鞣花酸对皮肤基底细胞癌A431和HSC-2细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响

目的探讨鞣花酸对皮肤基底细胞癌A431和HSC-2细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法选择表皮癌细胞系A431和皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2,应用10μg/ml的鞣花酸干预24 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,膜连蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭。结果10μg/ml鞣花酸可显著抑制A431和HSC-2细胞增殖,干预24 h后,A431细胞抑制率为(28.48±0.46)%,HSC-2细胞抑制率为(21.47±1.02)%。鞣花酸干预后A431活细胞比例为(63.21±4.35)%,明显低于干预前的(90.37±2.35)%(P<0.01);鞣花酸干预后HSC-2活细胞比例为(79.21±2.32)%,低于干预前的(85.37±1.55)%(P<0.05)。鞣花酸干预后A431侵袭细胞个数为(23.26±7.23)/HP,明显低于干预前的(58.24±4.23)/HP(P<0.01);鞣花酸干预后HSC-2侵袭细胞个数为(22.56±2.23)/HP,明显低于干预前的(48.44±3.13)/HP(P<0.01)。结论鞣花酸不仅能够抑制A431和HSC-2细胞增殖,诱导其凋亡,还能够抑制其侵袭,有望成为治疗皮肤基底细胞癌的新药物。

4-羟基苯并恶唑-2-酮对HSC-T6细胞增殖的影响

目的研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(HBOA)对HSC-T6细胞增殖的影响。方法 HSC-T6细胞分别在药物处理组(HBOA浓度分别为0.008,0.04,0.2,1,5 mg/ml)及对照组(单纯培养液)中体外培养32 h。应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察对照组和药物处理组HSC-T6细胞的形态学变化。结果药物处理组HSC-T6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0.008 mg/ml的药物处理组与对照组相比无显著性差别(P>0.05);其他药物处理组分别与对照组比较能显著地抑制细胞增值(P<0.05或P<0.01)。HBOA对HSC细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论 HBOA对HSC-T6细胞具有抑制增殖的功效。

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝组织HSC、MMP-2免疫组化的影响

目的 :观察柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效及优势 ,并探讨其抗肝纤维化机制。方法 :用CCl4制备大鼠实验性肝纤维化模型 ,采用免疫组化技术半定量观察各组动物肝纤维化形成过程中肝组织表达HSC、MMP 2的变化 ,并相应检测血清肝功能、脂质过氧化指标等。结果 :与模型组比较 ,柔肝抑纤饮可明显抑制肝纤维化形成过程中肝组织HSC、MMP 2的表达 ,半定量统计两者均降低 ,并能使血清ALT、MDA降低 ,SOD升高 ,经统计差异具有显著性意义 (P <0 0 5、P <0 0 1)。结论 :柔肝抑纤饮具有抗脂质过氧化、降低HSC增殖活化、减少MMP 2分泌的作用 ,从而发挥了良好的抗肝纤维化作用。

化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究

目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡;Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降。结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用。

HSC—2在水工建筑中的应用

水工建筑中使用 HSC— 2水泥快硬增强剂 ,可明显改变砼的和易性 ,使水工砼各个龄期的强度显著增强 ,施工期间可提高砼模板的周转速度。同时提高砼的抗渗能力和耐久性 ,并且成本比普通砼降低 15 %左右 ,具有很高的技术推广价值。

蛇毒神经生长因子干预HSC-T6细胞差异蛋白质分析

旨在建立肝星状细胞(HSC-T6)双向凝胶电泳图谱,初步分析NGF对HSC-T6细胞蛋白质表达的影响。试验设立空白对照组和NGF(4、8和16 mg/L)处理组,分别作用于HSC-T6细胞,24 h后提取细胞总蛋白;利用2-DE分离空白对照组和NGF处理组细胞总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质;生物信息学对差异蛋白质点进行GO分类及信号传导通路分析。结果显示,比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中在NGF作用组表达上调22个,下调25个,差异蛋白质点的表达部分随着NGF浓度的增加呈递增性,部分随着NGF浓度的增加呈递减性,对其中18个表达差异1.8倍以上的蛋白质点进行肽质量指纹图分析,鉴定出13个与细胞信号传导、细胞增殖、氧化代谢有关的蛋白质。眼镜蛇毒NGF能改变HSC-T6细胞信号通路中相关蛋白质的差异表达,为在蛋白质水平研究NGF抗肝纤维化机制提供理论依据。

