Reid阴道镜评分、HPV E6/E7 mRNA表达量在宫颈癌中的临床应用价值研究

目的研究Reid阴道镜评分(以下简称Reid评分)、高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)mRNA表达量与宫颈癌国际妇产科联盟(FIGO)分期、血清常规肿瘤标志物水平的相关性及对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。方法选取2021年3月至2022年5月在菏泽市立医院就诊的100例宫颈癌患者作为宫颈癌组,另选同期诊治的50例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者作为LSIL组,50例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者作为HSIL组。比较3组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清常规肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]水平;分析宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清常规肿瘤标志物水平及宫颈癌FIGO分期的相关性;根据宫颈癌组患者术后随访结果分为术后有淋巴结转移和无淋巴结转移,比较有无淋巴结转移患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平,分析Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。结果宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于HSIL组、LSIL组(P<0.05);HSIL组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于LSIL组(P<0.05)。宫颈癌患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清CA125、CEA水平均呈正相关(r=0.405~0.705,P<0.05)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期呈正相关(r=0.415、0.501,P<0.05)。宫颈癌组术后淋巴结转移患者的Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于无淋巴结转移的患者(P<0.001)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.756(95%CI:0.657~0.838)、0.760(95%CI:0.662~0.841)、0.803(95%CI:0.710~0.877)、0.768(95%CI:0.670~0.848)。将CA125、CEA联合检测作为常规预测方案,Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA联合检测作为新预测方案,常规预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI:0.724~0.889),新预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的AUC为0.955(95%CI:0.892~0.987),新预测方案预测的AUC明显大于常规预测方案(Z=1.981,P=0.045)。与常规预测方案比较,新预测方案的净重新分类指数为0.021(95%CI:0.015~0.039)、综合判别改善指数为0.046(95%CI:0.033~0.069),均P<0.05。结论Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期及血清CEA、CA125水平相关,且在预测宫颈癌术后淋巴结转移方面具有一定价值。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

2型糖尿病与柯萨奇B组病毒感染及IL-6、TNF-α的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与柯萨奇B组病毒感染关系,分析T2DM并柯萨奇B(CoxB)组病毒感染患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平意义。方法随机收集40例T2DM及38例健康对照组,检测CoxBIgM、CoxB中和抗体,测定IL-6、TNF-α、空腹胰岛素(FINS)、血糖(BG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),比较上述指标在糖尿病患者与正常人群之间、T2DM并柯萨奇B组病毒感染与无柯萨奇B组病毒感染的T2DM的差异,分析TNF-α、IL-6与胰岛素抵抗的关系。结果T2DM患者中CoxBIgM、CoxB中和抗体明显高于对照组;T2DM并CoxB感染患者BG、HOMA-IR、TNF-α、IL-6明显高于无CoxB感染的T2DM。结论CoxB感染在T2DM的发生发展有一定作用,可能与TNF-α、IL-6作用相关。

人乳头瘤病毒11型E6的原核表达

目的 构建、克隆人乳头瘤病毒 11型 (HPV11)E6蛋白基因 ,并进行表达、纯化和鉴定。方法 用PCR法 ,从尖锐湿疣 (CA)标本中扩增出HPV 11型E6蛋白基因 ,与 pET3 2a载体连接成重组表达质粒pET3 2a/E6;重组质粒转入BL2 1大肠杆菌 ,经诱导表达硫氧还蛋白E6融合蛋白 (Trx E6) ;该蛋白经 3SNTAResin纯化柱纯化 ,SDS PAGE和WesternBlotting检测鉴定。 结果 经酶切及序列分析鉴定 ,重组质粒 pET3 2a/E6成功构建 ,诱导后高表达Trx E6融合蛋白 ,WesternBlotting鉴定证实表达蛋白分子量为 3 60 0 0D的Trx E6融合蛋白。结论 获得高表达、高纯度的HPV11E6蛋白 ,为该蛋白的功能及免疫学分析及CA的疫苗研究打下了基础。

