早期宫颈癌组织中ATG-12表达与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量及预后的关系

目的探讨早期宫颈癌组织中自噬相关蛋白-12(ATG-12)与人乳头瘤病毒(HPV)16-E6/E7-DNA病毒载量及预后的关系。方法选取2015年1月至2017年12月期间在安徽皖北煤电集团总医院保存的宫颈活检或手术切除宫颈组织203例,包括30例慢性宫颈炎、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、23例CINⅡ、26例CINⅢ和106例早期(ⅠA2~ⅡB期)宫颈鳞状上皮癌(CSCC)。采用巢式多重聚合酶链式反应(NM-PCR)和免疫组化染色SP法检测组织中HPV 16-E6/E7-DNA病毒载量和ATG-12蛋白表达。分析ATG-12蛋白表达与早期CSCC临床病理特征的关系。随访CSCC患者无瘤生存时间(DFS)。采用Cox风险比例回归模型分析影响CSCC预后的因素。结果CSCC组织ATG-12蛋白阳性表达率为26.42%(28/106),低于慢性宫颈炎和CIN组织(P<0.05)。ATG-12蛋白表达与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量呈负相关(r=-0.306,P=0.001;r=-0.436,P=0.001)。ATG-12蛋白表达与FIGO分期、间质浸润、淋巴脉管间隙浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。随访11~64个月,ATG-12蛋白阳性表达患者5年无瘤生存率为78.57%(22/28),ATG-12蛋白表达阴性患者5年无瘤生存率为60.26%(47/78)。多因素Cox风险回归模型结果显示,HPV16-E6/E7-DNA病毒载量和ATG-12蛋白表达是影响患者DFS的独立预后因素(P<0.05)。结论早期宫颈鳞状上皮癌组织中ATG-12阳性表达率低,与HPV16-E6/E7-DNA病毒载量呈负相关,有望成为评估HPV阳性早期宫颈癌患者预后的重要指标。

COX-2、HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及意义

目的分析研究环氧合酶-2(COX-2)、人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16-E6)在宫颈癌组织中的表达与病理特征间的关系。方法选取2017年11月~2019年11月46例初诊宫颈癌患者和46例因妇科良性疾病手术或门诊治疗的患者作为研究对象,采用S-P法对COX-2、HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达进行检测,采用阳性细胞百分比和染色强弱对指标进行评分。结果病理参数中年龄、病理类型、组织学分级、临床分期和肿瘤直径的COX-2阳性表达差异无统计学意义(P>0.05),肌层浸润深度、宫旁或脉管浸润、淋巴结是否转移的COX-2阳性表达差异有统计学意义(P<0.05);病理参数中组织学分级、临床分期、淋巴结是否转移、肿瘤直径和肌层浸润深度的HPV16-E6蛋白阳性表达差异无统计学意义(P>0.05),而年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润高度的HPV16-E6蛋白阳性表达差异有统计学意义(P<0.05);COX-2与HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中表达呈显著正相关关系,在宫颈慢性炎症组织中表达呈显著正相关关系。结论COX-2与HPV16-E6蛋白在宫颈癌侵袭、转移过程中可发挥协同作用。

表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系的建立

目的建立表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系。方法用阳离子脂质体基因转染技术将携带有HPV16-E6/E7DNA的真核表达质粒导入体外连续传20代的HPV阴性的Lscc-02喉鳞癌细胞系,采用PCR和Western blot检测HPV16-E6/E7基因在Lscc-02细胞系中的整合和表达。结果第22代和第35代细胞中,PCR和Western blot均分别检测出E6/E7基因和蛋白的存在,显示HPV16-E6/E7基因整合于Lscc-02细胞系中并能稳定表达。结论成功建立了表达HPV16-E6/E7基因的人喉鳞癌细胞系,为进一步研究HPV16-E6/E7基因在喉癌细胞中的作用机制以及喉癌的基因治疗奠定了基础。