肝星状细胞条件培养基激活ERK1/2通路诱导肝癌细胞增殖及上皮间质转化

目的探讨肝星状细胞(HSC)对肝癌细胞(HCC)恶性生物学行为的影响及其相关机制。方法分别培养SMMC-7721肝癌细胞、Hep G2肝癌细胞和LX-2 HSC,采用LX-2 HSC条件培养基(LX2-CM)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂U0126处理肝癌细胞,TranswellTM小室检测肝癌细胞的侵袭和迁移能力,CCK-8法检测细胞的增殖情况,实时定量PCR和Western blot法分别检测两种肝癌细胞磷酸化的胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2、c-Myc、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA和蛋白水平。结果 LX2-CM能促进SMMC-7721细胞和Hep G2细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用可被U0126阻断。LX2-CM可以上调p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平,下调E-cadherin的水平;U0126处理细胞后,p-ERK1/2、c-Myc、vimentin的水平显著降低,E-cadherin水平明显升高。结论 LX2-CM能通过ERK1/2通路激活c-Myc,促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导上皮间质转化。

水蛭对Ang-Ⅱ刺激鼠肝星状细胞活化Ca^(2+)效应的抑制作用

目的研究水蛭药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca^(2+)]i)增高的作用。方法将32只健康SD大鼠按随机数字表随机分为4组肝纤维化模型水蛭组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服水蛭6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCl4溶液9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6d;正常大鼠水蛭组(8只)仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服水蛭6d;正常对照组(8只)仅皮下注射等量的精制橄榄油9周,然后灌服0.9%氯化钠溶液6d。结束后,经下腔静脉取血并分离血清。采用盲法用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i。结果(1)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca^(2+)]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0.05);且两者与正常对照组间差别也均有显著性意义(P<0.05)。(2)经正常大鼠水蛭组及肝纤维化模型水蛭组大鼠血清预处理HSCs后加入Ang-Ⅱ(1.1×10-7mol/L),HSCs[Ca^(2+)]i荧光强度变化百分数显著低于肝纤维化模型对照组(P<0.01)。结论水蛭能抑制肝星状细胞活化[Ca^(2+)]i的升高,此可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的：探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响。方法：将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果：与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内（15~75μmol/L）内能显著抑制HSC-T6细胞的活力（P〈0.01）,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度（60μmol/L）组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著（P〈0.01）,G_1期比例显著下降（P〈0.01）,G_2期和S期的比例显著升高（P〈0.01）,48 h后低浓度（15μmol/L）和中浓度（30μmol/L）组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性（P〈0.05）;低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性（P〈0.05）。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调（P〈0.05）。结论：褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡。

全反式维甲酸对TGF-β1刺激的肝星状细胞COL1α2、MMP-2、TIMP-1以及信号通路的影响

目的观察全反式维甲酸对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖,以及经转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激后Ⅰ型胶原α1链蛋白基因(COL1α2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)及Smad 2/3的表达变化,探讨其对肝纤维化的作用及其分子机制。方法不同浓度的全反式维甲酸(0.1、1、10μmol/L)分别作用HSC-T612、24、48h,采用噻唑蓝(MTT)比色实验检测HSC-T6增殖活性;另外,经TGF-β1(5ng/mL)刺激后的HSC-T6用不同浓度全反式维甲酸干预24h后,利用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定COL1α2、MMP-2及TIMP-1mRNA的表达,细胞免疫化学染色法检测smad2/3蛋白的表达。结果全反式维甲酸能够抑制HSC-T6的增殖,而且具有浓度依赖性(P<0.05);受外源TGF-β1 5ng/mL刺激后,HSC-T6中COL1α2、MMP-2、TIMP-1 mRNA及Smad2/3蛋白表达较对照组明显增强(P<0.05),而全反式维甲酸干预能够有效降低HSC-T6受TGF-β1刺激后COL1α2、MMP-2、TIMP-1mRNA及Smad2/3蛋白的表达(P<0.05)。结论全反式维甲酸能够抑制HSC-T6的增殖,下调HSC-T6受TGF-β1刺激后COL1α2、MMP-2、TIMP-1mRNA的表达,并且可能通过抑制HSC-T6中TGF-β1的下游信号蛋白Smad 2/3的表达,影响TGF-β1/Smad信号通路,发挥其抗肝纤维化作用。

