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产HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化
被引量:
4
1
作者
孔静静
王长城
+4 位作者
杨海麟
张玲
周利苹
金坚
王武
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2009年第5期25-28,共4页
为提高重组毕赤酵母生产人血清白蛋白-C肽融合蛋白(HSA-CP)的产量和生产强度,在摇瓶条件下考察了甲醇诱导时间和浓度对目的蛋白产量的影响。结果表明,质量浓度10 g/L的甲醇诱导72 h最适于产物表达。通过对7L发酵罐中各因素的优化,得到...
为提高重组毕赤酵母生产人血清白蛋白-C肽融合蛋白(HSA-CP)的产量和生产强度,在摇瓶条件下考察了甲醇诱导时间和浓度对目的蛋白产量的影响。结果表明,质量浓度10 g/L的甲醇诱导72 h最适于产物表达。通过对7L发酵罐中各因素的优化,得到最佳条件为:初始甘油质量浓度10 g/L,30℃培养,菌体生长期和诱导期的pH及溶氧分别控制在pH5.0、30%溶解O2或pH6.0、15%的溶解O2。10 g/L的甲醇诱导72 h,最终使干细胞质量浓度达到56.43 g/L,目的蛋白产量达368.45 mg/L。生产强度为3.920 mg/(L.h),目标蛋白的比生产速率为5.12 mg/(L.h)。
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关键词
hsa
—CP
融合
蛋白
巴斯德毕赤酵母
发酵优化
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职称材料
检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立
被引量:
2
2
作者
王秋实
刘运龙
+3 位作者
张玉民
陈知航
钱爱东
程远国
《生物技术通讯》
CAS
2013年第5期685-690,共6页
目的:为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度,建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法:采用双抗体夹心ELISA方法,以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹...
目的:为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度,建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法:采用双抗体夹心ELISA方法,以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹心抗原、anti-HSA-Biotin为检测抗体,用Streptavidin-HRP进行免疫放大,TMB显色。结果:建立了检测HSA-GLP-1融合蛋白的ELISA方法,其线性范围为15.6~1000 ng/mL,最低检测限为15.6 ng/mL,与GLP-1、HSA、IL2-HSA均无交叉反应,板内和板间精密度均小于15%,准确度为±15%,冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论:建立的HSA-GLP-1蛋白检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于HSA-GLP-1融合蛋白在临床前药代动力学试验的定量检测。
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关键词
双抗体夹心ELISA
hsa
—GLP-1
融合
蛋白
药代动力学检测
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职称材料
利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装
3
作者
邵妤
曲国龙
+6 位作者
金晶
王微
谭俊杰
阚乃鹏
李玉霞
刘刚
陈惠鹏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期59-64,共6页
目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载...
目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载体,运用BglBrick方法,实现了不同数目Exendin-4分子在HSA的不同末端的快速组装。将构建出的10种HSA/Exendin-4融合蛋白,转入毕赤酵母菌KM71H中,用甲醇诱导目的蛋白的表达。结果:用BglBrick方法构建的HSA/Exendin-4融合蛋白在毕赤酵母中都成功诱导表达出相应的目的蛋白。结论:利用BglBrick方法能够实现HSA长效融合蛋白的快速组装。
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关键词
BglBrick
EXENDIN-4
hsa融合蛋白
合成生物学
原文传递
毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究
被引量:
2
4
作者
戚楠
张艳红
+1 位作者
吴军
马清钧
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期37-46,共10页
目的:为了延长人生长激素(HGH)在血浆中的半衰期,构建了高效分泌表达人血清白蛋白(HSA)与HGH融合蛋白(HSA-HGH)的工程毕赤酵母菌株。方法:从人胎肝cDNA文库中扩增HSA基因,从HGH工程菌载体中扩增HGH基因,将其克隆至真核表达载体pHIL-D2,...
目的:为了延长人生长激素(HGH)在血浆中的半衰期,构建了高效分泌表达人血清白蛋白(HSA)与HGH融合蛋白(HSA-HGH)的工程毕赤酵母菌株。方法:从人胎肝cDNA文库中扩增HSA基因,从HGH工程菌载体中扩增HGH基因,将其克隆至真核表达载体pHIL-D2,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过原位双层膜法筛选高效分泌表达菌株。分别采用SDS-PAGE和Western印迹鉴定融合蛋白。对工程酵母培养条件进行研究,发酵液经离子交换层析、亲和层析和分子筛层析纯化。纯化的蛋白经N端序列测定,分子量测定和等电聚焦电泳进行鉴定。冻干的蛋白制剂经食蟹猴试验进行药代动力学和药效动力学测试。结果:确立了工程酵母的最佳培养工艺,融合蛋白表达量达100mg/L。纯化后蛋白纯度达95%以上,得率达42%。融合蛋白与预期结果一致,经食蟹猴试验,显示有良好的生物活性,与等摩尔剂量的重组人生长激素相比,半衰期延长6.8倍,清除率慢44倍。结论:融合蛋白呈现明显的长效动力学特征,为开发重组长效人生长激素HSA-HGH融合蛋白药物(rHSA-HGH)奠定了基础。
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关键词
HGH
hsa融合蛋白
半衰期
毕赤酵母
原文传递
题名
产HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化
被引量:
4
1
作者
孔静静
王长城
杨海麟
张玲
周利苹
金坚
王武