HPV16-E6上调MIF对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的检测人乳头瘤病毒16型的致癌基因E6(HPV16-E6)通过巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用HPV16-E6过表达和干扰质粒转染能分泌MIF的人宫颈癌细胞C33A、Si Ha和Caski。Western blot和荧光定量PCR法检测MIF蛋白和m RNA表达,并用ELISA法检测培养上清液中MIF蛋白量;将转染后的宫颈癌细胞与人巨噬细胞非接触性共培养,检测巨噬细胞中MIF表达;C33A转染HPV16-E6后加或不加MIF抑制剂,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡情况;采用Pearson相关分析法分析HPV16-E6和MIF间的关系、Kaplan-Meier分析HPV16-E6对患者生存率的影响。结果癌细胞、上清液和巨噬细胞中MIF表达随HPV16-E6表达而上调(P<0.05);HPV16-E6过表达可诱导C33A细胞增殖、减少G0/G1期细胞和抑制细胞凋亡;抑制MIF后,细胞增殖率下降、凋亡率增加(P<0.05);HPV16-E6表达与MIF正相关(P<0.05),Kaplan-Meier分析显示HPV16-E6表达与患者总生存率和无进展生存率有关(P<0.05)。结论 HPV16-E6可诱导宫颈癌细胞及其微环境中巨噬细胞MIF表达,并可通过MIF诱导宫颈癌细胞增殖和抑制细胞凋亡而影响宫颈癌的预后。

HPV16-E6-DNA对宫颈癌预后价值分析

目的:探究HPV16-E6-DNA对宫颈癌预后预测价值。方法:回顾性分析本院2014年1月至2017年3月收治的72例宫颈癌患者临床资料,抽血化验,采用荧光定量(PCR)技术测定HPV16-E6-DNA病毒载量,按照其检测结果将患者分成两组,即低载量组与高载量组,采用荧光定量(RTPCR)测定宫颈癌患者组织中的HPV16-E6-DNA病毒载量,利用Kaplan-Meier计算方式计算两组生存率,选用Cox回归分析法分析影响患者5年生存率的因素。结果:HPV16-E6-DNA病毒载量在宫颈癌患者组织表达水平与患者年龄、FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05);低载量组患者1、3、5年生存率分别为95.66%、89.31%、74.30%;高载量患者1、3、5年生存率分别是89.10%、62.61%、51.36%,低载量患者的生存率显著高于高载量组(P<0.05);Cox回归分析结果显示,HPV16-E6-DNA病毒载量以及淋巴结转移均是影响宫颈癌患者预后的重要因素(P<0.05),有统计学意义。结论:HPV16-E6-DNA病毒对宫颈癌患者预后具有重要预测价值,是宫颈癌根治术后预后监测的重要因子,作为宫颈癌根治术后影响生存率的危险独立因素。

HPV16-E6蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床应用

目的研究人乳头瘤病毒16型E6蛋白(human papillomavirus-16E6protein,HPV16-E6)在宫颈病变组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化S-P法检测HPV16-E6蛋白在宫颈正常组织、慢性炎症、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、浸润癌上皮中的阳性表达情况。结果 HPV16-E6在正常宫颈、宫颈炎、CIN,宫颈癌各组中,阳性表达率分别为0.5%、38.35%、46.15%、71.11%,4组比较差异有统计学意义(χ2=27.50,P<0.01)。经χ2分割后比较(α′=0.007143),宫颈癌组、CIN组、宫颈炎组的阳性率显著高于正常宫颈组(P<0.05),宫颈癌组的阳性率显著高于宫颈炎组(P<0.01)。HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润相关(P<0.05)。结论 HPV16-E6与宫颈癌的启动、发生、发展及侵袭转移均密切相关。HPV疫苗对于宫颈癌的防治有广泛的应用前景。

HPV16-E6蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床应用

目的:探讨16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6蛋白在宫颈病变组织中的表达及其意义。方法:选择2009年12月～2010年12月于本院妇科门诊检查后临床诊断为宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)、宫颈癌、宫颈正常的患者,分别为12例、20例、27例、10例,采用免疫组化SP法检测病变组织标本HPV16-E6蛋白表达情况。结果:HPV16-E6蛋白在正常宫颈上皮、宫颈炎、CIN、浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0(0/10)、33.3%(4/12)、45.0%(9/20)、66.6%(18/27),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。病变组织的HPV16-E6蛋白阳性表达率显著高于正常宫颈组织(P<0.05),其中宫颈癌的阳性表达率最高,显著高于宫颈炎和CIN。结论:HPV16-E6蛋白表达与宫颈病变有重要联系,HPV16-E6蛋白的检测可以作为宫颈癌前病变转归的指标。

HPV16-E6蛋白在宫颈病变中的研究进展

高危型HPV病毒持续感染是宫颈癌及其癌前病变的主要病因,病毒编码产生的致病HPV16-E6蛋白已成为目前妇科临床和基础研究的热点问题。现就HPV16-E6蛋白的生物学特性及其在宫颈病变中的近期研究发现和进展进行简要概述。