表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建

为研制HPV16的治疗性疫苗 ,首先将表达质粒 pJSA1175与非复制型痘苗病毒NTVJTK+ 进行同源重组 ,构建了痘苗重组病毒NTVJLac。再将表达质粒 pJSDME6E7R与NTVJLac进行同源重组 ,构建了表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7,并对获得的重组病毒进行了鉴定。Southern杂交显示 ,重组痘苗病毒NTVJmE6E7基因组中有E6和E7基因插入。该重组病毒在人源细胞中不复制。Westernblot显示 ,重组病毒在人源TK-14 3细胞中能表达E6和E7蛋白。

轮状病毒感染性脓毒症患儿中性粒细胞CD11b、白细胞介素-6、hs-CRP水平变化及其临床意义

目的探讨小儿轮状病毒感染性脓毒症中,中性粒细胞CD11b、IL-6、hs-CRP水平变化及其临床意义。方法分析我院自2009年10月至2012年1月收治的103例轮状病毒肠患儿。根据是否为脓毒症分为脓毒症组51例与非脓毒症组52例。分析比较脓毒症组与非脓毒症组腹泻持续时间、发热、血小板减少、受累脏器情况,以及中性粒细胞CD11b、白细胞介素-6、hs-CRP水平变化。比较轮状病毒肠炎肠外脏器损害患儿,脓毒症组与非脓毒症组的中性粒细胞CD11b、白细胞介素-6、hs-CRP水平变化。结果两组患者发热(5.1,4.7)、血小板减少[45.1%(423/52),13.4%(7/51)]、受累脏器情况比较[54.9%(28/52),32.7%(17/51)],在统计学上具有统计学意义(P<0.05,P<0.005)。脓毒症组与非脓毒症组CD11b(95.6%,80.2%)、IL-6(24.0,71.9)、hs-CRP(18.2,9.9)水平比较,在统计学上差异具有统计学意义(P<0.05)。毒症组与非脓毒症受累脏器患儿CD11b(98.9%,89.4%)、IL-6(33.1,78.7)、hs-CRP(18.4,11.9)水平,在统计学上差异具有统计学意义(P<0.05)。结果 RV肠炎合并脓毒症时发热持续时间长,血小板减少以及受累脏器增多,同时CD11b、IL-6、hs-CRP水平显著升高,可以作为预测脓毒症标准的指标,对指导临床有一定意义。

人乳头瘤病毒11型早期蛋白E6和E7基因的克隆及序列分析

目的:从尖锐湿疣(CA)标本中克隆出人乳头瘤病毒11型(HPV11)早期蛋白E6、E7基因,并进行序列测定及编码氨基酸序列分析,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研究奠定基础。方法:用PCR法,从CA标本中扩增出HPV11E6、E7基因,与载体pGEX-6P-1连接成重组质粒pGEX-6P-1E6、pGEX-6P-1E7,酶切鉴定及双脱氧法测序观察其变异状况。结果:克隆出HPV11早期蛋白E6、E7基因,成功构建重组质粒pGEX-6P-1E6、pGEX-6P-1E7。本研究克隆出的HPV11E7基因与GenBank标准株序列完全相同,E6基因有两个位点的变化。结论:本研究克隆出的HPV11E6、E7基因与标准株基本相同,这将为进一步研究E6、E7基因的表达、免疫活性及流行病学奠定基础。

结直肠癌HPV16型感染与核因子-κB活化的关系研究

目的 探讨结直肠癌HPV16型感染与核因子 κB(NF κB)活化的关系。方法 应用凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测 5 0例结直肠癌、30例结直肠腺瘤和 2 0例正常大肠组织核因子NF κBDNA结合活性 ,并用多聚酶链反应 (PCR)和southernblot检测HPV16型DNA。结果 结直肠癌、腺瘤分别与正常结直肠组织比较 ,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA阳性率均明显增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;结直肠癌和结直肠腺瘤比较 ,NF κBDNA结合活性和HPV16型DNA阳性率差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。HPV16型DNA阳性和阴性结直肠癌患者比较 ,NF κBDNA结合活性差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 NF KB活化参与HPV16型在结直肠癌的致癌过程。

