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一种新的高灵敏的HRP-TMB成色法(TMB-ST)
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作者 顾耀铭 陈以慈 叶鹿鸣 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 1989年第3期67-67,共1页
辣根过氧化物酶(HRP)法是目前神经解剖学中应用最广泛的技术之一。现有HRP成色法中最灵敏的Mesulam的TMB法(′78,′80)仍存在超微结构保存差、产物不稳定、非特异性沉淀多等问题,根据对HRP-TMB反应的酶促动力学、稳定剂的作用以及组织... 辣根过氧化物酶(HRP)法是目前神经解剖学中应用最广泛的技术之一。现有HRP成色法中最灵敏的Mesulam的TMB法(′78,′80)仍存在超微结构保存差、产物不稳定、非特异性沉淀多等问题,根据对HRP-TMB反应的酶促动力学、稳定剂的作用以及组织化学方面的研究,我们首次提出了一种用钨酸纳(Sodium Tungstate,ST) 展开更多
关键词 沉淀多 hrp-tmb TMB-ST 超微结构 神经解剖学 过氧化物酶 色法 Sodium 辣根 钨酸钠
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钨酸钠做为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅰ、光镜研究 被引量:39
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作者 顾耀铭 陈以慈 叶鹿鸣 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期121-127,共7页
本文通过试管实验和在尾核—黑质投射模型上的比较研究,首次提出了一种以钨酸钠作为稳定剂的新的TMB成色法(TMB-ST法)用于HRP神经束路追踪术。与现确灵敏度最高的Mesulam的TMB法相比,TMB-ST法具有灵敏度更高,产物稳定,耐酒精、耐pH小于... 本文通过试管实验和在尾核—黑质投射模型上的比较研究,首次提出了一种以钨酸钠作为稳定剂的新的TMB成色法(TMB-ST法)用于HRP神经束路追踪术。与现确灵敏度最高的Mesulam的TMB法相比,TMB-ST法具有灵敏度更高,产物稳定,耐酒精、耐pH小于6.3的环境,无针状结晶和点状结晶,标记结构形态细腻,组织切片不皱缩等优点。此外,本文还对稳定剂在HRP-TMB组化反应中的作用作了较全面的讨论。 展开更多
关键词 HRP TMB 稳定剂 钨酸钠
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钨酸钠作为稳定剂的新的高灵敏HRP-TMB法——Ⅱ、电镜研究 被引量:17
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作者 顾耀铭 陈以慈 叶鹿鸣 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期124-129,共6页
本文研究了各种不同锇化步骤对TMB-ST反应产物的影响。结果发现:TMB-ST法结合DAB-Co后处理步骤用于电镜束路追踪时,具有反应产物电子密度很高,呈特征性的细杆状,组织超微结构保存良好的特点,且灵敏度较高。而未后处理的TMB-ST产物锇化... 本文研究了各种不同锇化步骤对TMB-ST反应产物的影响。结果发现:TMB-ST法结合DAB-Co后处理步骤用于电镜束路追踪时,具有反应产物电子密度很高,呈特征性的细杆状,组织超微结构保存良好的特点,且灵敏度较高。而未后处理的TMB-ST产物锇化后大多数只具有中等电子密度。此外,通过对以硝普钠、钼酸铵、柠檬酸镍离子络合物、钨酸钠作为稳定剂的各种TMB法的比较,我们首次提出了稳定剂是影响TMB产物电子密度的最重要因素的观点。 展开更多
关键词 HRP TMB 稳定剂 钨酸钠
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ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究 被引量:13
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作者 李红梅 陈佳 +2 位作者 徐斐 曹慧 Maria Eugenia 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期126-130,共5页
通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为... 通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。 展开更多
关键词 酶联免疫测定 显色 辣根过氧化物酶 TMB
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HRP—TMB反应中醋酸缓冲液的pH值与反应敏感性、组织超微结构保存的关系 被引量:2
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作者 张建华 李惠民 李继硕 《神经解剖学杂志》 CAS 1987年第1期118-122,147,共6页
