化瘀明目方含药血清对高糖诱导的HRMECs功能紊乱模型血管形成的作用及机制研究

目的探究化瘀明目方含药血清对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(Human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs)血管形成的影响及可能机制。方法CCK-8法筛选合适的糖浓度和含药血清体积分数,建立单纯高糖因素诱导的HRMECs功能紊乱模型。将HRMECs分为6组,正常对照组予以正常ECM培养基(含5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)+10%空白血清;甘露醇对照组、模型组在正常对照组基础上分别加入19.5 mmol·L^(-1)甘露醇、19.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖;化瘀明目方低、中、高剂量组在模型组基础上分别加入10%低、中、高剂量含药血清(不加空白血清)。克隆实验检测细胞集落形成数,Transwell实验检测细胞迁移数,管腔形成实验检测细胞成管数,免疫荧光实验、Western Blot实验和RT-PCR实验检测第八因子(FactorⅧ)、血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)、细胞分化因子(CD34)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白及mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组能够促进HRMECs集落形成(P<0.01)、细胞迁移(P<0.01)、管腔形成(P<0.01),FactorⅧ、CD31、CD34、VEGFA、VEGFR2蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,化瘀明目方低、中、高剂量含药血清抑制HRMECs集落形成(P<0.05,P<0.01)、细胞迁移(P<0.01)、管腔形成(P<0.05,P<0.01),FactorⅧ、CD31、CD34、VEGFA、VEGFR2蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);正常对照组与甘露醇对照组间各项检测的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论化瘀明目方含药血清能够抑制高糖诱导下HRMECs细胞的增殖、迁移和管腔形成,预防或减轻血管新生,其机制可能与调控VEGFA/VEGFR2信号通路有关。

新的HRMECS谱仪数据分析处理工具

介绍了一个新的中子飞行时间斩波器谱仪HRMECS的数据处理工具JavaCAP。JavaCAP充分利用了Java语言的平台独立性和因特网适用性两个独特的优点 ,以及面向对象的编程手段 ,克服了原有FORTRAN版的局限性 ,重新开发了一系列新的功能。目前 ,JavaCAP已纳入ISAW (integratedspectralanalysisworkbench)中 ,成为ISAW第一个具有数据处理功能的工具软件包。

阿帕替尼对HRMEC增殖、迁移、管腔形成的影响及其分子机制的研究

阿帕替尼具有抑制多种肿瘤新生血管内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的作用,但是其对视网膜内皮细胞的增殖、迁移、管腔形成尚未有研究。目的:探讨阿帕替尼对HRMEC的增殖、迁移、管腔形成的影响及其分子机制。方法:体外培养HRMEC,实验分组:对照组,rhVEGF诱导组,rhVEGF +5μM阿帕替尼组,rhVEGF +1μM阿帕替尼组,分别予以上述不同的干预后,分别检测各组细胞的增殖、迁移及管腔形成情况;Western blotting验证阿帕替尼对细胞中VEGFR2、p-VEGFR2及MAPKs信号通路表达水平的影响。

LncRNA-XIST/miR-137/Notch1在糖尿病视网膜病变患者血清和玻璃体中的表达及机制

目的探讨lncRNA-XIST在糖尿病视网膜病变患者血清和玻璃体中的表达及其机制。方法收集糖尿病视网膜病变患者,同时检测血清和玻璃体中lncRNA-XIST和miR-137的表达量。运用高糖诱导的HRMECs作为体外模型。运用PCR、Western blot、CCK-8、ELISA和荧光素酶报告检查lncRNA-XIST对糖尿病视网膜病变的机制。结果血清和玻璃体中lncRNA-XIST表达量被抑制,miR-137表达量被激活,差异均有统计学意义(P<0.05)。激活lncRNA-XIST能够促进视网膜细胞增殖,减少ROS和MDA的水平,增加GSH、GSH-PX和SOD水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-137+lncRNA-XIST减少荧光素酶表达量,miR-137是LncRNA-XIST重要靶点。激活miR-137能够抑制视网膜细胞增殖,提高了ROS和MDA的水平,减少GSH、GSH-PX和SOD水平,差异均有统计学意义。miR-137+Notch1减少荧光素酶表达量,Notch1是miR-137重要靶点。结论lncRNA-XIST/miR-137/Notch1通过ROS及其氧化应激,能够阻止糖尿病视网膜病变,提示lncRNA-XIST可作为预测糖尿病视网膜病变的良好分子标志物。

人参皂苷RG1调控丙酮酸激酶M2影响视网膜毛细血管内皮细胞糖酵解和血管形成

目的探讨人参皂苷Rg1(GRg1)通过调控丙酮酸激酶M2(PKM2)的表达对人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)糖酵解的影响。方法在体外培养HRMECs,将其分为对照组(NC)组、高葡萄糖(HG)组、HG+人参皂苷Rg1(HG+GRg1)组、HG+人参皂苷Rg1+低表达PKM2(HG+GRg1+si-PKM2)组、HG+人参皂苷Rg1+过表达PKM2(HG+GRg1+OE-PKM2)组,si-PKM2、OE-PKM2通过细胞转染方式转染至HRMECs中。采用qRT-PCR法检测HRMECs中PKM2 mRNA的表达情况;通过Western blot检测HRMECs中相关蛋白表达量;在倒置显微镜下观察细胞体外管腔生成数量,以量化血管形成能力;收集各组细胞培养液,分别用葡萄糖检测试剂盒、乳酸检测试剂盒和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)检测试剂盒检测葡萄糖摄取量、乳酸产量以及ATP含量。结果HG诱导会显著增加HRMECs的血管形成数量、糖酵解及PKM2的表达,而在加入GRg1处理后,HG所致的血管数量、糖酵解及PKM2的表达均明显减少;转染si-PKM2可协助GRg1对糖酵解和血管形成的抑制作用,而转染OE-PKM2会干扰GRg1的功能。结论GRg1通过抑制PKM2减少HRMECs糖酵解抑制血管形成。

Synthesis of taurine-fluorescein conjugate and evaluation of its retina-targeted efficiency in vitro

In this work, retinal penetration of fluorescein was achieved in vitro by covalent attachment of taurine to fluorescein, yielding the F-Tau conjugate. Nuclear magnetic resonance (NMR) and high resolution mass spectrometry (HRMS) were used to confirm the successful synthesis of F-Tau. The cellular uptake of F-Tau in adult retinal pigment epithelial cells (ARPE-19) and human retinal microvascular endothelial cells (hRMECs) was visualized via confocal scanning microscopy. The results indicated an improvement of solubility and a reduction of logP of F-Tau compared with fluorescein. As compared with fluorescein, F-Tau showed little toxicity, and was retained longer by cells in uptake experiments. F-Tau also displayed higher transepithelial permeabilities than fluorescein in ARPE-19 and hRMECs monolayer cells (Po0.05). These results showed that taurine may be a useful ligand for targeting small-molecule hydrophobic pharmaceuticals into the retina.