阴道镜检查联合HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测筛查宫颈上皮内瘤变效果

目的:探讨宫颈病变筛查中阴道镜检查、人乳头瘤病毒L1(HPV L1)壳蛋白检测、多肿瘤抑制基因(MTS1,p16蛋白)检测和联合诊断在宫颈上皮内瘤变(CIN)的临床应用效果。方法:收集2022年6月-2023年6月本院妇科门诊因疑存宫颈病变进行宫颈癌筛查的女性201例,均行HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测和阴道镜检查,以阴道镜下宫颈组织活检病理结果为诊断依据,对HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测、阴道镜检查及3项联合诊断的效果进行分析。结果:宫颈病理诊断无病变121例,病变80例(CIN1级54例、CIN2级25例、CIN3级1例)。阴道镜CIN检出率为53.7%,灵敏度81.3%,特异度64.5%,准确度为71.1%;HPV L1壳蛋白检测CIN检出率为55.2%,灵敏度73.8%,特异度为57.0%,精确度为63.7%。p16蛋白检测CIN检出率为53.7%,灵敏度83.8%,特异度66.1%,精确度73.1%。3项联合检测CIN检出率为64.2%,灵敏度97.5%,特异度57.9%,精确度74.6%。筛查灵敏度阴道镜、HPV L1壳蛋白、p16蛋白检测无差异(χ^(2)=2.667,P>0.05),但3项联合诊断的灵敏度高于各单独指标检测(χ^(2)=11.123、18.331、8.901,P<0.05),特异度3项联合诊断与单独指标无差异(χ^(2)=3.233,P>0.05)。结论:阴道镜检查联合HPV L1壳蛋白,p16蛋白检测筛查CIN的灵敏度可显著提高,可为临床提供有价值的诊断证据。

温度对突变型HPV16-L_1蛋白表达的影响

目的 :探讨温度对突变型 HPV16— L1蛋白表达的影响。方法 :分别在 37℃、2 5℃诱导表达突变型HPV16 - L1蛋白 ,SDS- PAGE电冰比较表达产量。结果 :电泳结果显示 ,降低诱导温度对总蛋白量没有明显影响 ,但目的蛋白量高于常规 37℃下的产量。结论 :诱导表达时适当降低温度可提高目的蛋白表达产量。

子宫颈病变中HPV L1蛋白和p16的表达

目的研究HPV L1蛋白和p16在子宫颈各种病变中的表达情况,探讨它们在子宫颈病变进展中的预测价值。方法应用免疫组化方法检测41例各种子宫颈病变(CIN1级18例、CIN2级9例、CIN3级8例和浸润性鳞状细胞癌6例)中HPV L1蛋白和p16的表达。结果HPV L1蛋白在各种子宫颈病变中的阳性率为26.8%。其中HPV L1在CIN1中的阳性表达率为38.9%,CIN2为44.4%,CIN3和浸润性鳞状细胞癌均无表达。p16在各种子宫颈病变中的阳性率为68.3%,其在CIN1中的阳性表达率为38.9%,CIN2为77.8%,CIN3和浸润性鳞状细胞癌均表达阳性。100%CIN3和浸润性鳞状细胞癌为p16+/HPV L1-,而61.1%CIN1中为p16-/HPV L1+或p16-/HPV L1-。结论随着子宫颈病变的进展,HPV L1阳性表达率降低而p16阳性表达率增高。p16+/HPV L1-提示子宫颈鳞状上皮内瘤变有进展的可能,而p16-/HPV L1+和p16-/HPV L1-可能为无进展的或潜在消退的子宫颈病变。