男性尖锐湿疣患者疣体和手指人乳头瘤病毒6/11型DNA的检测

目的:确定男性尖锐湿疣患者疣体和手指人乳头瘤病毒6/11型的感染。方法:采用PCR荧光法对46例男性尖锐湿疣患者疣体和手指进行HPV6/11型核酸定性、定量检测,同时以20名无尖锐湿疣的男性手指作对照。结果:尖锐湿疣患者39例疣体(39/46=84.78%)阳性,手指25例(25/46=54.35%)阳性。无尖锐湿疣患者的手指仅2人阳性,差异有显著性意义(P<0.05)。HPV6/11型疣体病毒载量为6.60x10^7±3.77×10~8,病毒载量与病程长短无相关性;尖锐湿疣患者的手指病毒载量为5.72×10~3±1.75×10~4,低于疣体的病毒载量(P<0.05)。结论:男性尖锐湿疣患者的手指携带HPV6/11型,其在尖锐湿疣的传播意义有待研究。

抗病毒协定方治疗高危型HPV感染的临床疗效研究

目的观察抗病毒协定方治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染患者的临床疗效研究。方法选取2021年1月至2022年10月期间于南昌市生殖医院生殖门诊检查发现的宫颈高危型HPV感染的患者60例,随机数字表法分为观察组和对照组各30例。对照组使用重组人干扰素α-2b栓治疗3个疗程,观察组在对照组的基础上联合使用院内自拟方抗病毒协定方进行治疗,观察两组患者HPV感染的转阴、宫颈上皮细胞异常情况,比较两组患者的临床疗效。结果干预后,观察组全部转阴和部分转阴情况高于对照组,观察组治疗有效率为76.67%,高于对照组的50.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组宫颈上皮细胞异常率为3.33%,低于对照组的16.67%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论抗病毒协定方能提高宫颈高危型HPV感染的治疗效果,在一定程度上反映能延缓HPV感染的进展。

人乳头瘤病毒6b型晚期蛋白L_2免疫反应表位的确定

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）含有２个晚期开放读码框（ＯＲＦ），Ｌ＿２ＯＲＦ编码的蛋白具有型特异性。本研究用能表达产生完整ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的质粒ｐ６ｂＬ＿２ＮＸ，采取核酸外切酶Ⅲ定向连续次级克隆的方法，制备了一系列一端逐渐删切的ＤＮＡ片段，诱生一组从Ｃ端至Ｎ瑞依次减少的Ｌ＿２蛋白与相应血清作免疫印迹实验，最小的仍保持阳性反应的多肽即含有抗原表位，实验结果ＨＰＶ６ｂＬ＿２蛋白的核酸编码区位于５４８１－５５０６之间，其相应氨基酸序列是ＥＰＧＩＮＰＴＱ。

人乳头瘤病毒6b型早期蛋白E6和E7基因的克隆及表达

目的:从尖锐湿疣(CA)标本中克隆出人乳头瘤病毒6b型(HPV-6b)早期蛋白E6、E7基因,并进行序列分析比对及原核表达,为HPV感染的检测和基因工程疫苗研究奠定基础。方法:用PCR法,从CA标本中扩增HPV-6的E6、E7基因,构建pUCHPV-6E6、pUCHPV-6E7两个重组体,酶切鉴定及测序分析比对。经双酶切与表达载体pGEX-5X-1定向连接,构建pGEX-5X-l重组表达质粒,转入BL21大肠杆菌,IPTG诱导GST融合蛋白表达及Westernblot鉴定。结果:克隆出HPV-6b早期蛋白E6、E7基因,成功构建pUCmHPV-6bE6、pUCmHPV-6bE7重组质粒,克隆获得HPV-6bE6、E7基因与GenBank标准株序列完全相同,经双酶切定向克隆,成功构建重组表达质粒pGEX-5X-lHPV-6bE6和pGEX-5X-lHPV-6bE7,转入BL21大肠杆菌,高效表达GST融合蛋白。结论:本研究克隆出的HPV-6bE6、E7基因与标准株相同,HPV-6bE6、E7GST融合蛋白获得高效表达,为HPV-6bE6、E7基因表达产物的纯化、体外活性以及E6、E7为靶位的基因疫苗研究奠定基础。