蛇毒神经生长因子对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及肝纤维化相关蛋白质表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡以及蛋白质表达差异的影响,进一步为蛇毒NGF抗肝纤维化提供依据。方法实验分为对照组(单纯HSC-T6培养)和实验组(NGF进行干预)。应用MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响;双向电泳技术观察HSC-T6细胞蛋白质表达变化;质谱鉴定差异表达的蛋白。结果 MTT结果显示NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(5 mg.L-1NGF时抑制率为48.2%±1.9%,P<0.01);流式细胞仪也有同样的发现,NGF(5 mg.L-1)干预组的凋亡率21.15%±3.31%明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05);比较分析空白对照组和NGF作用组的2-DE图谱,找到差异蛋白质点47个,其中与对照组相比在NGF作用组表达上调22个,下调25个;质谱鉴定出9个蛋白质,其中4个表达上调,5个表达下调。结论蛇毒NGF能抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖,诱导其凋亡,并且影响HSC-T6细胞蛋白质的表达。

益肝康药物血清对大鼠肝星状细胞胞浆游离钙效应的抑制作用

目的研究益肝康药物血清是否具有抑制肝星状细胞(HSCs)胞浆游离钙([Ca2+]i)增高的作用。方法将32只健康雄性SD大鼠按随机数字表分为4组:肝纤维化模型益肝康组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服益肝康6d;肝纤维化模型对照组(8只)皮下注射用精制橄榄油配制的40%CCL4溶液9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d;正常大鼠益肝康组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服益肝康6d;正常对照组(8只)皮下注射等量精制橄榄油9周,然后灌服0·9%氯化钠溶液6d。结束后经下腔静脉取血并分离血清。用盲法,采用上述10%血清培养HSCs24h并负载好Fluo-3/AM后,使用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测HSCs[Ca2+]i。结果(1)经正常大鼠益肝康组及肝纤维化模型益肝康组大鼠血清预处理的HSCs,其[Ca2+]i荧光强度相对值均明显低于肝纤维化模型对照组(P<0·05);且两者与正常对照组间差别均有显著性意义(P<0·05)。结论益肝康能抑制肝星状细胞[Ca2+]i的升高,这可能是其发挥抗肝纤维化作用的重要途径之一。

红花注射液对肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的研究红花注射液对肝星状细胞(hepatic steuate cell,HSC)HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因bcl-2及bax mRNA表达的影响。方法体外培养HSC株,用不同质量浓度的红花注射液处理HSC-T6,采用MTT法检测细胞增殖;采用5、10、20 mg/mL红花注射液干预细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期;倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学改变;并用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA Ladder凋亡梯度;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪分析凋亡率;Real ti me-RT PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA的表达水平。结果红花注射液对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性;红花注射液(10、20 mg/mL)作用24 h流式细胞术测出G0/G1期细胞所占比例增多,与对照组比较差异显著(P<0.05、0.01);药物干预后细胞表现不同程度的凋亡,琼脂糖电泳可见DNA出现断裂、PI/Annexin V双染流式细胞仪分析对照组凋亡率为(0.73±0.33)%,红花注射液在5、10、20 mg/mL凋亡率分别为(2.04±0.58)%、(9.46±1.29)%、(16.55±1.27)%,差异显著(P<0.01);Real ti me-RT-PCR结果显示红花下调抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达,同时上调HSC-T6的促凋亡基因bax的mRNA表达。结论红花注射液能抑制HSC增殖及增殖周期,促进活化的HSC凋亡,其机制可能是调控bcl-2/bax mRNA的表达。