为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过用不同pH值的醋缓配的反应液(pH3.3,4.0,4.2,4.4,4.6,4.8,5.2,5.6)后,在光镜及电镜下观察了下橄榄... 为了探索HRP—TMB电镜技术中既能保持TMB反应敏感性高的优点又可较好地保存组织超微结构象,本文将WGA—HRP注入大白鼠红核及其周围,通过用不同pH值的醋缓配的反应液(pH3.3,4.0,4.2,4.4,4.6,4.8,5.2,5.6)后,在光镜及电镜下观察了下橄榄核区标记终末的密度及组织超微结构像。生现醋缓pH为4.0及3.3时,标记终末密度相似,或4.0时多于3.3,但4.0的组织像较3.3者有明显的改善。当pH值进一步提高时,尽管电镜下组织像逐渐改善,但标记的密度却逐步下降,至5.6时,几无阳性标记。另外,pH4.0的材料中,TMB反应产物变小,其跨膜现象也较3.3者少见。故作者认为,选用pH值为4.0的醋缓液较为合适。 展开更多
关键词 HRP—TMB反应 PH值 超微结构
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间接酶联免疫吸附试验显色系统主要影响因素的探讨 被引量:3
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作者 李俚 张连彦 +1 位作者 高明春 王君伟 《中国兽药杂志》 2008年第6期43-46,共4页
酶联免疫吸附试验(ELISA)易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺(TMB)显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的... 酶联免疫吸附试验(ELISA)易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺(TMB)显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的显色系统参量的方法,应用该方法为确定适用于任一特定ELISA的显色系统以及建立稳定的ELISA体系奠定了基础。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验 过氧化脲 四甲基联苯胺 辣根过氧化物酶
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共振光散射测定辣根过氧化物酶
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作者 李正平 王磊 +1 位作者 高瑞广 刘秀贤 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第2期173-176,共4页
辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法.探讨了酸度、TMB浓度、H2O2浓度、温度等对散射信号的影响.在最佳实验条件下测定HRP... 辣根过氧化物酶(HRP)催化H2O2氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法.探讨了酸度、TMB浓度、H2O2浓度、温度等对散射信号的影响.在最佳实验条件下测定HRP的线性范围为1×10^-7~1×10^-6g/L,最低检出限1.8×10^-8g/L. 展开更多
关键词 辣根过氧化物酶 四甲基联苯胺 共振光散射
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正交试验优化ELISA检测中TMB/HRP显色体系的研究 被引量:2
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作者 桑延霞 周天鸿 +5 位作者 陈英 邱美兰 蒋德旗 王从峰 冉艳红 李弘剑 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期60-63,共4页
目的:建立ELISA显色体系的优化方法,优化TMB/HPR显色系统的反应参数。方法:首先采用单因素试验,研究显色体系中的缓冲溶液pH、TMB浓度、H2O2浓度、反应时间和温度对显色的影响,在此基础上,再进行5因素4水平的正交试验。结果:TMB/HRP体... 目的:建立ELISA显色体系的优化方法,优化TMB/HPR显色系统的反应参数。方法:首先采用单因素试验,研究显色体系中的缓冲溶液pH、TMB浓度、H2O2浓度、反应时间和温度对显色的影响,在此基础上,再进行5因素4水平的正交试验。结果:TMB/HRP体系的最佳工作条件:缓冲液pH为5.0,TMB浓度为2.5mg/ml,H2O2浓度为0.03%(V/V),反应温度为30~50℃,反应时间为10min。结论:优化的TMB/HRP最佳反应条件,可以满足一般反应的要求,所建立的TMB/HRP体系的优化方法也适用于其它ELISA显色系统的优化。 展开更多
关键词 ELISA 正交试验 TMB HRP
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基于葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶催化体系的葡萄糖SERS定量分析研究 被引量:3
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作者 于治 赵冰 丛茜 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第S1期311-312,共2页
葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase,GOx)是生物体系以及葡萄糖检测中常用的方法,其中葡萄糖氧化酶可以专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢(H2O2)。葡萄糖氧化酶内部的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)则是其主要的活性成分,在葡萄糖的催化... 葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase,GOx)是生物体系以及葡萄糖检测中常用的方法,其中葡萄糖氧化酶可以专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢(H2O2)。葡萄糖氧化酶内部的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)则是其主要的活性成分,在葡萄糖的催化氧化过程中起着电子传递的作用。传统的葡萄糖氧化酶法主要是通过借助辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)/TMB显色体系完成对葡萄糖的定量分析,即葡萄糖氧化酶可以特异地催化氧化葡萄糖,产生H2O2。在H2O2存在的体系中,辣根过氧化物酶可以将底物分子四甲基联苯胺(TMB)催化氧化。表面增强拉曼光谱(surface-enhanced Raman scattering,SERS)是一种超灵敏检测手段并且被广泛应用于生物检测中[1]。经研究发现,TMB分子具有很高的SERS活性,并且TMB分子经过催化反应之后,其SERS光谱发生明显的增强,我们以此实现葡萄糖的定量分析研究。 展开更多
关键词 SERS 四甲基联苯胺 葡萄糖氧化酶 辣根过氧化物酶 定量分析
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鸡脑干下行投射至脊髓的神经元分布 被引量:1
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作者 孙吉林 毛金标 郑则慧 《神经解剖学杂志》 CAS 1986年第2期183-187,268,共6页
本文采用在鸡脊髓颈段注射HRP或埋HRP胶块,然后用TMB处理的方法,对中枢神经系统中下行纤维至脊髓的神经元分布进行了研究。观察到鸟类动物存在着一些与哺乳类动物卡相似的神经联系。在间脑部分,下丘脑室旁核大细胞(PVM)是标记细胞较密... 本文采用在鸡脊髓颈段注射HRP或埋HRP胶块,然后用TMB处理的方法,对中枢神经系统中下行纤维至脊髓的神经元分布进行了研究。观察到鸟类动物存在着一些与哺乳类动物卡相似的神经联系。在间脑部分,下丘脑室旁核大细胞(PVM)是标记细胞较密集的区域,其他还有下丘脑的外细胞层(SE)和内细胞展(SI)以及下丘脑外侧区。中枢内的标记细胞主要集中于红核、中介核和丘间核(ICo)。在延、桥脑段,网状脊髓束是主要的下行通路,脑桥吻端网状核(RPO)和脑桥尾侧网状核(RP)向脊髓的投射相当于哺乳类动物的内侧网状下行系统。小细胞网状核(Rpc)、旁巨细胞网状核等都有下行至脊髓的纤维。另外,蓝斑、蓝斑下核、前庭核、孤束核、外楔核也都有下行纤维向脊髓投射。在中缝核群中我们观察到大量的标记细胞,所以在鸟类动物中可能也存在着中缝核—脊髓这一下行抑制系统。 展开更多
关键词 HRP法 脑干下行至脊髓通路
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神经束路电镜追踪中影响HRP-TMB反应产物因素的分析
11
作者 俞发荣 蔡景霞 +2 位作者 俞发宏 徐林 彭沿平 《Zoological Research》 CAS CSCD 1995年第2期153-160,共8页
采用HRp-TMB-ST法,对小鼠延髓下橄榄核下端外侧网状核细胞的HRP-TMB反应产物影响因素分析表明:(1)较高的pH值(7.0以上)是反应产物消失的关键因素;0.2mol/LPB,pH5.0—6.0对HRP-T... 采用HRp-TMB-ST法,对小鼠延髓下橄榄核下端外侧网状核细胞的HRP-TMB反应产物影响因素分析表明:(1)较高的pH值(7.0以上)是反应产物消失的关键因素;0.2mol/LPB,pH5.0—6.0对HRP-TMB反应灵敏度、反应产物的稳定性及组织超微结构的保存是适宜的;当pH值相同时,缓冲液浓度不同,反应产物消失的程度和速度也不相同。(2)酒精有稳定反应产物的作用。(3)反应前的预浸、灌注液的成分、浓度和固定时间等则与反应产物的丢失无关。此外,用pH5.5和pH7.0的缓冲液处理的切片经DAB强化、锇化后,组织的超微结构无明显的差异。 展开更多
关键词 HRP TMB 酒精 酸碱度 神经束路 电镜追踪
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辣根过氧化物酶标记技术的赝象 被引量:1
12
作者 王学斌 刘凤莲 李东风 《生物技术》 CAS CSCD 1998年第4期17-20,共4页
辣根过氧化物酶是目前研究神经生物学的重要工具之一,但利用它进行神经联系的追踪时,常会出现由于血液成分、血管内皮细胞、杂质、非特异性沉着物以及内源性过氧化物酶等造成的假象。本文报道了这些假象及其形成原因,并提出了相应的... 辣根过氧化物酶是目前研究神经生物学的重要工具之一,但利用它进行神经联系的追踪时,常会出现由于血液成分、血管内皮细胞、杂质、非特异性沉着物以及内源性过氧化物酶等造成的假象。本文报道了这些假象及其形成原因,并提出了相应的辨认方法,为正确区分外源性HRP所得到的结果提供了一定的形态依据。 展开更多
关键词 HRP标记技术 TMB法 赝象 识别
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ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化及稳定性研究 被引量:1