宫颈上皮内瘤变及早期宫颈癌组织中P16、HPV L-1壳蛋白的表达及与HR-HPV载量相关性研究

目的：探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）及早期宫颈癌组织中P16、HPV L-1壳蛋白的表达及与高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）载量的相关性。方法：分别采用免疫组化法和第二代杂交捕获法（hybrid captureⅡ,HC-2）检测26例慢性宫颈炎组织、83例低度鳞状上皮内病变（LSIL）（CINⅠ83例）、109例高度鳞状上皮内病变（HSIL）（CINⅡ49例,CINⅢ60例）、11例早期宫颈鳞癌组织中P16蛋白、HPV L-1壳蛋白的表达及HR-HPV载量,并分析其相关性。结果：1在宫颈癌前病变中随病变级别增高,HR-HPV阳性率增加,差异有统计学意义（P〈0.01）。各组织学分级中病毒载量分布差异有统计学意义,HSIL（44.95%）及早期宫颈癌组织（63.64%）中皆以低病毒载量（1~100 RLU/CO）为主。从慢性宫颈炎、LSIL、HSIL到早期宫颈癌,P16蛋白阳性表达率分别为11.54%（3/26）,55.42%（46/83）,85.32%（93/109）,100.00%（11/11）,差异有统计学意义（P〈0.01）;L-1壳蛋白阳性率分别为15.38%（4/26）,28.92%（24/83）,14.68%（16/109）,0.00%（0/11）,差异有统计学意义（P〈0.05）。2229例宫颈组织中,随HPV载量增加,P16蛋白表达增强;L-1壳蛋白阳性表达率增加,差异有统计学意义（P〈0.01）。3在慢性宫颈炎组中,P16蛋白阳性表达与HPV载量呈正相关（r=0.491,P〈0.05）。在LSIL组中,P16蛋白与HPV载量（r=0.459,P〈0.01）及L1壳蛋白表达（r=0.297,P〈0.01）皆呈正相关。4在HSIL及早期宫颈癌组中,P16蛋白、L-1壳蛋白表达与HPV载量三者之间无明显相关性（P〉0.05）。结论：P16、HPV L-1壳蛋白异常表达是宫颈癌前病变发生发展的早期分子事件,对判断CINⅠ有参考价值,可能比HR-HPV载量更具有预测价值。

原核表达系统中HPV16L1蛋白的表达与纯化

为了建立 HPV16 L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白 ,我们构建了 p GEX4 T- HPV16 L1表达质粒。在大肠杆菌 BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8M尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果显示 ,HPV16 L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的 HPV16 L1蛋白 ,为 HPV16

宫颈上皮内瘤变及早期宫颈癌组织中P16、HPV L-1壳蛋白的表达分析

目的探讨P16、HPV L-1壳蛋白的表达及在早期宫颈癌、宫颈上皮内瘤变中的筛查价值。方法本次研究纳入67例CIN患者及15例早期宫颈鳞状上皮细胞癌患者,另选取慢性宫颈炎患者31例,应用第二代杂交捕获法及免疫组化法检测HR-HPV载量、P16及HPV L-1壳蛋白表达并对相关性进行分析。结果P16蛋白在早期宫颈癌、HSIL、LSIL及慢性宫颈炎阳性表达率升高,HPV L-1壳蛋白阳性表达率有显著差异(P<0.05)。随着病毒载量不断增加,HPV L-1及P16蛋白阳性表达率均出现变化(P<0.05)。慢性宫颈炎P16蛋白表达阳性率及高危型HPV病毒呈正相关(P<0.05)。LSIL病变中P16蛋白表达阳性率与高危型HPV病毒呈正相关(P<0.05)。HSIL病变中P16蛋白表达阳性率与高危型HPV病毒无相关性(P>0.05)。结论P16、HPV L-1壳蛋白表达阳性在CIN及早期宫颈癌筛查中的应用价值较高。

宫颈癌组织中HPV16L1蛋白质的表达及意义

为探讨人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白表达与宫颈癌发生与发展的关系,为防治宫颈癌奠定基础。采用收集宫颈癌患者48例、宫颈上皮内瘤样病变(cervcal intraepithelial neoplasia,CIN)患者41例和慢性宫颈炎患者30例石蜡组织标本用于免疫组织化学实验的方法。检测HPV16 L1蛋白在宫颈癌组织、CIN组织和慢性宫颈炎组织中的蛋白质表达状况。HPV16 L1蛋白质免疫组织化学实验的结果显示,慢性宫颈炎组织中阳性率为100%,而在宫颈癌组织中阳性率仅为27.1%,差异有统计学意义(P<0.01)。慢性宫颈炎组织的阳性率明显高于宫颈癌组织。由此可知,HPV16 L1蛋白质在宫颈原位癌开始表达减少,宫颈浸润癌表达减少更明显,可能可以用于诊断CINⅡ和CINⅢ或CINⅡ和宫颈癌。

P16^(INK4A)联合HPV L1壳蛋白检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断中的应用

