女性外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的相关性

目的研究外阴病变及其与HPV16/18、HPV6的关系。方法收集西安交通大学医学院第二附属医院手术治疗的44例女性外阴病变患者的临床病理资料,包括鳞癌11例,鳞状上皮内瘤变(VIN)10例,尖锐湿疣9例及白色病变14例。采用免疫组化SP方法检测HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白的表达。结果①4组外阴病变患者年龄中位数依次为:外阴鳞癌61岁、VIN 45.5岁、尖锐湿疣24岁、外阴白色病44岁,尖锐湿疣组中位年龄低于外阴鳞癌组及白色病变组(P<0.05),其余各组间中位年龄无统计学差异。②HPV16/18E6蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组及外阴鳞癌组的阳性率分别为2/14、3/9、3/10、8/11,外阴鳞癌组高于白色病变组(P<0.05),其余各组间无统计学差异;HPV6L1蛋白在外阴白色病变组、尖锐湿疣组、VIN组、外阴鳞癌组的阳性率分别为1/14、8/9、4/10、3/11,尖锐湿疣组高于其他各外阴病变组(P<0.05),其余各组间比较差异无统计学意义。③HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白在早期外阴鳞癌的阳性率均高于中晚期(P<0.05);HPV16/18E6蛋白、HPV6L1蛋白表达均与外阴鳞癌的组织学分级、年龄分组、绝经情况、产次不相关(P>0.05);HPV16/18E6蛋白与HPV6L1蛋白在外阴鳞癌中的表达不相关(P>0.05)。结论外阴病变的发病与年龄及HPV16/18、HPV6感染有关;外阴鳞癌中HPV16/18、HPV6的感染率与FIGO分期有关,HPV16/18感染率与HPV6的感染率无关。

HPV6型E7在尖锐湿疣初发与复发组织中的表达

目的本研究旨在分析HPV6型早期蛋白E7在尖锐湿疣初发、复发与正常组织中的表达情况,以探讨早期蛋白E7在尖锐湿疣病情转归中的生物学意义。方法采用u ltrasensitiveTM s-p免疫组化法对56例初发尖锐湿疣患者的活检组织,35例复发尖锐湿疣患者的活检组织及27例正常宫颈上皮组织中的HPV6型E7蛋白的表达情况进行测定。结果56例初发尖锐湿疣患者HPV6型E7蛋白的阳性表达率为69.5%,35例复发性尖锐湿疣患者的活检组织中HPV6型E7蛋白的阳性表达率为71.4%,27例正常宫颈上皮组织中HPV6型E7蛋白的阳性表达率为0。尖锐湿疣患者初发与复发组织的HPV6型E7蛋白表达和正常宫颈上皮组织相比均有显著性差异(P<0.001)。结论HPV6型早期蛋白E7与尖锐湿疣的发生密切相关,在尖锐湿疣的发展中也起着重要的作用,与其复发存在一定的关系,但没有统计学意义。HPV6型早期蛋白E7与尖锐湿疣的病情转归的联系尚需进一步研究。

HPV6b L1蛋白在昆虫细胞中的表达及其作为特异性诊断抗原的初步研究

目的 :研究人乳头瘤病毒 6b结构蛋白 (HPV6bL1)在昆虫细胞系统的表达及其作为特异性诊断抗原的可行性 ,为HPV感染的血清学诊断及基因工程疫苗研究作准备。方法 :采用HPV6bL1重组杆状病毒感染sf 9昆虫细胞制备HPV6bL1,经氯化铯梯度离心纯化 ,Westernblot分析及电镜观察鉴定 ;用 1μg、5 μg和2 0 μg三种剂量免疫小鼠 ,以检测小鼠血清抗体反应 ;并用HPV6bL1作为诊断抗原检测HPV感染者 (尖锐湿疣及宫颈癌 )和健康对照者共 112例血清特异性抗体。结果 :HPV6bL1在昆虫细胞中得到表达 ,并可自行组装形成VLPs,且予 1μg剂量免疫小鼠就能产生阳性血清抗体反应 ,HPV6bL1VLPs特异性抗体对HPV6感染的敏感性和特异性分别为 78.6 %和 97.1%。结论 :HPV6bL1VLPs具较强的免疫原性和抗原性 ,血清中检测到的HPV6bL1抗体对HPV6感染具较高的特异性 ,可进一步用于HPV感染的血清学诊断及防治尖锐湿疣的基因工程疫苗研究。