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作者 刘凤银 卢嘉辉 +4 位作者 巫嘉琦 黄燕璇 邹红丽 梁岳 穆洪涛 《广东第二师范学院学报》 2020年第3期75-82,共8页
为建立ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化方法,开发一种灵敏度高、性能稳定的HRP/TMB显色液,实验采用单因素试验,考察了pH、TMB质量浓度、过氧化脲质量浓度、DMSO体积分数、甘油体积分数和显色时间对显色效果的影响;采用L9(34)正交实验... 为建立ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化方法,开发一种灵敏度高、性能稳定的HRP/TMB显色液,实验采用单因素试验,考察了pH、TMB质量浓度、过氧化脲质量浓度、DMSO体积分数、甘油体积分数和显色时间对显色效果的影响;采用L9(34)正交实验,进行了工作条件优化;最后,对自制的显色液进行了贮藏稳定性研究,并与3种商品化同类产品进行了质量对比.结果显示:HRP/TMB显色体系的最佳工作条件为pH 5.0,TMB质量浓度0.4 g/L,过氧化脲质量浓度0.4 g/L,DMSO体积分数2%,甘油体积分数5%,显色时间10 min;4℃储藏90 d,稳定性良好;与商品化产品对比,自制显色液的灵敏度较高,显色时间较短,但稳定性较差.实验提供了一种HRP/TMB显色体系的优化方法及显色液配方,能满足大部分实验室ELISA研究需求,但其稳定性尚不能达到商品化产品需求,需进一步研究. 展开更多
关键词 四甲基联苯胺 酶联免疫吸附测定 显色液 辣根过氧化物酶
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A novel efficient medium for chromogenic catalysis of tetramethylbenzidine with horseradish peroxidase
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作者 Meng Li Xiang-Rong Huang +2 位作者 Yi Guo Ya-Zhuo Shang Hong-Lai Liu 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期1453-1459,共7页
The traditional surfactant sodium dodecyl sulfate(SDS) and ionic liquid 1-ethyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate([Emim][BF4]) have been combined to create a novel efficient medium for chromogenic catalysis of... The traditional surfactant sodium dodecyl sulfate(SDS) and ionic liquid 1-ethyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate([Emim][BF4]) have been combined to create a novel efficient medium for chromogenic catalysis of 3,30,5,50-tetramethylbenzidine with horseradish peroxidase in presence of H2O2. The results have shown the [Emim][BF4] in the mediums can promote the rate of formation of the blue chromogen,the SDS is responsible for the stabilization of the blue chromogen due to the electrostatic attraction between positively charged blue chromogen and the negatively charged surfactant. The SDS/[Emim][BF4]combination not only enhance catalytic activity of HRP remarkably but also stabilize the blue chromogen formed in the HRP oxidation of the substrate TMB compared to the conventional medium. Based on the superior combination of SDS and [Emim][BF4], the colorimetric assay for detecting HRP activity and H2O2 concentration was established. This work demonstrates a novel efficient medium for chromogenic catalysis with potential applications in biosensors and clinical diagnosis. 展开更多
关键词 TMB HRP Chromogenic catalysis Colorimetric assay Ionic liquid SDS
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