转hrap基因马铃薯获得晚疫病抗性研究

马铃薯晚疫病(Phytopthora infestans)是制约马铃薯生产的主要病害之一。为了扩大马铃薯抗病基因源,提高栽培马铃薯的抗病能力,本试验利用根癌农杆菌介导的方法,将由harpinPss引起过敏反应的甜椒中分离出来的一种过敏反应促进蛋白hrap基因导入马铃薯品种"Burbank"中。结果表明,获得的转化植株经PCR检测其阳性率为61.15%;Southern杂交有53.85%的植株表现阳性;对转化材料进行RT-PCR检测结果,表明导入的hrap基因已整合到马铃薯DNA中;从转化植株中分离hrap基因与GenBank中的hrap cDNA(GenBank:AF168415)进行DNA测序结果比较,两者的相似度达99.3%。通过对转基因植株进行活体接种抗病性检测,转hrap基因的马铃薯获得了抗晚疫病(Phytopthora infestans)植株。

HRAP基因诱导型植物表达载体的构建及烟草转化

系统获得性抗性是植物抵御病菌侵染的一种独特的防御机制。HRAP基因是一种从甜胡椒中克隆的蛋白质激发子,可以有效引发植物系统性抗性。SAR8.2b基因是烟草系统获得性抗性信号传导途径中下游响应基因,受病原物和水杨酸诱导。本试验根据Genebank发布SAR8.2b基因的启动子序列,利用PCR技术,克隆了SAR8.2b基因的完整启动子,命名为SAR8.2bP,然后将SAR8.2bP构建到pUC18-HRAP载体中命名为pUC18-SAR8.2bP-HRAP,然后用SAR8.2bP-HRAP替换p2300-121载体中的35S启动子和GUS基因,重组子命名p2300-SAR8.2bP-HRAP。将构建的植物表达载体转化农杆菌GV3101,利用叶盘法转化烟草,通过PCR筛选,获得了转基因植株。为进一步验证转基因烟草的抗病效果奠定了基础。

过敏反应促进蛋白基因hrap转马铃薯的研究

利用根癌农杆菌介导法,将由甜椒中分离出的一种过敏反应促进蛋白hrap基因导入马铃薯品种"Russet Burbank"和"大西洋"中。转化再生植株经过含卡那霉素培养基的生根筛选、PCR检测、Southern杂交鉴定表明目的基因已导入马铃薯品种中,RT-PCR检测结果表明目的基因已整合到马铃薯DNA中并表达。通过对转基因植株进行活体接种抗病性检测,获得了抗晚疫病和抗青枯病的植株。

甜椒抗菌蛋白基因(harp)转化桉树的研究

用不同浓度的2,4-D与IAA对桉树叶盘进行了愈伤组织的诱导及植株再生的试验,建立了新的桉树再生体系.进一步用含甜椒抗菌基因(hrap)的农杆菌侵染桉树叶盘,发现侵染后对愈伤组织诱导率无明显影响,却抑制了桉树的植株再生.对再生苗的PCR和Sou thern杂交检测证实已将hrap基因已转入桉树植株的基因组中.