外阴恶性肿瘤中P21^(WAF1/CIP1) P53及HPV6/11 HPV16/18的检测和意义

目的 探讨P2 1WAF1/CIP1,P5 3及HPV6/11,16/18与外阴恶性肿瘤的关系。方法 P2 1WAF1/CIP1,P5 3用免疫组化SP法检测 ;HPV6/11,16/18用原位杂交法 (ISH)检测。结果 P2 1WAF1/CIP1,P5 3在外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变 (VIN)组、正常对照组中的阳性检测率分别为 40 .0 0 % (12 /3 0 )、63 .3 3 % (19/3 0 ) ,5 2 .3 8% (11/2 1) ,47.62 % (10 /2 1) ,0 (0 /10 )和 0 (0 /10 ) ;外阴病变各组P2 1WAF1/CIP1,P5 3与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;HPV6/11、16/18在外阴恶性肿瘤组、VIN组中的阳性检测率分别为 60 .0 0 % (18/3 0 )和 3 3 .3 3 % (10 /3 0 ) ,42 .86% (9/2 1)和 2 8.5 7% (6/2 1) ,正常对照组没有检测出 ;HPV 6/11阳性率外阴恶性肿瘤组、VIN组与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;外阴恶性肿瘤组HPV16/18阳性率与正常组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 P2 1WAF1/CIP1P5

HPV611相关尖锐湿疣皮损中P53和P21蛋白的表达

目的 : 了解P5 3和P2 1在HPV6 11相关尖锐湿疣 (CA)皮损中的表达和意义。方法 : 用免疫组化SP法检测经PCR法证实HPVDNA6 11阳性的 2 7例CA皮损和 10例正常皮肤。结果 : (1)CA皮损基底细胞和棘细胞表达P5 3较正常皮肤显著增加 ;(2 )CA皮损棘细胞表达P2 1与正常皮肤无显著差异。结论 : (1)P5 3可能刺激和促进HPV6 11相关CA皮损的细胞增殖 ;(2 )P2

男性尖锐湿疣患者尿道黏膜HPV6/11型DNA的检测

目的探讨男性尖锐湿疣患者尿道黏膜人乳头瘤病毒6/11型的感染情况。方法采用PCR荧光法对43例男性尖锐湿疣患者疣体和尿道黏膜进行HPV6/11型核酸定性、定量检测。同时对20例健康男性的尿道黏膜进行检测。结果患者疣体处检出阳性例数为37例(86.05%),同时尿道黏膜检测阳性例数为27例(62.79%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);尖锐湿疣患者尿道黏膜的阳性率明显高于健康男性(5.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。针对患者HPV6/11型定量检测结果显示:疣体的病毒载量为(6.90×107)±(3.87×108),而且不同的患者虽然病程长短有区别,但病毒载量却无明显差异;尿道黏膜的病毒载量为(4.51×106)±(1.23×107),与疣体的病毒载量差异无统计学意义。结论男性尖锐湿疣患者的尿道黏膜存在着HPV6/11型的亚临床或隐性感染。

HPV6感染的尖锐湿疣患者血清抗体反应研究

目的 探讨我国HPV 6感染的尖锐湿疣患者血清抗体反应 ,以评价我国HPV感染的血清学诊断方法 ,并为疫苗研制提供理论依据。方法 采用重组杆状病毒 昆虫细胞系统制备HPV病毒样颗粒 ,通过ELISA法检测 3组共136份标本的血清抗体。结果 尖锐湿疣组血清抗体最高 (阳性率 75 .0 % ,OD平均值为 0 .111± 0 .0 94) ,较健康对照组(阳性率 2 .8% ,OD平均值 0 .0 12± 0 .0 2 4)和宫颈癌组 (阳性率 14 .3 % ,OD平均值 0 .0 2 9± 0 .0 2 2 )差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 尖锐湿疣患者体内可检测到型特异性抗体 ,尤以女性和复发患者为显著 ,HPV 11感染与HPV 6b血清抗体相关 ,提示HPV病毒样颗粒可用作HPV感染的血清学诊断。