目的初步探讨P16^(INK4A)联合HPV L1壳蛋白检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断中的应用价值。方法选择在温州市人民医院就诊患者,收集69例宫颈鳞状上皮内病变标本,行P16^(INK4A)、HPV L1壳蛋白检测,分析P16^(INK4A)、HPV L1壳蛋白及P16^(INK4A)联合HPV L1壳蛋白在各级宫颈病变中的表达差异。结果 P16^(INK4A)在LSIL组、HSIL组、SCC组中的阳性率分别为45.5%、85.2%、100.0%。同LSIL组比较,P16INK4A在HSIL组及SCC组阳性率明显升高(P<0.01)。HPV L1壳蛋白在LSIL组、HSIL组、SCC组中的阳性率分别为63.6%、18.5%、0%,HPV L1壳蛋白在LSIL组中阳性率明显低于HSIL组及SCC组(P<0.01)。随着宫颈病变加重,P16+/L1-阳性率有升高趋势(P<0.01),P16-/L1+阳性率有下降趋势(P<0.01)。LSIL组中P16+/L1-阳性率明显低于HSIL组和SCC组(P<0.01),SCC组P16+/L1-阳性率较HSIL组有明显提高(P<0.05)。LSIL组中P16-/L1+阳性率明显低于HSIL组和SCC组(P<0.01)。P16+/L1-较P16^(INK4)、HPV L1壳蛋白单一检测筛查HSIL+特异性明显升高(P<0.01)。结论 P16^(INK4A)联合HPV L1壳蛋白有望成为诊断宫颈鳞状上皮内病变的有效指标。

HPV16 L1蛋白在原核表达系统中的表达与纯化

目的 建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法 构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果 HPV16L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的蛋白。结论 建立了一套纯化HPV16L1蛋白的方法。

HPV16L1重组蛋白在甲醇营养型酵母菌中的诱导表达及鉴定

目的 HPV16L1重组蛋白的表达为研制HPV16L1预防性蛋白疫苗及诊断试剂盒打下基础。方法 pPIC3 5 HPV16L1 GS115阳性菌株 ,经 0 5 %甲醇诱导 ,运用SDS PAGE电泳检测L1蛋白 ;用鼠抗HPV16L1单克隆抗体 ,经WesternBlotting检测蛋白的特异性 ;在透射电镜下观察类病毒颗粒 (VLPs)。结果 SDS PAGE检测结果表明 ,在5 5KD处有诱导蛋白带的出现 ;经WesternBlotting验证 ,该蛋白能与HPV16L1单克隆抗体特异结合 ,证明该蛋白确为HPV16L1蛋白 ;电镜下见到了直径约为 5 0nm、形态结构与天然病毒颗粒极其相似的VLPs。结论 pAIC3 5 HPV16L1重组质粒在甲醇营养型酵母菌中可经甲醇诱导产生HPV16L1晚期蛋白 ,该蛋白在酵母菌中可自我组装成VLPs。

LRP16蛋白在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化中表达量的变化

目的 LRP16蛋白在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞LRP16蛋白表达的调控。方法经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞,每天(0-8d)均留取蛋白标本。不同浓度(0、1、10、100nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞24h,分别留取蛋白标本。Western-Blot方法检测样本中LRP16蛋白的表达量。结果 LRP16蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达,从诱导的第3、4天开始表达,迅速升至高峰,此后维持在高表达水平。LRP16蛋白在第6-8天之间表达水平无统计学差异(P>0.05),其余各时段间表达水平均有显著差异(P<0.01)。不同浓度胰岛素刺激脂肪细胞24h,细胞中LRP16蛋白表达量与胰岛素浓度呈负相关(P<0.01)。结论 LRP16蛋白随着前脂肪细胞分化的开启,表达量从无到有逐渐增加至高峰,并一直维持在高表达水平;胰岛素(INS)负调控脂肪细胞LRP16蛋白的表达。