宫颈鳞状细胞癌及尖锐湿疣中HPV 16-E6、HPV16-E7蛋白的表达

使用免疫组化方法检测HPV16-E6、HPV16-E7蛋白在宫颈鳞状细胞癌及宫颈尖锐湿疣、外阴尖锐湿疣的情况，结果显示宫颈鳞状细胞癌、宫颈尖锐湿疣及外阴尖锐湿疣中HPV16-E6蛋白的表达分别为50％、0％、0％；HPV16-E7蛋白的表达分别为78.3％、68.4％、85.3％。宫颈鳞状细胞癌及尖锐湿疣中均有HPV16-E7蛋白表达，但同时发现低危型HPV感染中也表达HPV16-E7蛋白，原因尚须进一步研究。

COX-2、HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和人乳头瘤病毒16型E6蛋白(human papillomavirus-16 E6 protein,HPV16-E6)在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组化S-P法检测COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌上皮中的阳性表达情况。结果:COX-2与淋巴结转移、宫旁或脉管浸润及肌层浸润深度呈显著性相关(P<0.05)。HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润呈显著性相关(P<0.05)。COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌中的阳性率呈正相关(P<0.01)。结论:COX-2和HPV16-E6在宫颈癌的侵袭转移中可能发挥协同作用。联合应用选择性COX-2抑制剂和HPV疫苗是宫颈癌防治中的一个新的有效策略。

宫颈腺癌p53、HPV16/18-E6蛋白和ER的表达及其临床意义

目的 探讨宫颈腺癌组织中 p5 3蛋白、HPV16 / 18 E6蛋白及ER的表达及其临床意义。 方法 采用免疫组织化学S P法对 6 3例宫颈腺癌组织进行p5 3蛋白、HPV16 / 18 E6蛋白及ER检测。结果 6 3例宫颈腺癌中p5 3、HPV16 / 18 E6蛋白和ER阳性表达率分别为为 5 2 .3%、31.7%和 4 9.2 %。p5 3表达与肿瘤病理分级、临床分期 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期 )有关。HPV16 / 18 E6、ER的表达与宫颈腺癌的病理学分级、临床分期无关 ,但与 p5 3表达呈负相关 (P <0 .0 1) ,HPV16 / 18 E6、ER在宫颈腺癌中的表达呈正相关 (P <0 .0 1)。结论 随宫颈腺癌组织病理分级和临床分期增高p5 3阳性表达率逐渐增高 ,可能与 p5 3突变有关 ,部分宫颈腺癌的发病可能与HPV16 / 18 E6蛋白过度表达有关。部分宫颈腺癌可能属于激素依赖性 ,雌激素可能有协同HPV致癌的作用。

p16^(INK4a)与HPV16/18-E6在宫颈组织中的表达及其临床意义

目的研究p16INK4a与HPV在不同宫颈组织中的表达及其临床意义,以寻求预测宫颈癌前病变及宫颈癌进展及预后的生物学标记。方法选取不同的宫颈组织,采用免疫组织化学方法检测宫颈组织上HPV16/18-E6和p16INK4a的表达,并结合临床资料进行分析。结果HPV16/18-E6和p16INK4a在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和宫颈上皮内瘤变组织CIN I级上呈阴性表达或弱表达,在CINⅢ级和宫颈癌组织上表达明显增强(P<0.01)。p16INK4a在宫颈癌上的表达和宫颈癌的病理分化和肌层浸润程度有明显的相关性(P<0.01)。结论HPV16/18-E6和p16INK4a在宫颈CIN III和宫颈癌上的表达有明显的相关性。p16INK4a和HR-HPV联合检测可提高对宫颈癌前变及宫颈癌的早期诊断率。

COX-2、HPV16-E6蛋白在宫颈癌组织中的表达

目的研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和人乳头瘤病毒16型E6蛋白(human papillomavirus-16 E6 protein,HPV16-E6)在宫颈癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化S-P法检测COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌上皮中的阳性表达情况。结果COX-2与淋巴结转移、宫旁或脉管浸润及肌层浸润深度呈显著性相关(P<0.05)。HPV16-E6与年龄、病理类型、宫旁或脉管浸润呈显著性相关(P<0.05)。COX-2和HPV16-E6蛋白在宫颈癌中的阳性率呈正相关(rs=0.6014,P<0.01)。结论COX-2和HPV16-E6在宫颈癌的侵袭转移中可能发挥协同作用。联合应用选择性COX-2抑制剂和HPV疫苗是宫颈癌防治中的一个新的有效策略。