机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2009年第5期25-28,共4页
基金
国家高新技术研究发展计划(863计划)资助项目(2006AA02Z153)
文摘
为提高重组毕赤酵母生产人血清白蛋白-C肽融合蛋白(HSA-CP)的产量和生产强度,在摇瓶条件下考察了甲醇诱导时间和浓度对目的蛋白产量的影响。结果表明,质量浓度10 g/L的甲醇诱导72 h最适于产物表达。通过对7L发酵罐中各因素的优化,得到最佳条件为:初始甘油质量浓度10 g/L,30℃培养,菌体生长期和诱导期的pH及溶氧分别控制在pH5.0、30%溶解O2或pH6.0、15%的溶解O2。10 g/L的甲醇诱导72 h,最终使干细胞质量浓度达到56.43 g/L,目的蛋白产量达368.45 mg/L。生产强度为3.920 mg/(L.h),目标蛋白的比生产速率为5.12 mg/(L.h)。
关键词
hsa
—CP
融合
蛋白
巴斯德毕赤酵母
发酵优化
Keywords
hsa
-CP fusionprotein
Pichia pastoris
fermentation optimization
分类号
Q814.4 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立
被引量:
2
2
作者
王秋实
刘运龙
张玉民
陈知航
钱爱东
程远国
机构
吉林农业大学
军事医学科学院微生物流行病研究所
延边大学
出处
《生物技术通讯》
CAS
2013年第5期685-690,共6页
文摘
目的:为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度,建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法:采用双抗体夹心ELISA方法,以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹心抗原、anti-HSA-Biotin为检测抗体,用Streptavidin-HRP进行免疫放大,TMB显色。结果:建立了检测HSA-GLP-1融合蛋白的ELISA方法,其线性范围为15.6~1000 ng/mL,最低检测限为15.6 ng/mL,与GLP-1、HSA、IL2-HSA均无交叉反应,板内和板间精密度均小于15%,准确度为±15%,冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论:建立的HSA-GLP-1蛋白检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于HSA-GLP-1融合蛋白在临床前药代动力学试验的定量检测。
关键词
双抗体夹心ELISA
hsa
—GLP-1
融合
蛋白
药代动力学检测
Keywords
double antibody sandwich ELISA
hsa
-GLP-1 fusion protein
pharmacokinetics
分类号
Q502 [生物学—生物化学]
R392.1 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装
3
作者
邵妤
曲国龙
金晶
王微
谭俊杰
阚乃鹏
李玉霞
刘刚
陈惠鹏
机构
安徽大学生命科学学院
军事医学科学院生物工程研究所
沈阳药科大学
吉林大学
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期59-64,共6页
基金
"十二五"重大新药创制国家科技重大专项资助项目(2012ZX09301003)
文摘
目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载体,运用BglBrick方法,实现了不同数目Exendin-4分子在HSA的不同末端的快速组装。将构建出的10种HSA/Exendin-4融合蛋白,转入毕赤酵母菌KM71H中,用甲醇诱导目的蛋白的表达。结果:用BglBrick方法构建的HSA/Exendin-4融合蛋白在毕赤酵母中都成功诱导表达出相应的目的蛋白。结论:利用BglBrick方法能够实现HSA长效融合蛋白的快速组装。
关键词
BglBrick
EXENDIN-4
hsa融合蛋白
合成生物学
Keywords
BglBrick Exendin4
hsa
fusion protein Synthetic biology
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究
被引量:
2
4
作者
戚楠
张艳红
吴军
马清钧
机构
安徽医科大学基础医学院
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期37-46,共10页
文摘
目的:为了延长人生长激素(HGH)在血浆中的半衰期,构建了高效分泌表达人血清白蛋白(HSA)与HGH融合蛋白(HSA-HGH)的工程毕赤酵母菌株。方法:从人胎肝cDNA文库中扩增HSA基因,从HGH工程菌载体中扩增HGH基因,将其克隆至真核表达载体pHIL-D2,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过原位双层膜法筛选高效分泌表达菌株。分别采用SDS-PAGE和Western印迹鉴定融合蛋白。对工程酵母培养条件进行研究,发酵液经离子交换层析、亲和层析和分子筛层析纯化。纯化的蛋白经N端序列测定,分子量测定和等电聚焦电泳进行鉴定。冻干的蛋白制剂经食蟹猴试验进行药代动力学和药效动力学测试。结果:确立了工程酵母的最佳培养工艺,融合蛋白表达量达100mg/L。纯化后蛋白纯度达95%以上,得率达42%。融合蛋白与预期结果一致,经食蟹猴试验,显示有良好的生物活性,与等摩尔剂量的重组人生长激素相比,半衰期延长6.8倍,清除率慢44倍。结论:融合蛋白呈现明显的长效动力学特征,为开发重组长效人生长激素HSA-HGH融合蛋白药物(rHSA-HGH)奠定了基础。
关键词
HGH
hsa融合蛋白
半衰期
毕赤酵母
Keywords
hsa
HGH Fusion protein Half-life Pichia pastoris
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
产HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化
孔静静
王长城
杨海麟
张玲
周利苹
金坚
王武
《生物加工过程》
CAS
CSCD
2009
4
下载PDF
职称材料
2
检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立
王秋实
刘运龙
张玉民
陈知航
钱爱东
程远国
《生物技术通讯》
CAS
2013
2
下载PDF
职称材料
3
利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装
邵妤
曲国龙
金晶
王微
谭俊杰
阚乃鹏
李玉霞
刘刚
陈惠鹏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
原文传递
4
毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究
戚楠
张艳红
吴军
马清钧
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
原文传递
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