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温度对突变型HPV16-L_1蛋白表达的影响
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作者 孙肖红 徐大为 +1 位作者 程露阳 郭亚春 《承德医学院学报》 2002年第3期182-183,共2页
目的 :探讨温度对突变型 HPV16— L1蛋白表达的影响。方法 :分别在 37℃、2 5℃诱导表达突变型HPV16 - L1蛋白 ,SDS- PAGE电冰比较表达产量。结果 :电泳结果显示 ,降低诱导温度对总蛋白量没有明显影响 ,但目的蛋白量高于常规 37℃下的... 目的 :探讨温度对突变型 HPV16— L1蛋白表达的影响。方法 :分别在 37℃、2 5℃诱导表达突变型HPV16 - L1蛋白 ,SDS- PAGE电冰比较表达产量。结果 :电泳结果显示 ,降低诱导温度对总蛋白量没有明显影响 ,但目的蛋白量高于常规 37℃下的产量。结论 :诱导表达时适当降低温度可提高目的蛋白表达产量。 展开更多
关键词 温度 突变型 hpv16-l1蛋白 表达
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女性外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的相关性 被引量:4
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作者 李虹 张雪红 +4 位作者 邢兰瑛 蔡东阁 潘艳艳 冯敏娟 王治荣 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期486-489,共4页
目的研究外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的关系。方法收集西安交通大学医学院第二附属医院手术治疗的44例女性外阴病变患者的临床病理资料,包括鳞癌11例,鳞状上皮内瘤变(VIN)10例,尖锐湿疣9例及白色病变14例。采用免疫组化SP方法检测HPV1... 目的研究外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的关系。方法收集西安交通大学医学院第二附属医院手术治疗的44例女性外阴病变患者的临床病理资料,包括鳞癌11例,鳞状上皮内瘤变(VIN)10例,尖锐湿疣9例及白色病变14例。采用免疫组化SP方法检测HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白的表达。结果①4组外阴病变患者年龄中位数依次为:外阴鳞癌61岁、VIN 45.5岁、尖锐湿疣24岁、外阴白色病44岁,尖锐湿疣组中位年龄低于外阴鳞癌组及白色病变组(P<0.05),其余各组间中位年龄无统计学差异。②HPV16/18E6蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组及外阴鳞癌组的阳性率分别为2/14、3/9、3/10、8/11,外阴鳞癌组高于白色病变组(P<0.05),其余各组间无统计学差异;HPV6L1蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组、外阴鳞癌组的阳性率分别为1/14、8/9、4/10、3/11,尖锐湿疣组高于其他各外阴病变组(P<0.05),其余各组间比较差异无统计学意义。③HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白在早期外阴鳞癌的阳性率均高于中晚期(P<0.05);HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白表达均与外阴鳞癌的组织学分级、年龄分组、绝经情况、产次不相关(P>0.05);HPV16/18E6蛋白与HPV6L1蛋白在外阴鳞癌中的表达不相关(P>0.05)。结论外阴病变的发病与年龄及HPV16/18、HPV6感染有关;外阴鳞癌中HPV16/18、HPV6的感染率与FIGO分期有关,HPV16/18感染率与HPV6的感染率无关。 展开更多
关键词 外阴病变 hpv16/18E6蛋白 hpv6 L1蛋白
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宫颈癌组织中HPV16L1蛋白质的表达及意义 被引量:1
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作者 潘贞贞 潘欢 +8 位作者 朱君玲 郑威楠 李洪涛 何鸿昌 任显显 武丹 王红英 杨昕 潘泽民 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第4期458-461,共4页
为探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白表达与宫颈癌发生与发展的关系,为防治宫颈癌奠定基础。采用收集宫颈癌患者48例、宫颈上皮内瘤样病变(cervcal intraepithelial neoplasia,CIN)患者41例和慢性宫颈炎患者30例石... 为探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白表达与宫颈癌发生与发展的关系,为防治宫颈癌奠定基础。采用收集宫颈癌患者48例、宫颈上皮内瘤样病变(cervcal intraepithelial neoplasia,CIN)患者41例和慢性宫颈炎患者30例石蜡组织标本用于免疫组织化学实验的方法。检测HPV16 L1蛋白在宫颈癌组织、CIN组织和慢性宫颈炎组织中的蛋白质表达状况。HPV16 L1蛋白质免疫组织化学实验的结果显示,慢性宫颈炎组织中阳性率为100%,而在宫颈癌组织中阳性率仅为27.1%,差异有统计学意义(P<0.01)。慢性宫颈炎组织的阳性率明显高于宫颈癌组织。由此可知,HPV16 L1蛋白质在宫颈原位癌开始表达减少,宫颈浸润癌表达减少更明显,可能可以用于诊断CINⅡ和CINⅢ或CINⅡ和宫颈癌。 展开更多
关键词 宫颈癌 hpv16L1蛋白质 蛋白表达
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HPV16主要衣壳蛋白L1在昆虫细胞中的表达及免疫学活性分析
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作者 孙肖红 周兰萍 +1 位作者 孙亚洲 李楠 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期273-277,共5页
目的 在昆虫细胞中表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,并分析其免疫学活性。方法 构建表达载体pFASTBACHTb L1(m2 0 2 ) ,用重组病毒感染sf9细胞表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,SDS PAGE、western blot鉴定其表达 ,亲和层析和离子交换层析纯化后... 目的 在昆虫细胞中表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,并分析其免疫学活性。方法 构建表达载体pFASTBACHTb L1(m2 0 2 ) ,用重组病毒感染sf9细胞表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,SDS PAGE、western blot鉴定其表达 ,亲和层析和离子交换层析纯化后的产物经鼻腔免疫Balb/c小鼠 ,竞争抑制ELISA分析免疫血清的中和活性。结果 SDS PAGE、western blot结果证明HPV16L1(m2 0 2 )蛋白的表达 ,纯化复性后产率约为 17% ,免疫血清具有竞争抑制HPV中和单抗与HPV16L1(m2 0 2 )相结合的能力。结论 昆虫细胞表达的HPV16L1(m2 0 2 ) 展开更多