HPV58型E6蛋白B细胞表位预测与分析

目的:预测分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)58型E6蛋白的B细胞线性表位及其结构。方法:从瑞士生物信息研究所提供的Swissprot蛋白质数据库中检索到E6蛋白序列,采用计算机辅助生物信息学软件进行分析,用Expasy服务器在线软件分析预测E6蛋白的理化性质、二级结构及三维空间结构,采用DNASTAR软件包中的protean软件进一步分析亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原性与极性等特性,再结合氨基酸抗原指数(AI)计算法算出平均AI,根据AI大小预测HPV58型E6蛋白的B细胞线性表位的可能肽段,并进行同源性匹配分析。结果:HPV58型E6蛋白的B细胞线性表位可能位于以下肽段位置:N端8~15(KPRTLHDL)、27~44(ELKCVECKKTLQRSEVYD)、108~127(RPLCPQEKKRHVDLNKRFHN)、141~147(RPRRRQT)肽段及其周围。同源性分析得出肽段27~44、141~147为可能的B细胞线性表位,为HPV58型E6蛋白B细胞表位的独特序列,肽段8~15与HPV33型E6蛋白同源性匹配为100%,108~127与HPV33型E6、HPV9型E6蛋白同源性匹配为100%。结论:27~44、141~147肽段为可能的HPV58型E6蛋白的B细胞优势表位。

成都市58650名妇女宫颈人乳头状瘤病毒HPV6/11,HPV16/18感染状况研究

人类乳头状瘤病毒（HPV）是一种小分子双链DNA病毒,对人皮肤、黏膜有高度亲嗜性。目前,已经鉴定出的HPV约有150种亚型,根据其致病性大小分为低危型和高危型。低危型HPV6和HPV11致尖锐湿疣最主要的基因型,尖锐湿疣治愈后容易复发,随着病程迁延,复发次数增多,尖锐湿疣患者也可能导致癌变;高危型中的HPV16、18在世界范围内始终是引起宫颈癌变的最重要的亚型。

携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20载体构建与表达研究

构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力。合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒。将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性。结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78μg/ml±0.30μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力。成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20。

宫颈人乳头病毒6与11型感染阴道镜检查的必要性探讨

目的探讨宫颈人乳头病毒(HPV)6、11型阳性,宫颈液基薄层细胞学(TCT)正常且无自觉症状女性进行阴道镜检查的必要性。方法选取2016年1月至2019年9月本院收治的172例HPV6、11型阳性,TCT检查正常且无自觉症状女性作为研究对象,均行妇科检查、阴道镜检查,记录并分析检查结果。结果妇科检查宫颈光滑116例,行阴道镜检查结果均为宫颈HPV6、11型潜伏感染;妇科检查宫颈单纯型糜烂样改变52例,行阴道镜检查、组织病理检查发现宫颈HPV6、11型宫颈潜伏感染9例(17.3%),亚临床感染24例(46.1%),临床感染(宫颈尖锐湿疣)19例(36.5%),妇科检查宫颈颗粒型糜烂样改变4例,行阴道镜检查、组织病理检查发现HPV6、11型临床感染(宫颈尖锐湿疣)4例(100.0%)。宫颈单纯型糜烂样改变病理结果异常明显高于宫颈光滑者,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈单纯型糜烂样改变的宫颈HPV临床感染及亚临床感染率与宫颈颗粒型糜烂样改变比较差异无统计学意义。结论HPV6、11型阳性,TCT正常,无自觉症状妇女,妇科检查宫颈光滑者可不转诊阴道镜;妇科检查宫颈有赘生物或有糜烂样改变者应转诊阴道镜,以发现肉眼难以识别的宫颈HPV6、11型临床感染(宫颈尖锐湿疣)及宫颈HPV6、11型亚临床感染,及时治疗宫颈HPV6、11型临床感染(宫颈尖锐湿疣)及亚临床感染,指导潜伏感染者使用避孕套,以防止性疾病传播。