宫颈癌组织HPV16-E6表达及其促进巨噬细胞代替性活化机制研究

目的研究人乳头瘤病毒16型致癌基因E6(HPV16-E6)及相关蛋白在宫颈癌组织中的表达,探讨其促进肿瘤相关巨噬细胞代替性活化的机制。方法选取2015-01-02-2016-03-31武汉大学中南医院确诊的45例宫颈癌标本进行免疫组织化学染色,分析HPV16-E6、巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、CXC趋化因子受体2(CXCR2)、白细胞分化抗原206(CD206)在宫颈癌和癌旁组织中的表达及与临床病理特征的关系。用HPV16-E6过表达质粒和干扰质粒分别转染人宫颈癌细胞C33A(C33A-E6)和Siha(Siha-shRNA),将转染后的宫颈癌细胞与人巨噬细胞共培养,检测巨噬细胞CXCR2 mRNA表达量。将巨噬细胞分别与HPV16-E6过表达质粒转染的C33A细胞(C33A-E6)和对照组C33A细胞(C33A-NC)共培养后根据分组分别采用MIF抑制剂、CXCR2抑制剂以及rhMIF进行处理,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)和白介素10(IL-10)mRNA的表达量,流式细胞仪检测各处理组白细胞分化抗原80(CD80)和CD206阳性细胞比例。结果宫颈癌组织中CXCR2(t=9.980,P=0.021)和CD206的表达量(t=10.070,P=0.015)与患者年龄有统计学意义关联;MIF表达量与患者分期有关联,t=12.560,P=0.024;CD206与患者肿瘤大小有关联,t=8.370,P=0.029。HPV16-E6、MIF、CXCR2和CD206在癌组织中的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义,t值分别为20.340、12.330、22.970和7.920,均P<0.05;且MIF表达与HPV16-E6呈正相关(r=0.486,P<0.001),CXCR2与HPV16-E6呈正相关(r=0.563,P<0.001),CD206与HPV16-E6呈正相关(r=0.482,P<0.001),MIF(r=0.740,P<0.001)和CXCR2(r=0.731,P<0.001)表达均与CD206呈正相关。与C33A-E6共培养的巨噬细胞CXCR2 mRNA表达量(4.320±0.080)高于C33A-NC组(1.820±0.290),差异有统计学意义,t=9.850,P=0.037;与Siha-shRNA共培养的巨噬细胞中CXCR2 mRNA的表达量(2.010±0.020)低于与Siha细胞共培养组(10.610±2.300),差异有统计学意义,t=14.870,P=0.009。与C33A-E6共培养的巨噬细胞中TNF-α的表达量(0.410±0.100)低于C33A-NC组(0.960±0.040),差异有统计学意义,t=8.845,P=0.001;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中iNOS的表达量(0.590±0.060)低于C33A-NC组(1.200±0.260),差异有统计学意义,t=3.960,P=0.017;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中Arg1的表达量(6.860±0.490)高于C33A-NC组(1.240±0.140),差异有统计学意义,t=7.410,P=0.030;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中IL-10的表达量(50.770±4.560)高于C33A-NC组(0.880±0.160),差异有统计学意义,t=14.690,P=0.014;当分别根据不同分组采用MIF抑制剂、CXCR2抑制剂或rhMIF处理后相应标志物的表达量发生逆转。与C33A-E6共培养的巨噬细胞中CD206阳性巨噬细胞比例[(38.020±1.330)%]高于C33A-NC组[(20.070±3.490)%],差异有统计学意义,t=15.420,P=0.001;与C33A-E6共培养的巨噬细胞中CD80阳性巨噬细胞比例[(12.560±2.390)%]低于C33A-NC组[(15.860±3.010)%],差异有统计学意义,t=13.980,P=0.045,当加入MIF抑制剂或CXCR2抑制剂后结果发生逆转。结论 HPV16-E6及相关蛋白在宫颈癌组织中高表达,且CXCR2和CD206与患者年龄,MIF与肿瘤分期,CD206与肿瘤大小有关联;HPV16-E6能通过MIF/CXCR2信号通路诱导巨噬细胞代替性活化。

