人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮细胞恶性转化的研究

为了研究病毒和促癌物在食管癌形成中的作用，用带有人乳头状瘤病毒１８型Ｅ６Ｅ７片段的载体腺病毒（简称ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ）感染人胚食管上皮细胞，然后加ＴＰＡ协同作用，观察细胞转化。将人胚食管切碎，与ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ同孵育２小时，在加有１０％小牛血清的１９９培养液培养和传代，形成永生化细胞株，即人胚食管上皮细胞汕头株（ＳＨＥＥ）。实验分两组：一组ＳＨＥＥ细胞在传代至第５和１３代时，两次在培养基中加入ＴＰＡ（１２Ｏｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ１３ａｃｅｔａｔｅ）５ｎｇ／ｍｌ，每次诱导２周，所获得的细胞株称为人胚食管上皮癌细胞汕头株１号（ＳＨＥＥＣ１）；另一组ＳＨＥＥ细胞培养条件相同，未加ＴＰＡ，为对照组。细胞转化的形态表型由光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜检查；ＤＮＡ含量和细胞周期用流式细胞仪检测；用３５ｍｍ软琼脂培养皿接种１０３细胞（第２０代），每组５碟，计算集落形成率；裸鼠皮下接种１０６细胞检测致瘤性；用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）和ＰＣＲ检测ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７。结果表明：细胞ＤＮＡ合成和增殖指数（ＰＩｘ），ＳＨＥＥＣ１组（４５％）高于ＳＨＥＥ组（３４％）；高倍体细胞数，ＳＨＥ?

人乳头瘤病毒18型E6E7反义RNA表达重组体的构建

目的 为了探讨人乳头瘤病毒 (HPV)的致病机理和寻找由HPV所致疾病的治疗途径 ,研究了HPV1 8型E6E7反义RNA表达重组体的构建。方法 以HPV1 8型全基因质粒为模板 ,聚合酶链反应扩增出HPV 1 8型E6E7区 81 6bp片段 ,以逆转录病毒pLNSX为载体 ,构建HPV 1 8型E6E7逆转录病毒重组体 ,并以限制性内切酶酶切和Southern杂交分别鉴定插入方向和特异性检测。结果和结论 筛选出可表达HPV1 8型E6E7逆转录病毒重组体。该反义RNA表达重组体的构建为进一步研究E6E7基因的作用 ,以及探索是否能通过反义技术调控E6E7基因的表达打下基础。