枸杞多糖对高糖环境下HRCEC增殖及VEGF表达的影响

目的观察不同浓度的枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对体外高糖环境下培养的人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)增殖及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法获取人眼球摘除术后的HRCEC,予以体外培养,选取最佳状态的3~4代细胞;CCK8法检测在不同浓度LBP体外高糖环境下分别作用12、24、36 h后HRCEC的增殖情况;Western blot法检测各组HRCEC的VEGF表达情况。结果同一时间组间比较,高糖组HRCEC活性及VEGF的表达量均高于低糖组(P<0.05);不同浓度LBP实验组HRCEC活性及VEGF表达量均明显低于高糖组(P<0.05),80μg/mL LBP组HRCEC活性及VEGF表达低于20μg/mL LBP实验组与40μg/mL LBP实验组(P<0.05);各实验组在干预36 h时,HRCEC活性及VEGF表达低于干预12 h与24 h(P<0.05)。结论LBP能抑制高糖环境下HRCEC的增殖并下调VEGF的表达,并与LBP浓度和作用时间正相关。

神经生长因子对人视网膜血管内皮细胞的影响

【目的】观察神经生长因子(NGF)及TrKa阻断剂K252a对体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响。【方法】MTT法检测不同因子(NGF各浓度组、NGF+K252a各浓度组、bFGF组、bFGF+K252a组和正常培养液组)对正常和缺氧条件下培养的HRCEC的影响。【结果】随NGF浓度增加(20、50、100ng/ml),HRCEC细胞数目明显增多(正常氧浓度NGF组分别为0.254±0.033、0.696±0.029、1.136±0.051;缺氧条件相应各组为0.422±0.036、0.798±0.044、1.376±0.052,P均<0.05)。随K252a浓度增加(50、100、200nmol/L),NGF+K252a组正常氧浓度时分别为0.864±0.067、0.496±0.025、0.202±0.078,缺氧条件时相应为1.042±0.047、0.700±0.065、0.401±0.078,较同浓度NGF(100ng/ml)组HRCEC细胞数目减少(P<0.05),随K252a浓度增加HRCEC细胞数目减少趋势愈加显著(P均<0.05)。【结论】NGF可促进HRCEC的增殖,该作用可被特异性TrkA阻断剂K252a所阻断。

基于PI3K/Akt通路探讨脉络宁注射液对早期糖尿病视网膜病变的作用

目的基于PI3K/Akt通路探讨脉络宁注射液对早期糖尿病视网膜病变(DR)的作用。方法将30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病脉络宁组,每组10只。除正常对照组外,各实验组大鼠均采用STZ腹腔注射诱导大鼠糖尿病模型。每天脉络宁组大鼠按照0.92 mL/kg剂量进行腹腔给药,为期12周,对照组给予等量生理盐水。给药结束后分离各组大鼠视网膜组织并检测视网膜组织中磷酸化Akt(p-Akt)、Akt总蛋白水平以及PI3K、Caspase3、Bcl-2的蛋白水平及mRNA水平。同时体外培养人视网膜内皮细胞(HRCEC),将细胞分为三组:正常对照组、高糖组、高糖脉络宁组。除正常对照组外,其余组均高糖(25 mmol/L)环境下培养,脉络宁组同时加入脉络宁注射液(0.8μg/mL),处理72 h检测各处理组细胞中的p-Akt的水平。结果体内实验中,与糖尿病组相比脉络宁组大鼠视网膜组织中p-Akt表达明显降低,PI3K及下游Bcl2、Caspase的蛋白表达量显示出与p-Akt相同的变化趋势。Real-time PCR检测发现PI3K及下游Bcl2、Caspase3基因表达情况与蛋白变化情况一致。体外实验中p-Akt的量在高糖组明显增加,脉络宁干预后下降。结论脉络宁注射液通过调控PI3K/Akt信号通路保护糖尿病视网膜细胞,改善糖尿病视网膜病变。

姜黄素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF和NF-κB p65表达的抑制作用

目的:观察不同浓度姜黄素对体外高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)、核因子-κB(NF-κB)p65表达的影响。方法:用高糖培养基模拟糖尿病环境建立HRCECs体外高糖模型,将培养的细胞分为:正常对照组、高糖对照组、高糖+20、40、80μmol/L姜黄素组,分别用CCK-8法检测姜黄素干预后HRCECs的增殖能力,用Western-blot及免疫细胞化学法检测VEGF、NF-κB p65的表达。结果:CCK-8法结果示:与正常对照组比较,高糖显著促进HRCECs增殖(P<0.01),各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较,细胞增殖均有明显抑制作用(P<0.01),且呈浓度与时间依赖性。Western-blot结果示:与正常对照组比较,高糖对照组中VEGF-A、NF-κB p65表达显著增加(P<0.01),各浓度姜黄素作用12、24、48h后与高糖对照组比较,VEGF-A、NF-κB p65的表达显著减少,且随着浓度增加、时间延长抑制作用增强,各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。免疫细胞化学法结果示:与正常对照组相比,高糖对照组VEGF表达显著增加(P<0.01),各浓度姜黄素干预24h后与高糖对照组比较,VEGF表达逐渐下降(P<0.01),各加药组间两两比较均有差异(P<0.01)。结论:姜黄素可呈浓度与时间依赖性地抑制高糖诱导的HRCECs增殖以及VEGF、NF-κB p65的表达,这种增殖抑制作用可能与其下调VEGF、NF-κB p65表达有关。