加载HPV6E7抗原肽的HLA-A2单体及其四聚体的制备和鉴定

目的制备可生物素化的可溶性HLA-A2/HPV6E7单体,进一步组装成PE标记的可溶性HLA-A2/HPV6E7四聚体。方法以原核表达的sHLA-A2BSP为重链,β2m为轻链,与人工合成的HPV6E7(22-30)抗原肽(GLH-CYEQLV)利用稀释法进行共折叠复性得到单体。利用HLAI类分子单抗(W6/3)和抗Bzm抗体进行Westernblot和ELISA鉴定折叠产物的构象。以BirA酶对其进行生物素化,经过超滤离心后得到纯化的sHLA-A2/HPV6E7单体,再与Streptavidin-PE按4:1比例混合形成四聚体。结果该四聚体具有与HLA-A2阳性HPV6感染的CA患者的抗原特异性CTL结合活性。结论成功获得了天然构象的sHLA-A2/HPV6E7单体及PE标记的HLA-A2/HPV6E7四聚体。

HPV6/11、HPV16/18与HPVL1蛋白检测在男性阴茎乳头状增生性病变诊断中的应用

目的调查男性阴茎乳头状增生性病变患者的HPV6/11、HPV16/18和HPVL1蛋白表达情况,确定病理诊断应用依据。方法回顾性调查130例男性阴茎乳头状增生性病变患者,采用常规病理组织学方法、免疫组化和原位杂交技术检测男性阴茎乳头状增生性病变患者手术标本的HPV6/11、HPV16/18和HPVL1蛋白表达情况。结果 130例阴茎上皮乳头状增生性病变病例,尖锐湿疣、低级别上皮内病变、高级别上皮内病变和鳞癌分别占64.6%、16.9%、10.8%、7.7%。尖锐湿疣中HPV6/11、HPVL1蛋白表达阳性率为92.9%和97.6%,高于其他三组病变。低级别上皮内病变HPV16/18表达阳性率为81.8%,高于其他3组病变。结论对于HPVL1表达阴性的男性阴茎上皮乳头状增生性病变患者应该严格随访。

HPV6/11相关尖锐湿疣皮损中PCNA和Ki-67蛋白的表达

目的 :为了解增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigenPCNA)和细胞增殖相关核抗原Ki- 6 7在尖锐湿疣 (CA)皮损中的表达和意义。方法 :用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶免疫组化方法 (简称SP法 )检测经多聚酶联反应 (polymerasechainreactionPCR)证实人乳头瘤病毒 (HPV)DNA6 / 11阳性的 2 7例CA皮损和 10例正常皮肤。结果 :(1)CA皮损和正常皮肤均表达PCNA和Ki- 6 7。 (2 )CA皮损基底细胞和棘细胞表达PCNA和Ki- 6 7均显著高于正常皮肤。结论 :PCNA和Ki- 6 7只能反映CA皮损的增殖状态而不能反映其增殖性质。

HPV6/11原位杂交方法在尖锐湿疣诊断上应用

尖锐湿疣是由HtW6B／11型感染引起的一种性传播疾病，常规病理及临床诊断有一定困难，易与假性湿疣相混，而二者治疗方法不同。用原位杂交技术检测外阴湿疣组织中有无HPV感染可确诊，为临床诊断和治疗提供重要依据。原位分子杂交是近几年来在病理组织学领域兴起的又一新技术，由于它是在核酸分子水平上分析研究细胞的功能和形态，因而其准确性和特异性较其它手段优越，自1986年首次应用于常规石蜡包埋的组织切片上以来，已显示出巨大的发展潜力．尖锐湿疣近年来显著增多，研究表明它与人乳头瘤病毒（HPV）感染有关，特别是HPV6／11呈现高表达，仅凭HE切片形态难以进行判断．HPV原位分子杂交具有较高的敏感性和特异性。采用HPV6／11探针对尖锐湿疣样病变的石蜡切片进行原位分子杂交，现报道如下：

阴道炎患者HPV6/11-DNA定量分析

目的 了解女性阴道炎患者人乳头瘤病毒 6 / 11型 (HPV6 / 11)的感染情况。方法 荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)技术检测 2 5 8例门诊患者阴道分泌物中HPV6 / 11的病毒拷贝数。结果 共检出HPV6 / 11阳性者 94例 ,阳性率 36 .43 % ,拷贝数在 10 5以上者 78例 ,占阳性者中 82 .98% ,40岁以上年龄组阳性率高且病毒复制量均在10 5以上。结论 ①中老年阴道炎患者就诊晚 ,感染重。②FQ PCR检测HPV敏感、快速、准确 。