关键词 hpv16L1蛋白 昆虫细胞 免疫学活性宫颈癌 hpv16感染 疫苗
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miR-1对HR HPV 16^+/18^+宫颈癌细胞周期相关蛋白的调控 被引量:1
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作者 胡滔 洪颖 +7 位作者 陈红兰 常业飞 姜水 习杨彦彬 檀雅欣 李珊 刘光彩 吴晓虹 《昆明医科大学学报》 CAS 2018年第12期11-15,共5页
目的比较miR-1过表达及表达抑制后人宫颈癌细胞HPV16+Siha以及HPV18+Hela中细胞周期蛋白的表达影响,了解miR-1在HR HPV致瘤过程中的分子机制。方法构建miR-1过表达慢病毒载体及miR-1缺陷表达载体,转染高危型(HR) HPV16+/18+人宫颈癌细胞... 目的比较miR-1过表达及表达抑制后人宫颈癌细胞HPV16+Siha以及HPV18+Hela中细胞周期蛋白的表达影响,了解miR-1在HR HPV致瘤过程中的分子机制。方法构建miR-1过表达慢病毒载体及miR-1缺陷表达载体,转染高危型(HR) HPV16+/18+人宫颈癌细胞,运用Western blot方法对各组转染细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin D2、Cyclin E的表达进行检测。结果 (1)成功获得miR-1过表达及表达抑制的人宫颈癌细胞株Hela和Siha;(2)与空白对照组相比,miR-1过表达及表达抑制后HR HPV16+/18+人宫颈癌细胞株中细胞周期蛋白出现了相应的表达改变。结论 miR-1在HR HPV+人宫颈癌中的致瘤性与其对细胞周期蛋白的表达调控密切相关。 展开更多
关键词 宫颈癌 高危型人乳头瘤病毒16/18型 MIR-1 细胞周期蛋白
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MAPPING EPITOPES OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 PROTEIN WITH A PHAGE DISPLAY EPITOPE LIBRARY
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作者 刘天菊 司履生 +3 位作者 王一理 孙向乐 杨居祥 耿宜萍 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 CAS 1998年第2期109-114,共6页
The objective of this study is to map epitopes on HPMAPV16 L1 protein and provide information to the design of HPV16 prophylactic peptide vaccine. The epitopes on L1 protein were screenedby polyclonal and two monocl... The objective of this study is to map epitopes on HPMAPV16 L1 protein and provide information to the design of HPV16 prophylactic peptide vaccine. The epitopes on L1 protein were screenedby polyclonal and two monoclonal antibodies (BS and F4G3) against RPV16 L1 protin from a 6-merfd phage display epitope library with the method or immuuo-afrinity screening (Biopauuing). Aferthree rounds or Bio-Panning, the Positive phages were detected by L1 antibodies again with ELISA.The positive phages reacted strongly with L1 antibodies were then identified by DNA sequencing.Three mimotopes have been screened by polycloual and two monoclonal antibodies. The mimotope(LSLFSC) reacted with mouoclonal antibody B8 showed 50% pomology with the sequence 270275a. a (DSLFFY) of prototype HPV16 L1. Another mimotope (LTSSYS) reacted with polyclonalantibodies had 66% pomology with the L1 sequence 516~521a. A(TTSSTS), also a mimotope (DRWDRF) was found had the bomologic RF with the known L1 sequence 441 ~446a. a. The mimotopesLSLFSC and DRWDRF were adjacent to the epitopes at 267~269a. a and 422~441 a. a reported byother researchers Previously. Our results suggest that there might be a batch of epitopes on HPV16L1 ppotein, and the predominant epitopes of HPV16 L1 protein are located in the above two domains. These results will be helpful for design or HPV16 prophylactic peatide vaccines and HPVpolyvalent vaccines. 展开更多
关键词 hpv16 L1 protein phage display epitope library antigeuic epitope
全文增补中
人乳头瘤病毒16型晚期基因L1在原核细胞的表达及免疫效果观察 被引量:3
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作者 刘朝奇 许雪梅 +3 位作者 徐建青 李昆 司静懿 刘世德 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2007年第35期5028-5032,共5页
