HPV6bL1短发夹shRNA表达质粒的构建及鉴定

目的用pSilencer2.1质粒载体构建人类乳头瘤病毒6b型L1衣壳蛋白HPV6bL1短发夹shRNA质粒重组体,并进行序列分析,为探索尖锐湿疣基因抗体防治研究治疗的新途径打好基础。方法用DNA重组技术将针对人HPV6bL1基因的不同部位所设计的3对设计有小发夹结构的2对DNA序列。经退火成互补双链,再克隆至pSilencer2.1-U6 neo质粒载体中构建重组体,转化DH5а菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。结果成功构建了HPV6bL1shRNA质粒重组体。结论HPV6bL1 shRNA质粒重组体的成功构建为研究尖锐湿疣基因靶向抗体打下基础。

HPV6b L1蛋白在昆虫细胞中的表达及其作为特异性诊断抗原的初步研究

目的 :研究人乳头瘤病毒 6b结构蛋白 (HPV6bL1)在昆虫细胞系统的表达及其作为特异性诊断抗原的可行性 ,为HPV感染的血清学诊断及基因工程疫苗研究作准备。方法 :采用HPV6bL1重组杆状病毒感染sf 9昆虫细胞制备HPV6bL1,经氯化铯梯度离心纯化 ,Westernblot分析及电镜观察鉴定 ;用 1μg、5 μg和2 0 μg三种剂量免疫小鼠 ,以检测小鼠血清抗体反应 ;并用HPV6bL1作为诊断抗原检测HPV感染者 (尖锐湿疣及宫颈癌 )和健康对照者共 112例血清特异性抗体。结果 :HPV6bL1在昆虫细胞中得到表达 ,并可自行组装形成VLPs,且予 1μg剂量免疫小鼠就能产生阳性血清抗体反应 ,HPV6bL1VLPs特异性抗体对HPV6感染的敏感性和特异性分别为 78.6 %和 97.1%。结论 :HPV6bL1VLPs具较强的免疫原性和抗原性 ,血清中检测到的HPV6bL1抗体对HPV6感染具较高的特异性 ,可进一步用于HPV感染的血清学诊断及防治尖锐湿疣的基因工程疫苗研究。