基于HRM技术开发水稻糊化温度基因ALK功能标记

【目的】糊化温度是影响稻米蒸煮食味品质的重要指标,ALK是控制水稻糊化温度的主效基因,开发可快速高通量鉴定ALK基因型的功能标记有助于提高水稻品质改良的效率。【方法】根据ALK基因4198位、4329位和4330位存在的单碱基差异,设计基于HRM技术检测的基因功能标记。【结果】通过PCR检测结合测序分析,筛选了ALK基因2个功能区域的功能标记ALKH4、ALKH5。利用ALKH4、ALKH5对81份籼稻品种、279份粳稻品种进行了ALK基因型检测,结果发现,16份粳稻和19份籼稻为G-GC基因型;51份粳稻为A-GC基因型;212份粳稻和62份籼稻为G-TT基因型。【结论】基于HRM技术开发的基因功能标记ALKH4、ALKH5可以快速高通量鉴定控制糊化温度ALK不同基因型,具有重要的应用价值。

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS技术结合化学计量学方法的不同干燥处理杜仲叶成分分析

采用基于液质联用的非靶向代谢组学技术结合化学计量学数据自动解析软件AntDAS-LCHRMS分析了4种不同干燥处理(冻干、热泵烘干、电热烘干、晒干)杜仲叶样本中的化合物。杜仲叶样本数据由超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS)分别在正、负离子模式下进行采集,经AntDAS-LCHRMS软件解析,共鉴定出71种差异性化合物,经标准品验证确定40种化合物,包括环烯醚萜类、有机酸类、黄酮类、氨基酸类、核苷类、维生素类等9类物质。其中,正、负离子模式下均可识别并验证的化合物有车叶草苷、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、车叶草苷酸、京尼平苷等25种化合物。层次聚类分析(HCA)及主成分分析(PCA)结果均显示,相同处理的杜仲叶样本各自聚成一类,不同处理的杜仲叶样本可明显区分。热图分析进一步揭示了不同干燥处理杜仲叶样本中差异性化合物的含量变化。晒干处理样本中苯丙氨酸及色氨酸等氨基酸类物质的水平较高;冻干及热泵烘干处理样本中有机酸类、环烯醚萜类、糖类等含量较高;电热烘干样本中核苷类、黄酮类物质的含量较高;黄酮类物质在冻干、热泵烘干及晒干样本中差异较小。研究结果为不同干燥处理杜仲叶的成分分析、品质评价及其开发应用提供了科学依据,也可为其他复杂药用植物体系的化学成分分析提供参考。

基于UHPLC-Orbitrap HRMS的盐酸二甲双胍及其片剂中N-亚硝基二甲胺的测定

建立了测定盐酸二甲双胍及其片剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Orbitrap HRMS)。采用Waters XSelect CSH C18色谱柱(150 mm×3.0 mm,2.5μm),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液为流动相,梯度洗脱;大气压化学电离源(APCI),正离子模式,产物离子扫描。结果显示NDMA在1~100 ng/mL范围内线性关系良好,检测限和定量限分别为0.3 ng/mL和0.9 ng/mL,原料药和片剂的平均加标回收率分别为101.4%和98.5%。本方法专属性好、灵敏度和准确度高,适用于盐酸二甲双胍及其片剂中痕量遗传毒性杂质NDMA的检查与控制。

平台化HRM对组织适应性绩效的影响研究——有调节的双中介模型

基于动态能力理论,借鉴双元观理念,遵循“资源组合—动态能力—组织绩效”的研究范式,构建有调节的双中介模型。经分析可以发现:平台化HRM正向影响组织适应性绩效;技能柔性能力(技能延展性/技能多样性)在平台化HRM与组织适应性绩效之间起到双重中介作用;前瞻性战略正向调节平台化HRM与技能柔性能力(技能延展性/技能多样性)的关系,即存在有调节的双中介效应。

