黄芪多糖对HSC-T6细胞增殖及胶原产生的影响

目的 :研究黄芪多糖 (APS)对体外HSC T6细胞增殖和胶原合成的影响。方法 :采用血清刺激大鼠肝星状细胞 (HSC T6 ) ,用 [3 H] TdR和 [3 H] Proline掺入法分别检测其增殖和胶原合成的活性。结果 :低浓度APS可明显降低由血清刺激的HSC T6细胞的增殖和胶原合成的活性。高浓度APS (≥80mg·L-1)可明显促进HSC T6细胞增殖。结论 :低浓度APS对HSC T6细胞的增殖和胶原合成的活性有抑制作用 ,且APS对HSC T6细胞增殖有双向调节作用。

三甲益肝颗粒含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的影响

目的观察三甲益肝颗粒(San Jia Yi Gan granula,SJG)含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的作用,探讨SJG抗肝纤维化的细胞学基础。方法雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为5组,每组6只,分别为生理盐水对照组(Control)、水飞蓟宾组(Sily)、低剂量SJG组(SJG-L)、中剂量SJG组(SJG-M)和高剂量SJG组(SJG-H)。SJG按低、中、高(1.7、3.4、6.8g/kg)3个剂量灌胃大鼠制备含药血清,并用不同体积分数(5%、10%、20%、40%)SJG含药血清干预HSC-T6细胞株,用倒置相差显微镜观察HSC-T6细胞形态学的变化,MTT法检测SJG药物血清对HSC-T6细胞增殖的影响,流式细胞仪检测SJG药物血清诱导HSC-T6细胞早期凋亡。结果含药血清干预后,细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞明显减少,细胞间隙较宽,细胞皱缩,核染色质浓集呈球形。MTT实验结果显示各组药物血清均可抑制HSC-T6细胞的增殖,SJG-M、SJG-H组对HSC-T6细胞增殖的抑制均显著高于Sily组(P<0.05),SJG-L组与Sily组对HSC-T6细胞增殖的抑制无显著差异(P>0.05)。SJG-M、SJG-H组凋亡率分别为(7.09±1.04)%、(11.63±1.53)%,显著高于Sily组[(4.38±1.07)%]、SJG-L组[(4.17±0.30)%]和对照组[(1.74±0.11)%]。与对照组比较,各药物血清干预组细胞凋亡数明显增加,以SJG-H组增加最为明显。结论SJG含药血清可显著抑制HSC-T6细胞的活化、增殖,并诱导其凋亡。

川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的抑制作用

目的观察活血化瘀中药的有效成份川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖的作用。方法经传代培养,绘制肝星状细胞HSC-T6的细胞生长曲线,并计算其细胞群体倍增时间和克隆形成率等基本的细胞生物学参数;应用MTT比色法测定HSC-T6细胞增殖及评价药物对细胞增殖的作用。结果HSC-T6细胞成活率较高,细胞在指数增殖期的细胞群体倍增时间为10.57h,克隆形成率为82.4%。川芎嗪在10-9～10-4mol/L浓度范围之内,抑制HSC细胞增殖作用呈剂量依赖性,与对照组相比均具有显著性差异(P<0.05)。苦参碱在10-8～10-4mol/L浓度范围之内,抑制HSC细胞增殖作用呈剂量依赖性,与对照组相比均具有显著性差异(P<0.05)。结论川芎嗪和苦参碱对HSC-T6细胞增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性。

赤芍水提物对肝星状细胞株HSC-T6促凋亡作用的实验研究

目的应用流式细胞法,研究灌服赤芍水提物后的犬血清对乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6细胞的促凋亡作用。方法采用乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6作为体外研究模型,以赤芍水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后1h、2h、3h、5h血清作为实验药物血清。以流式细胞法(flow cytometry)分别检测以上采血时间点上2%浓度的药物血清对乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6作用72h后的促凋亡作用。结果2h、3h两个时间点的含药血清能明显促进HSC-T6细胞的凋亡,其中2h2%含药血清的促凋亡率5.71%,3h2%含药血清的促凋亡率5.73%。和同样条件下用空白血清培养的HSC-T6细胞相比其凋亡比例显著性增加(均为P<0.05)。在药物血清的作用下两个时点组的HSC-T6细胞在G0/G1期细胞比例明显上升(P<0.05);而S期细胞显著减少(P<0.05);但G2/M期并没有一致性的变化。结论两个时点的药物血清对HSC-T6细胞都有显著的促凋亡作用,且能显著增加HSC-T6细胞在G0/G1期的比例及显著降低S期的比例,这可能是其抑制HSC-T6细胞增殖及促凋亡的原因之一。