HPV6bL1短发夹shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的用pSilencer2.1质粒载体构建人类乳头瘤病毒6b型L1衣壳蛋白HPV6bL1短发夹shRNA质粒重组体,并进行序列分析,为探索尖锐湿疣基因抗体防治研究治疗的新途径打好基础。方法用DNA重组技术将针对人HPV6bL1基因的不同部位所设计的3对设计有小发夹结构的2对DNA序列。经退火成互补双链,再克隆至pSilencer2.1-U6 neo质粒载体中构建重组体,转化DH5а菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。结果成功构建了HPV6bL1shRNA质粒重组体。结论HPV6bL1 shRNA质粒重组体的成功构建为研究尖锐湿疣基因靶向抗体打下基础。

HPV6 E6和E7对人角质细胞系HaCaT生物学特性的影响

目的:确定HPV6 E6和E7感染对HaCaT细胞生物学的影响。方法:利用逆转录病毒载体pLXSN-HPV6-E6和pBabe-HPV6-E7,通过感染包装细胞PA317,制备病毒颗粒感染人HaCaT细胞并进行G418和嘌呤霉素筛选和鉴定。FCM检测细胞生长周期和凋亡变化情况。结果:与空载体对照相比,HPV6 E7感染的HaCaT细胞生长速度明显提高,S期细胞增多,G1期细胞减少(P<0.05);HPV6E6感染的HaCaT细胞生长速度和细胞周期无明显变化。HPV6 E6感染的HaCaT细胞凋亡出现抑制,而HPV6 E7感染的HaCaT细胞凋亡无明显差异。结论:HPV6 E7主要影响细胞的周期变化而HPV6 E6在抑制凋亡方面作用更大。

原位杂交Dig标记的HPV6B/11、16、18型DNA应用初探

原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｚａｔｉｏｎ，ＩＳＨ）技术是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组化结合起来，在组织细胞原位显示特定基因或病毒感染的ＤＮＡ或ｍＲＮＡ的表达、定位、半定量及变化规律的一种新兴技术。我们做的原位杂交Ｄｉｇ标记的ＨＰＶ...

江门地区尖锐湿疣患者HPV感染型别及HPV6基因多态性研究

目的：研究江门地区尖锐湿疣患者HPV感染型别及HPV6基因多态性。方法：选择本地区2011年6月-2012年6月尖锐湿疣（CA）患者86例，采用基因芯片对人乳头瘤病毒（HPV）感染型别进行检测，研究本地区HPV感染型别及HPV6基因多态性。结果：男性组阳性34例，占82．93％；女性组阳性37例，占82．22％。两组比较差异无显著性，无统计学意义P〉0．05。男性高危型9例，占21．95％；女性高危型15例，占33．33％；女性高危型构成比例明显高于男性，两种类型比较差异具有显著性，有统计学意义P〈0．05。有4个点位486、141、1203、1311点位基因呈多态性，17例出现突变，突变率为80．95％。结论：本地区的尖锐湿疣患者HPV感染型别以HPV6型感染为主，且本地基因存在多点位突变。

HPV6/11、P21^(WAF1)、PCNA蛋白在女性生殖道尖锐湿疣中的表达

目的探讨P21WAF1及PCNA蛋白在尖锐湿疣发病机制中的作用以及两者与尖锐湿疣(CA)中HPV6/11表达之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测60例尖锐湿疣皮损中P21WAF1和PCNA及HPV6/11蛋白的原位表达情况。结果CA组织中HPV6/11、P21WAF1、PCNA阳性表达率分别为80%、30%、88%,PCNA强阳性表达率为57%。CA组织中HPV6/11、P21WAF1阳性表达率及PCNA强阳性表达率与对照组相比有统计学差异;CA组中PCNA与P21WAF1表达负相关,PCNA与HPV6/11表达呈正相关,HPV与P21WAF1表达呈负相关。结论P21WAF1表达下调可能与CA的发病机制有关,并受多因素调控。