高职院校HRM数字化育人举措探析

在数字化时代,数字化人才已经成为企业数字化转型的关键因素,对企业高质量发展产生重要影响。文章在分析数字化人才分类、培养高职院校HRM数字化人才存在的问题的基础上,提出高职院校HRM数字化人才培养的针对性策略:制订HRM数字化人才培养目标,构建数字化人才培养课程体系;注重加强学生数字化思维的培养,提高学生的数字化素养;搭建信息化教学平台;打造跨学科数字化师资队伍;开发高质量的数字化教学资源;建设良好的数字化校外实训教学基地。以期为我国数字化人才培养提供一些新思路、新举措。

UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物

目的建立UHPLC Q-Exactive Plus Orbitrap HRMS法鉴定隔山消提取物在功能性消化不良大鼠体内代谢产物。方法建立功能性消化不良大鼠模型。分析采用Hypersi 1 GOLD C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。结果共鉴定出4种原型成分(白首乌二苯酮、去酰基萝藦苷元、青阳参苷元、丁香酸)及其110种代谢产物,其中粪便、尿液共有代谢产物12种,尿液特有代谢产物56种,粪便特有代谢产物42种。原型成分代谢途径包括Ⅰ相代谢(氧化、还原等)、Ⅱ相代谢(硫酸化、葡萄糖醛酸化等)及Ⅰ相、Ⅱ相复合反应。结论该方法高效全面,可为进一步寻找隔山消潜在活性代谢产物奠定基础。

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS代谢组学和16S rRNA基因测序探讨骨疏丹补肾机制

目的 整合代谢组学和肠道微生物组学的研究策略探讨骨疏丹(Gushudan, GSD)预防氢化可的松诱导的肾阳虚证(kidney-yang deficiency syndrome, KYDS)大鼠的补肾作用机制。方法 分别采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)的非靶向代谢组学和16S rRNA基因测序分析的肠道微生物组学方法,分析正常对照组、肾阳虚证模型组、骨疏丹给药组和阳性对照组大鼠粪便代谢物谱与肠道菌群组成,采用Pearson相关分析探讨内源性差异代谢物与差异菌群之间的相关性。结果 基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS的代谢组学方法在正负离子模式下共发现骨疏丹参与调控肾阳虚症的22种差异代谢物,如色氨酸、鹅去氧胆酸、肌酐和油酸酰胺等,主要涉及氨基酸代谢、胆汁酸代谢、能量代谢和脂质代谢。基于16S rRNA测序分析发现骨疏丹在属水平显著上调普雷沃氏菌(Prevotellaceae)的相对丰度(P<0.05),显著下调颤杆菌(Oscillibacter)的相对丰度(P<0.05)。相关性分析结果表明甘胆酸和鹅去氧胆酸与在属水平显著改变的普雷沃氏菌(Prevotellaceae)显著正相关(P<0.05),而与考拉杆菌(Phascolarctobacterium)显著负相关(P<0.05)。二十二碳六烯酸与毛螺菌(Lachnospiraceae)显著负相关(P<0.05)。结论 骨疏丹通过良性调节内源性代谢和肠道菌群结构发挥补肾作用,为中药通过肠-肾轴治疗疾病提供新的思路和方法。

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS结合网络药理学探讨半夏泻心汤入血成分及治疗脾虚型溃疡性结肠炎的作用机制

研究通过建立脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,采用液相芯片对大鼠血清中炎性细胞因子进行高通量检测,同时以HE染色对结肠组织进行炎症分级评分,验证半夏泻心汤(Banxia Xiexin Tang,BXT)对脾虚型UC的药理作用。随后利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)对BXT入血成分进行分析,并结合网络药理学,探究BXT治疗脾虚型UC的作用机制。结果显示,UC能够增加大鼠血清中细胞因子白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平;BXT可降低血清炎性细胞因子含量,且BXT高剂量组(20 g/kg)下降最明显,无明显炎细胞浸润,表明BXT对脾虚型UC具有一定的治疗作用。大鼠血清中发现入血成分共20个;网络药理学筛选出BXT治疗UC相关靶点87个,涉及炎症反应、炎症反应调节、微生物反应等生物过程,参与了IL-17、脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、TNF等信号通路。综上可知,BXT治疗脾虚型UC可能与抑制肠道炎症、调节肠道微生物及保护肠道屏障等多个途径相关,从而达到治疗UC效果。