PRDX2调控HPV16 E6对宫颈癌Siha细胞活性的影响

目的探究PRDX2在宫颈癌组织中的表达以及对宫颈癌Siha细胞的恶性生物学行为的影响。方法免疫组化方法检测宫颈癌组织以及癌旁组织中PRDX2的表达;将宫颈癌Siha细胞设置为4个组:Siha组、siRNA NC组、siRNA PRDX2组与siRNA HPV16 E6组。EDU染色法检测Siha细胞的生长活性;Transwell实验方法分析Siha细胞的侵袭数量;流式细胞术检测Siha细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹方法分析Siha细胞中PRDX2/HPV16 E6蛋白的表达水平。结果与宫颈癌旁组织比较,宫颈癌组织PRDX2的表达上调。与Siha组和siRNA NC组比较,siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞增殖能力下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞侵袭数量下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞凋亡率增加(P<0.05);siRNA PRDX2组的Siha细胞的HPV16 E6蛋白表达下调(P<0.05)。结论PRDX2在宫颈癌组织中表达增加,抑制PRDX2表达后,Siha细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与PRDX2调节HPV16 E6蛋白的表达相关。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

RNA干涉抑制宫颈癌CaSki细胞株HPV16 E6基因的研究

背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工作量大、耗费多等问题。本研究采用最新的RNA干扰技术干扰宫颈癌CaSki细胞中HPV16E6转录,以了解其能否特异性抑制HPV16E6基因及其时效性如何。方法:设计合成针对HPV16E6的荧光标记siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过荧光照片计数荧光细胞占所有细胞的比例计算转染效率;测定转染后不同时间点的细胞凋亡率;RT-PCR测定HPV16E6mRNA变化,Westernblot和流式细胞仪检测转染前后蛋白表达情况。结果:相差显微镜荧光照片显示细胞转染的效率为81%。HPV16E6siRNA转染细胞后24h、48h、5天凋亡率分别为7.7%、11.8%和37.4%,转染9天时凋亡率下降至12.6%。RT-PCR扩增结果显示,细胞转染前HPV16E6mRNA的量与siRNA阴性对照比较没有显著性差异,但转染后24h、48h、5天和9天分别减少了77%、83%、59%和41%;而作为内对照的β-actinmRNA在转染前后无变化。流式细胞仪定量测定HPV16E6蛋白,结果显示转染后24h、48h和5天,蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%和71.3%;9天时抑制率有下降,但仍可达57.

新疆哈萨克族食管癌组织中HPV16E6、E7基因的检测与p53的关系

目的 探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染在新疆哈萨克族(哈族)食管癌发病中的作用,并分析HPV16感染与p53过表达之间的关系。方法 采用聚合酶链(PCR)技术.检测41例食管鳞状细胞癌组织中HPV16 E6与E7基因表达差异;用LSAB免疫组织化学方法分析p53蛋白的表达。结果 癌组织中HPV16 E6与E7基因阳性检出率分别为34.15％(14／41)和63.41％(26／41);用免疫组化检出p53蛋白阳性率分别在HPV16 E6阳性组(57.1％)与HPV16 E6阴性组(14.8％)间、HPV16 E7阳性组(42.3％)与HPV16 E7阴性组(6.7％)间均存在显著性差异(P<0.05);用PCR检出HPV16 E6、E7基因在食管癌的高分化组、中低分化组中的检出率分别为7.69％(1／13)、46.43％(13／28)和38.46％(5／13)、75.00％(21／28),差别均有统计学意义(P<0.05)。结论 提示p53基因突变与HPV16感染在哈族食管癌的发病过程中存在相互促进作用;另外,HPV16 E6与E7基因和哈萨克族食管癌病理组织学分级的生物学行为密切相关。

宫颈癌和癌前病变中Aurora A表达及与HPV16感染的关系

目的探讨宫颈病变组织中Aurora A表达及与HPV-16 E6感染的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测204例宫颈组织中Aurora A及HPV-16 E6的表达。结果①HPV-16 E6的表达水平在CINⅡ、Ⅲ及宫颈鳞癌明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ(P<0.05);②Aurora A的表达水平在CINⅡ、Ⅲ及宫颈鳞癌明显高于慢性宫颈炎和CINⅠ,但在宫颈鳞癌与CINⅡ、Ⅲ中的表达差异无统计学意义(P>0.05);③Aurora A mRNA在HPV16阳性组的表达明显高于阴性组(P<0.05)。结论 HPV-16 E6表达与宫颈病变的进展相关;Aurora A的表达与宫颈癌的发生、发展及与HPV-16感染密切相关。Aurora A有望成为宫颈癌早期诊断、治疗的生物学指标。