目的:人乳头瘤病毒16型(HPV16)疫苗的研制可望防治宫颈癌的发生、发展,本实验从中国感染人群中克隆L1基因,期望制备中国人群的HPV16的预防性疫苗。方法:从HPV16阳性的尖锐湿疣临床标本中,PCR扩增HPV16L1基因,克隆、测序,并在... 目的:人乳头瘤病毒16型(HPV16)疫苗的研制可望防治宫颈癌的发生、发展,本实验从中国感染人群中克隆L1基因,期望制备中国人群的HPV16的预防性疫苗。方法:从HPV16阳性的尖锐湿疣临床标本中,PCR扩增HPV16L1基因,克隆、测序,并在原核细胞表达L1蛋白,纯化蛋白经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(VLP),VLP免疫动物观察抗体产生情况。结果:克隆的HPV16L1,测序结果发现有4个特异性突变位点是nt6240的C-G、nt6432 A→G、nt6901-03及nt6951-53。将HPV16L1基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),高表达的蛋白应用蛋白转印证实是HPV16L1蛋白,纯化的蛋白复性后可以自组装VLP,免疫动物产生高滴度的抗体。结论:从临床标本克隆表达了HPVl6L1基因,可以在原核细胞高表达及体外组装VLP,并且具有良好的免疫原性。为研制HPV16预防性疫苗探索一条易于推广而经济的制备途径。 展开更多
关键词 hpvL6 L1基因 蛋白表达 免疫
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重组HPV16 L1衣壳蛋白的表达与层析纯化工艺的优化
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作者 王蕾 孙琦 +5 位作者 陈放 夏霖亚 张宁 吴铭洁 吴丛梅 殷玉和 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期445-453,共9页
在大肠杆菌系统中表达重组HPV16 L1衣壳蛋白,并采用实验设计(design of experiments,DOE)对重组蛋白的阳离子交换层析纯化工艺参数进行优化,以获得更高的回收率,为产品生产提供指导。首先,构建表达载体pET-30a-16 L1,转化至大肠杆菌BL21... 在大肠杆菌系统中表达重组HPV16 L1衣壳蛋白,并采用实验设计(design of experiments,DOE)对重组蛋白的阳离子交换层析纯化工艺参数进行优化,以获得更高的回收率,为产品生产提供指导。首先,构建表达载体pET-30a-16 L1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,进行诱导表达并应用50 L发酵罐高密度培养工程菌;然后,单因素变量筛选4种阳离子交换层析介质,DOE方法优化上样流速及缓冲液的pH,疏水层析进一步纯化;分析重组HPV16 L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的蛋白纯度、回收率、内毒素、宿主残余蛋白和残余DNA,并进行透射电镜形态观察;最后,HPV16 L1 VLPs免疫小鼠,评价体内所诱导的中和抗体水平。结果显示,筛选并确定pH为8.0的缓冲体系和5 mL/min的上样流速进行POROS^(TM)XS阳离子层析作为蛋白纯化条件,疏水层析进一步纯化;纯化后蛋白浓度为1.0 mg/mL,回收率为46.23%,纯度为97%,内毒素含量小于12.5 EU/mL,宿主残余蛋白为6.00 ng/mL,宿主残余DNA为3.30 ng/mL;小鼠免疫6周后血清的中和抗体滴度Log10平均值为4.01。本研究利用大肠杆菌表达系统成功表达HPV16 VLPs,获得优化后的阳离子交换层析纯化工艺,为VLPs疫苗的研发提供了思路,为DOE在生物工程领域的应用提供依据。 展开更多
关键词 实验设计 蛋白纯化 hpv16 L1
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利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白 被引量:2
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作者 金晓媚 姚宇峰 +5 位作者 黄惟巍 杨旭 孙文佳 刘存宝 龙琼 马雁冰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期448-452,457,共6页
目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换... 目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。 展开更多
关键词 翻译延伸因子1 启动子 毕赤酵母 绿色荧光蛋白 人乳头瘤病毒16 L1蛋白
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人乳头瘤病毒16型L1基因在毕赤酵母中表达的影响因素分析 被引量:2
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作者 杨旭 黄惟巍 +4 位作者 姚宇峰 刘存宝 孙文佳 白红妹 马雁冰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1-7,共7页
目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密... 目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒p PinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和p PinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达。结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85%;M16为-451.50 kcal/mol和47.83%;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10%;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01%。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒p PinkTM-HC与p PinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论:密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性,显著影响了表达水平。研究证明基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。 展开更多
关键词 表达 重组 人乳头瘤病毒16主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母
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