浅谈HRM立式磨在锂云母焙烧料粉磨系统的应用

随着新能源汽车、储能电站的迅速发展,对碳酸锂的需求也在不断增长。通过分析锂云母焙烧粉磨流程和锂云母焙烧料的易磨性,碳酸锂生产线中锂云母焙烧粉磨环节可由HRM立式磨进行粉磨。根据锂云母焙烧料的粉磨细度要求,对粉磨系统工艺进行设计选型。通过新型选粉结构、合理粉磨结构的设计,可以对粉磨细度进行控制。经实际细度测试,研制的锂云母焙烧料粉磨系统满足GB/T11075-2013碳酸锂生产的需求。笔者开展的工作为HRM立磨在碳酸锂制备等更多新兴领域的应用提供了有益的参考。

大口径音箱的表现应该怎样?也许它就是答案 聆听Ocean Way大洋路HRM-X参考级监听音箱系统

去年,美国监听音箱品牌Ocean Way(大洋路)发布全新的HRM-X音箱系统,并且在3月份的“2023广州国际音响唱片展”上进行全球首展。在展会之后,以这对大音箱为首组建的音响系统被一些发烧友评为“全场表现最好的系统之一”,不少音响媒体也给予好评。不过,如此好评的音箱,那次笔者居然错过了,虽无法亲身聆听,但我相信,发烧友和媒体的耳朵都是可信的,HRM-X至少不差,至于它有多好,我不可能说得上来,还得听了再说。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的白术内酯I在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物,并探讨其可能的代谢途径。方法SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后,收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量,鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果共鉴定出大鼠体内代谢产物30个,其中血浆样品中5个,尿液样品中17个,粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径,为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考,此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的制川乌-白芍药对化学成分研究

目的:研究制川乌-白芍配伍前后的成分差异。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,对制川乌-白芍药对及其单味药定性分析。使用Thermo Scientific AccucoreTMC18色谱柱(100 mm×3 mm, 2.6μm)分离样品,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,通过Mass Range的正、负离子监测模式、全扫描及自动触发二级质谱扫描功能,对制川乌-白芍药对及其各饮片的水煎液快速分析;利用目标化合物的二级碎片离子信息对比mzVault、mzCloud数据库和对照品及相关文献报道的化合物质谱信息。结果:制川乌-白芍药对供试品共检测到184个化合物,其中56个可能为配伍后新生成的化合物,包含生物碱类化合物8个、黄酮类化合物9个、酚酸类化合物15个、苯丙素类化合物8个、其他类化合物16个。结论:该研究发现川乌配伍白芍后可产生新的化合物,为进一步研究制川乌-白芍药对的药效物质提供参考。

基于UPLC-Q-TOF HRMS技术建立逍遥丸指纹图谱及化学成分鉴定

目的建立逍遥丸的UPLC-Q-TOF HRMS指纹图谱并对其主要化学成分进行分析鉴定。方法制备12批逍遥丸醇提物样品,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(3.0 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),进样量为2μL。利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件计算12批次逍遥丸样品指纹图谱相似度,评价不同批次样品间的质量差异,并对UPLC-Q-TOF HRMS技术采集的分子离子峰信息进行分析,通过化合物的精确相对分子质量、保留时间、质谱碎片信息以及对照品比对,分析逍遥丸中主要化学成分。结果建立12批逍遥丸LC-MS指纹图谱的共有模式,各共有峰间分离度好,12批逍遥丸指纹图谱相似度均在0.982以上,说明不同批次制备工艺较为稳定。采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定了逍遥丸指纹图谱的35个共有峰的化学成分,并指认了11个成分,其中包括芍药内酯苷、芍药苷、绿原酸等。结论该方法的精密度、准确度、稳定性和重复性良好,建立的LC-MS指纹图谱为逍遥丸进一步质量控制和药效物质基础研究提供理论依据。