HPV L1壳蛋白与P16蛋白联合检测在宫颈癌前病变中的临床意义

目的研究HPV L1壳蛋白与P16蛋白联合运用在宫颈癌前病变诊断中的临床意义及对转归的预测价值。方法对208例TCT异常且HR-HPV阳性的患者进行宫颈活检并根据病理结果分组,同时检测其HPV L1壳蛋白和P16蛋白并根据两种抗体表达情况分为4组,并对其中随访到的155例患者进行HPV转阴分析。结果HPV L1壳蛋白和P16蛋白在不同级别宫颈组织中的表达均不同,CINⅠ组的L1壳蛋白阳性率高于其他CIN组(P<0.01),≥CINⅢ组的P16蛋白阳性率高于其他3组(P<0.01);随访病例中HPV L1壳蛋白(+)/P16蛋白(-)的转阴率高,尤其在CINⅠ患者中该组高于其他几组(P<0.05)。结论 HPV L1壳蛋白与P16蛋白联合检测可成为诊断及预测宫颈病变的一个有效指标。

HPV16主要衣壳蛋白L1在昆虫细胞中的表达及免疫学活性分析

目的 在昆虫细胞中表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,并分析其免疫学活性。方法 构建表达载体pFASTBACHTb L1(m2 0 2 ) ,用重组病毒感染sf9细胞表达HPV16L1(m2 0 2 )蛋白 ,SDS PAGE、western blot鉴定其表达 ,亲和层析和离子交换层析纯化后的产物经鼻腔免疫Balb/c小鼠 ,竞争抑制ELISA分析免疫血清的中和活性。结果 SDS PAGE、western blot结果证明HPV16L1(m2 0 2 )蛋白的表达 ,纯化复性后产率约为 17% ,免疫血清具有竞争抑制HPV中和单抗与HPV16L1(m2 0 2 )相结合的能力。结论 昆虫细胞表达的HPV16L1(m2 0 2 )

宫颈癌病理组织内HPV16 L1蛋白的表达及其意义

目的:了解宫颈癌组织内人乳头瘤病毒16L1蛋白质的表达水平及其与疾病的发生、发展关系。方法:收集38例宫颈癌病理组织(宫颈癌组)、35例宫颈上皮内瘤样病变组织(CIN组)及35例慢性宫颈炎组织(慢性宫颈炎组),采用免疫组织化学法检测三组样本内HPV16L1蛋白表达情况。结果:宫颈癌组HPV16L1蛋白表达阳性率为15.8%(6/38),显著低于CIN组的82.9%(29/35)和慢性宫颈炎组的100%(P均<0.05);CIN组内,HPV16L1蛋白在CINⅢ级组织中阳性表达率显著低于CINⅠ/Ⅱ级(P<0.05)。结论:宫颈癌组织、CIN组织和慢性宫颈炎组织内HPV16L1蛋白表达水平各异,宫颈癌组织内表达减少,提示HPV16L1蛋白表达下降与宫颈癌发病关系密切。

女性外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的相关性

目的研究外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的关系。方法收集西安交通大学医学院第二附属医院手术治疗的44例女性外阴病变患者的临床病理资料,包括鳞癌11例,鳞状上皮内瘤变(VIN)10例,尖锐湿疣9例及白色病变14例。采用免疫组化SP方法检测HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白的表达。结果①4组外阴病变患者年龄中位数依次为:外阴鳞癌61岁、VIN 45.5岁、尖锐湿疣24岁、外阴白色病44岁,尖锐湿疣组中位年龄低于外阴鳞癌组及白色病变组(P<0.05),其余各组间中位年龄无统计学差异。②HPV16/18E6蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组及外阴鳞癌组的阳性率分别为2/14、3/9、3/10、8/11,外阴鳞癌组高于白色病变组(P<0.05),其余各组间无统计学差异;HPV6L1蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组、外阴鳞癌组的阳性率分别为1/14、8/9、4/10、3/11,尖锐湿疣组高于其他各外阴病变组(P<0.05),其余各组间比较差异无统计学意义。③HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白在早期外阴鳞癌的阳性率均高于中晚期(P<0.05);HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白表达均与外阴鳞癌的组织学分级、年龄分组、绝经情况、产次不相关(P>0.05);HPV16/18E6蛋白与HPV6L1蛋白在外阴鳞癌中的表达不相关(P>0.05)。结论外阴病变的发病与年龄及HPV16/18、HPV6感染有关;外阴鳞癌中HPV16/18、HPV6的感染率与FIGO分期有关,HPV16/18感染率与HPV6的感染率无关。

