变组织采用Real-timePCR方法和第二代杂交捕获技术(HCII)方法检测miR-21及高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV DNA)的载量,并观察miR-21表达、高危型HPV病毒载量与宫颈癌发生发展的相关性。结果各组结果对比发现,CC组的HPV病毒负荷量及miR-21表达量为(1 308.54±18.64)pg/ml、(1.12±0.65)Ct,均高于其他组。而正常、炎或疣组及ASCUS组的HPV病毒负荷量远远低于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05),正常、炎或疣组的miR-21表达量明显低于其他组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。而利用Speaman等级相关和Pearson相关性分析,发现两组数据与宫颈病变严重程度呈正相关,即宫颈病变越重,miR-21表达、高危型HPV病毒载量含量越高。结论 miR-21表达、高危型HPV病毒载量与宫颈癌病变程度呈正相关,检测两指标可为宫颈癌的诊断和治疗提供理论依据。

宫颈癌筛查方法及其进展

子宫颈癌起源于子宫颈上皮内瘤变,筛查发现子宫颈上皮内瘤变并积极治疗是预防子宫颈癌的有效措施。目前常用的宫颈癌筛查方法包括细胞学检查及人乳头瘤病毒(HPV)检测。细胞学检查及HPV检测均有新的筛查方法及进展。细胞学检查除了传统的巴氏细胞学检测及目前常用的液基细胞学检测,现部分医院开始采用细胞DNA倍性分析、P16/Ki67双染等方法辅助诊断。而HPV检测除了常规的HPV DNA检测,现较热门的是HPV E6/E7 mRNA检测,HPV E6/E7 m RNA检测可补充细胞学检查及HPV DNA检测的不足。现综述目前所采用的宫颈癌筛查方法及进展,为临床上宫颈癌筛查方法选择提供参考。

HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变诊治中应用价值的比较

目的:比较人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测和HPV DNA检测在宫颈病变诊治中的应用价值。方法:选取2018年1月—2019年9月在石家庄市妇幼保健院行宫颈液基薄层细胞学检查(thinprep cytology test,TCT)的患者共33496例,其中符合纳入标准的诊断意义不明的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells of undetermined significance,ASCUS)患者共3190例,将其随机分为2组,各1595例,分别进行HPV DNA检测(对照组)及HPV E6/E7 mRNA检测(观察组),再对每组的阳性患者进行阴道镜下活检及病理组织学检测,比较2种方法对宫颈病变的检出率。从对照组和观察组阳性的患者中随机各抽取184例,共368例,分别进行HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA检测,比较2种方法的诊断效能。结果:对照组高级别宫颈上皮内病变患者的检出率为4.8%(77/1595),观察组为4.1%(66/1595),差异无统计学意义(χ^(2)=0.886,P=0.347)。但与HPV DNA检测相比,HPV E6/E7 mRNA检测具有较高的敏感度(87.50%)、特异度(71.79%)、阳性预测值(49.36%)、阴性预测值(94.81%)、约登指数(0.593)和较低的阴道镜转诊率(42.4%,P<0.05)。结论:对于高级别宫颈上皮内病变,HPV E6/E7 mRNA检测比HPV DNA检测具有更高的诊断效能,可以作为ASCUS患者分流的新方法。