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS法比较不同炮制方法下山楂化学成分差异

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,鉴定山楂经3种不同炮制方法后的化学成分差异。方法:色谱采用Thermo Scientific Accucore TM C 18色谱柱(100 mm×3 mm,2.6μm),0.1%甲酸-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)流动相,进行梯度洗脱;质谱采用ESI源,+/-离子模式扫描,扫描模式为Full MS/dd-MS2。利用Compound Discover 3.2软件分析数据,根据一级质谱质荷比、二级质谱碎片等信息,鉴定样品化学成分。结果:在炒山楂、焦山楂、山楂炭中共鉴定了49个化学成分,包括黄酮类、有机酸类、三萜酸类、苯丙素类、及其他类成分等。其中共有9种黄酮类成分、8种有机酸类、3种苯丙素类成分化学成分的含量发生了明显变化,表现为炒山楂>焦山楂>山楂炭。结论:利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS法可全面、精确的测定炒山楂、焦山楂、山楂炭中的化学成分差异,进一步为山楂不同方法炮制品功效变化物质基础的确定提供了参考依据。

木芙蓉叶乙酸乙酯部位抗氧化与抗炎作用研究及UPLC-Q-Orbitrap HRMS分析

研究木芙蓉叶乙酸乙酯部位的抗氧化与抗炎作用,并对其化学成分进行分析鉴定。采用CCK-8法测定木芙蓉叶不同极性部位对细胞存活率的影响,木芙蓉叶不同极性部位浓度为25~200μg/mL,对HaCaT细胞和RAW 264.7细胞无毒性。利用H 2 O 2诱导HaCaT细胞氧化应激反应,发现木芙蓉叶乙酸乙酯部位能最显著降低细胞内ROS含量(P<0.001);采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立炎症模型,通过实时荧光定量PCR检测发现木芙蓉叶乙酸乙酯部位能抑制TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2炎症因子的表达,从细胞水平发现木芙蓉叶乙酸乙酯部位具有良好的体外抗氧化和抗炎作用。运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)对乙酸乙酯部位的化学成分进行快速的分析,鉴定出28个化学成分:10个黄酮类、9个有机酸类、2个香豆素类、2个酚类、2个核苷类及3个其他类成分,黄酮类成分和有机酸类成分是其中主要化学成分,为其主要的活性物质基础,为进一步研究木芙蓉叶的药效物质基础以及开发利用提供了一定的理论基础。

基于PCR-HRM的水稻氮高效基因NRT1.1B功能标记开发及应用

水稻对氮肥的高效与合理利用是发展绿色农业的重要保障。培育含有氮高效基因的水稻品种,是提高氮肥利用率最经济有效的途径。本研究开发了一个用于HRM(高分辨率熔解曲线)高通量检测硝酸盐转运蛋白基因NRT1.1B的分子功能标记。利用此标记对78份山东地方水稻品种进行NRT1.1B基因分型,发现有13个水稻品种为含有NRT1.1B的高效单倍型,表明NRT1.1B在山东省水稻品种中分布较少。利用测序分析验证,测序结果与本标记分型结果一致。可见,本研究开发的功能标记能够快速准确鉴定出NRT1.1B基因型,可为筛选和培育氮高效水稻新品种提供有力的技术支撑。

UPLC-Q/Orbitrap HRMS测定口服液中6种西地那非衍生物的不确定度分析

为了保证高分辨质谱法测定壮阳类口服液中西地那非类似物的结果准确性和可靠性,对测定结果进行不确定度评定是十分必要的。本研究采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q/Orbitrap HRMS)测定口服液保健食品中6种西地那非衍生物的含量,依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,建立数学模型,进行测量不确定度评定。当口服液中N-去甲基西地那非、去甲基硫代西地那非、二甲基西地那非、羟基硫代豪莫西地那非、硫代豪莫西地那非、硫代西地那非的含量为0.90、1.04、1.22、2.01、1.51、1.14 mg/kg时,扩展不确定度分别为0.07、0.09、0.10、0.16、0.13、0.09 mg/kg(k=2)。评定结果表明,不确定度主要来自UPLC-Q/Orbitrap HRMS仪器、标准溶液配制、回收率和随机效应。