人乳头瘤病毒16型E6蛋白高表达下调LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β

目的将人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E6蛋白真核表达载体pcDNA3.1(-)/E6转染巨噬细胞,观察E6蛋白瞬时高表达对LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β的影响,为进一步研究HPV16E6蛋白的致病机制奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(-)/E6通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24h后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Western-blotting鉴定E6蛋白在巨噬细胞中的表达,ELISA检测pcDNA3.1(-)/E6转染的巨噬细胞不同时间(12、24及48h)培养上清液中TNF-α与IL-1β的含量,统计软件SPSS12.0分析所得数据。结果Western-blotting结果显示pcDNA3.1(-)/E6能在巨噬细胞中表达约18kD的目的蛋白,即E6蛋白;pcDNA3.1(-)/E6+LPS组培养上清中TNF-α与IL-1β的量明显低于巨噬细胞+LPS组和pcDNA3.1(-)+LPS组,pcDNA3.1(-)/E6+LPS组与巨噬细胞+LPS组和pcDNA3.1(-)+LPS组比较,差异具有显著性(P<0.01)。结论HPV16E6蛋白瞬时高表达下调LPS诱导的THP-1巨噬细胞分泌TNF-α与IL-1β。

HPV 16L1基因的原核表达及表达条件的优化

目的:构建HPV16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件。方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆。其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16L1已构建成功。提取pGEX-KG-HPV16L1质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体,进行SDS-PAGE,Western Blot鉴定。结果:在大肠杆菌中获得HPV16L1基因融合表达,融合蛋白的相对分子量为83kDa;表达的蛋白能与抗HPV16L1抗体发生特异性反应。结论:HPV16L1基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。

表达的人乳头瘤病毒-16型L_(1)蛋白质经树突状细胞递呈给淋巴细胞的研究

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)-16型L1基因和单纯疮疹病毒(HSV)-gD基因的2种重组蛋白和HPV-16型L1蛋白与树突状细胞(DC)和淋巴细胞的相互作用。方法带有重组质粒pCDNA3.0和pBV220的病毒基因在DH5α中42℃诱导表达,所获得的重组蛋白质与其抗体进行蛋白印迹。将重组HPV16-L_(1)蛋白与白细胞孵育,在TEM 1011电子显微镜下观察DC与淋巴细胞的相互作用。结果pBV220-HPV-L_(1)和pBV220-HSV-gD重组蛋白的相对分子量分别约为64000和13000。其浓度分别为0.59 mg/ml和0.46 mg/ml。此外,蛋白印迹表明针对HPV-16-L_(1)或HSV-gD制备的抗体能与表达的重组蛋白特异性结合。在电子显微镜TEM 1011视野观察到DC递呈HPV-16-L_(1)表达的蛋白质给淋巴细胞的现象。结论电子显微镜TEM 1011显示DC吞噬了颗粒,可能是病毒样颗粒(VLPs)。DC将HPV-16-L_(1)表达的蛋白可能递呈给了淋巴细胞,进行了信号传递。

真核表达人乳头瘤病毒16型L_1蛋白在检测宫颈癌患者相应抗体的应用

用真核表达HPV16L1蛋白为抗原，酶联免疫吸附测定64例宫颈癌患者血清和阴道分泌物的相应抗体，并用型特异性聚合酶键反应检测宫颈癌组织HPV16L1基因。结果：宫颈癌组血清HPV16L1抗体阳性年64．1％，对照组20．8％；宫颈癌组阴道分泌物HPV16L1抗体阳性率64.1％，对照组25％；宫颈癌组HPV16L1基因检出率为42．2％，对照组10％。有显著差异（P＜0．01）。结论：高危型HPV感染，宫颈癌患者有明显免疫反应，全身和局部无明显差异，真核表达HPV16L1蛋白可用于宫颈癌患者的抗体测定。

人乳头瘤病毒16型突变型外壳蛋白高效表达系统的构建及目的蛋白的表达

目的探讨突变型HPV16 L1(m202)基因在原核表达系统中的高效表达。方法利用基因重组技术构建含有突变型HPV16 L1(m202)全长基因的重组质粒，在大肠杆菌中诱导目的蛋白高效表达。结果经SDS—PAGE电泳及westem blot鉴定，成功地构建了含突变型L1(m202)基因的重组质粒，获得高效表达的目的蛋白L1(m202)。突变型L1(m202)的表达量高于原型L1。结论L1基因的突变可提高原核系统L1(m202)蛋白的表达量。