清肝活血方对肝星状细胞TGF-β1表达及细胞内信号传递的影响

目的:研究清肝活血方抗肝纤维化疗效及其机理。方法:以不同浓度清肝活血方含药血清干预HSC-T6细胞株,RT-PCR法检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达,免疫细胞化学法检测TGF-β1蛋白的表达。结果:清肝活血方含药血清能抑制HSC-T6细胞株的增殖,下调TGF-β1、Smad3mRNA的表达以及TGF-β1蛋白表达水平,上调Smad7mRNA的表达,TGF-β1表达变化与Smad3表达改变的趋势一致。不同浓度的清肝活血方含药血清作用强度虽有一定的量效关系趋势,但无统计学差异。结论:清肝活血方的抗肝纤维化作用可能是通过非特异性作用于TGF-β1和Smad,从而抑制HSC的增殖。

红花促进肝星状细胞胶原降解的分子机制

【目的】观察红花对肝星状细胞有关胶原降解基因表达的影响。【方法】ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量,逆转录多聚酶链反应检测间质性胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平。【结果】与对照组比较,红花组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低(P<0.01),红花组间质性胶原酶基因表达水平明显增强(P<0.01),而金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显下降(P<0.01)。【结论】红花的抗肝纤维化作用可能部分是通过增强间质性胶原酶基因表达,同时抑制金属蛋白酶组织抑制因子基因表达而完成的。

林蛙油对体外肝纤维化细胞增殖的影响

目的探究林蛙油对体外大鼠肝纤维化细胞增殖的影响。方法：将大鼠肝星状细胞（HSC—T6）株培养，用林蛙油不同剂量诱导后，观察实验前后细胞形态变化及MTT比色检测细胞增殖情况。结果：林蛙油组与空白组相比均有明显的抑制效果（P〈0．05），凋亡细胞数明显增加，纤维化细胞显著减少，细胞密度显著下降，并且各剂量组之间的抑制作用有明显差异（P〈0．05）。结论：林蛙油能够有效抑制HSC—T6细胞的增殖及纤维化进程，有助于肝纤维化细胞的良性转归。

氧化苦参碱黄芩苷组合物抗乙型肝炎病毒和抗肝纤维化的体外实验

目的研究氧化苦参碱黄芩苷组合物(OB)体外抗乙型肝炎病毒和抗肝纤维化的作用。方法培养HepG2.2.15细胞和大鼠HSC-T6细胞,分别使用OB或者氧化苦参碱处理。采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中HBsAg、HBeAg含量。收集HSC-T6细胞抽提总RNA,使用半定量RT-PCR法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原基因表达量;抽提细胞总蛋白,10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,使用Western blot检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达量。结果OB对乙型肝炎病毒抗原分泌抑制作用显著优于单独使用氧化苦参碱(两者对HBsAg抑制率的比较为:P=0.043;HBeAg为:P=0.026)。OB处理组的α-SMA含量不仅在转录水平而且在翻译水平显著低于氧化苦参碱组(mRNA:P=0.013,蛋白:P=0.042);OB处理组的Ⅰ型胶原表达量同样显著低于氧化苦参碱组(mRNA:P<0.01;蛋白:P<0.01)。结论OB对HepG2.2.15细胞分泌乙型肝炎病毒抗原和HSC-T6细胞表达α-SMA和I型胶原有抑制作用,且显著优于氧化苦参碱。

复方861对肝星状细胞间质胶原酶及I型胶原基因表达的影响

目的观察复方861对HSC．T6细胞间质胶原酶（MMP13）及I型胶原基因表达的影响。方法以不同浓度的复方861（1．00、0．50、0．25g/L）作用于培养的肝星状细胞株HSC—T6细胞48h，收集细胞，提取总RNA；用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法测定MMP13及I型胶原的基因表达水平。结果MMP13基因表达水平在复方8611．00、0．50、0．25g／L3组分别为1．03±0．16、0．60±0．08、0．33±0．04，而空白对照组为0．26±0．04。I型胶原基因表达水平在复方8611．00、0．50、0．25g／L3组分别为0．12±0．01、0．34±0．04、0．67±0．10，而空白对照组为3．12±0．46。结论复方861可明显促进HSC—T6细胞间质胶原酶的基因表达，并明显抑制I型胶原的基因表达；且该作用与剂量有关。