巢式PCR-HRM法在点突变模式小鼠基因分型中的应用

目的利用巢式PCR结合高分辨率熔解曲线(HRM)技术,改进点突变模式小鼠的基因分型方法。方法以ob/ob鼠和db/db鼠为样本,剪小鼠脚趾编号并提取基因组DNA。根据突变位点参考序列设计巢式PCR引物并进行两轮扩增后,对产物进行HRM分析,获得基因分型结果。同时,通过PCR-SBT法和PCR-RFLP法对分型结果的准确性进行验证。结果对80只ob/ob鼠和65只db/db鼠进行了检测,巢式PCR-HRM法能够准确地分辨出3种基因型。在ob/ob鼠中,鉴定得到的纯合子、杂合子和野生型分别为21、47和12只。而在db/db鼠中,纯合子、杂合子和野生型分别为23、33和9只。巢式PCR-HRM法的分型结果与PCR-SBT法和PCR-RFLP法的结果高度一致,且分型结果与小鼠表型一致。结论建立的巢式PCR-HRM法是一种快速、简便、准确度高的基因分型方案,适用于大批量点突变模式小鼠的基因分型鉴定。

高技能人才培养与日本HRM系统耦合

日本制造业的竞争优势在于高技能人才培养与HRM(人力资源管理)系统的耦合。“心智技能”(intellectual skills)是高技能人才培养的关键所在,与HRM系统下所产生的工作激励形成耦合关系。从SHRM(战略人力资源管理)的视角,日本制造业的“生产运营”战略和“集团力学”的组织特性,以及HRM系统间的耦合,存在着外在和内在的整合性,从而培养了大批生产现场的高技能人才。HRM系统的耦合,出现了“蓝领阶层白领化”现象。第四次工业革命开启的新时代,论证日本制造业高技能人才培养的理论与HRM的实践经验,给中国制造业的发展提供一定的借鉴与启示。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS整合网络药理学探讨三仁汤治疗新型冠状病毒肺炎的潜在作用机制

目的通过UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术明确经典名方三仁汤中的主要化学成分,并通过网络药理学进一步探讨其治疗新型冠状病毒肺炎的作用机制。方法根据UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术得到的二级质谱裂解碎片信息,对三仁汤进行分析鉴定。在PubChem数据库中下载质谱定性分析出的化合物的2D结构,导入Swiss ADME平台进行初步筛选,并借助Swiss Target Prediction数据库寻找三仁汤潜在作用靶点。通过Gene Cards数据库检索与新型冠状病毒肺炎(Corona virus disease 2019,COVID-19)相关的疾病靶点。使用Draw Venn Diagram网站,获取三仁汤和COVID-19共同作用的靶点。使用STRING数据库构建共同靶点互作网络(PPI),Cytoscape 3.7.2软件构建三仁汤“中药-活性成分-靶点-疾病”网络图。最后通过Metascape平台对三仁汤治疗COVID-19相关靶点进行KEGG和GO富集分析。结果通过质谱法从三仁汤8味中药中鉴定了37种化学成分。进一步筛选出22个活性成分,将三仁汤的533个潜在作用靶点与COVID-19的482个COVID-19靶点基因的靶点进行交集,得到了58个共同靶点,其中出现频次较高的有AVEGFA、EGFR、IL-6、AKT1、JUN、ICAM1等。通过GO富集分析得到了551条(P<0.05)信号通路,KEGG富集分析得到了118条(P<0.05)信号通路,其基因数目在与炎症反应及肺损伤保护相关的多条通路上富集较多,与冠状病毒、SARS-CoV-2、人巨细胞病毒、甲型流感、乙型肝炎病毒感染相关。结论本研究基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术对三仁汤的成分进行系统分析,能够充分表征三仁汤的药效物质;三仁汤可通过多靶点、多通路达到对新型冠状病毒肺炎的治疗作用。