2型糖尿病合并抑郁患者炎性因子和胰岛素抵抗指数的变化及其临床意义

目的探讨T2DM合并抑郁患者炎性因子和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的变化。方法选择单纯抑郁组44例,单纯T2DM组(T2DM)124例,T2DM合并抑郁组48例,另选正常体检人群(NC)40名,分别测定各组汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分得分、FPG、HbA1c、FIns、FC-P、高敏C反应蛋白(hsC-RP)、IL-2、IL-10、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等指标。结果与NC、单纯抑郁组及T2DM组相比,T2DM合并抑郁组FPG[(5.11±0.25),(5.18±0.22),(9.47±3.46)vs(11.51±2.05)mmol/L]、HbA1c[(5.53±0.32)%,(5.36±0.34)%,(8.89±2.21)%vs(10.28±2.12)%]、hsC-RP[(1.10±0.36),(4.02±1.96),(3.54±2.05)vs(9.20±2.11)mg/L]、IL-2[(122.00±4.01),(144.10±9.90),(142.64±15.36)vs(166.86±22.81)pg/ml]、HOMA-IR[(1.14±0.24),(1.58±0.21),(2.70±1.54)vs(3.78±1.08)升高(P<0.05);IL-10[4.72(3.94,5.98),3.44(3.13,4.35),4.00(3.39,4.11)vs 2.10(1.99,3.84)pg/ml]、胰岛素敏感指数(ISI)[(-3.92±0.60),(-3.57±0.13),(-3.22±0.22)vs(-4.41±0.27)]、IGF-1[(169.18±46.14),(166.20±32.79),(224.33±20.74)vs(80.15±39.26)pg/ml]降低(P<0.05)。相关分析显示,HAMD评分与hsC-RP、IL-2呈正相关,与IL-10、IGF-1呈负相关;多元逐步回归分析显示,hsC-RP、IGF-1是HAMD评分的影响因素;Logistic回归分析表明,hsC-RP是T2DM并发抑郁的危险因素。结论 T2DM合并抑郁患者炎性反应及IR更严重,hsC-RP与T2DM患者发生抑郁相关。

甲基莲心碱对肝星状细胞Collagen-Ⅰ,TIMP-1及MMP-2的影响

目的:观察甲基莲心碱对肝星状细胞Collagen-Ⅰ,TIMP-1及MMP-2 mRNA表达及蛋白分泌的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,随机分为5组:对照组、血小板衍生因子(PDGF)组、甲基莲心碱低、中、高剂量组(2,6,10μmol.L-1)。分别加入各组药物培养48 h后,收集细胞提取总RNA,采用RT-PCR检测Collagen-Ⅰ,TIMP-1及MMP-2 mRNA表达,并收集细胞上清液采用ELISA检测3个因子的蛋白含量。结果:与对照组相比,PDGF可明显增加肝星状细胞Collagen-I,TMIP-1及MMP2 mRNA表达及蛋白分泌。与PDGF组相比,甲基莲心碱中、高剂量组Collagen-Ⅰ及TMIP-1 mRNA表达及蛋白分泌明显减少,且随着浓度的增加,减少更明显,而甲基莲心碱低剂量组Collagen-Ⅰ及TMIP-1表达及分泌无明显变化。与PDGF组相比,甲基莲心碱3个剂量组的MMP-2 mRNA表达及蛋白分泌均无明显变化。结论:甲基莲心碱可抑制PDGF诱导的HSC的Collagen-Ⅰ和TIMP-1的mRNA表达及蛋白分泌,且随浓度的增加,抑制作用加强,但对MMP-2的表达及分泌无明显影响。

冠状动脉CT造影结合颈动脉超声与血清学标志物评价2型糖尿病合并冠心病的临床意义

目的运用螺旋CT冠状动脉造影(CCTA)结合颈动脉超声、血清学标志物分析T2DM合并冠心病(CHD)患者冠状动脉与颈动脉病变的相关性,为评估冠状动脉早期病变提供诊断依据。方法选取2014年1月至2015年12月在两家医院心内科和内分泌科住院诊断为CHD患者95例,根据有无T2DM病分为单纯CHD组(n=45)和T2DM合并CHD组(n=50),比较两组冠状动脉、颈动脉病变程度,高敏C-反应蛋白(hsC-RP)及FFA的差异。结果 CCTA显示,T2DM合并CHD组以双支和3支冠脉病变为主,与单纯CHD组比较,差异有统计学意义(40.0%vs 24.5%,50.0%vs 31.0%,P<0.05),右冠状动脉、左回旋支斑块更多出现在T2DM合并CHD组,冠脉双支和3支病变组颈动脉斑块数较单支病变组多(P<0.05)。T2DM合并CHD组冠状动脉斑块、颈动脉斑块检出率、软斑块所占比例均高于单纯CHD组(P<0.05)。T2DM合并CHD组hsC-RP、FFA均高于单纯CHD组(P<0.01)。非钙化斑块组hsC-RP、FFA较钙化斑块组高(P<0.05)。随着冠状动脉病变分支增加,hsC-RP、FFA逐渐升高。Spearman相关分析表明,hsC-RP与FFA呈正相关(r=0.733,P<0.01),hsC-RP水平与冠状动脉病变支数均呈正相关(CHD组r=0.835,T2DM合并CHD组r=0.892;P<0.01)。结论CCTA显示,T2DM合并CHD冠脉斑块以软斑块和混合性斑块为主,冠状动脉病变广泛,颈动脉超声提示外周血管斑块数越多,冠状动脉病变支数越多,病变越严重。临床上联合CCTA、颈动脉超声及hsC-RP、FFA水平检测可提高T2DM合并CHD确诊率,降低假阳性,值得推广应用。

大麻素CB2受体激动剂AM1241对肝星状细胞影响

目的探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2)激动剂AM1241对大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)影响及其机制。方法将HSC-T6细胞随机分为对照组、氧化应激组及20、80μmol/L AM1241干预组;对照组正常培养,氧化应激组用含100 m U/L葡萄糖氧化酶(GO)完全培养液培养2 h;AM1241干预组分别加入20、80μmol/L的AM1241干预3 h后,再加入100 m U/L GO干预2 h;细胞免疫化学染色法检测HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫法检测HSC-T6细胞培养液上清中I型胶原(Col I);硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量;氮蓝四唑法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western blot检测HSC-T6细胞核转录相关因子(Nrf2)总蛋白与核蛋白含量。结果与对照组比较,氧化应激组HSC-T6细胞胞浆中α-SMA、Col I表达量均增多(P<0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组HSC-T6细胞胞浆中α-SM A、Col I表达量均减少(P<0.05);与对照组比较,氧化应激组HSC-T6细胞中丙二醛含量上升,SOD活性下降(P<0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组HSC-T6细胞丙二醛含量下降,SOD活性上升(P<0.05);对照组、氧化应激组及20、80μmol/L AM1241干预组HSC-T6细胞中Nrf2总蛋白表达量分别为(0.62±0.021)、(0.60±0.015)、(0.59±0.020)、(0.61±0.032),各组差异无统计学意义(P>0.05);与氧化应激组比较,AM1241干预组Nrf2核蛋白表达量均增加(P<0.05)。结论大麻素CB2受体激动剂AM1241可抑制氧化应激作用下HSC-T6细胞活化,其机制可能与AM1241促进HSC-T6细胞中Nrf2发生核内转移,增加抗氧化作用有关。

鳖甲煎丸对肝星状细胞中Wnt信号通路信号分子β-catenin、GSK-3β及下游蛋白表达的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)中Wnt信号通路信号分子β-catenin、GSK-3β及下游靶基因表达的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法:用鳖甲煎丸药物血清培养永生化HSC-T6细胞,24h后采用Western blot法检测HSC-T6细胞Wnt/β-catenin信号分子β-catenin、GSK-3β和磷酸化GSK-3β的表达水平,ELISA检测下游靶基因TIMP-1、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果:与阴性及空白对照组比较,鳖甲煎丸低、中、高组和阳性对照组β-catenin、p-GSK-3β蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。同时,鳖甲煎丸能够抑制TIMP-1的表达(P<0.05),高剂量组可促进MMP-2和MMP-9的表达(P<0.05)。结论:鳖甲煎丸抗肝纤维化的药理作用可能与调控HSC-T6细胞中Wnt/β-catenin信号通路有关。

藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究藏药波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对大鼠肝星状HSC-T6细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用,进一步探讨TLHPS抗肝纤维化的作用机制。方法实验分为对照组,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组,阳性药秋水仙碱0.1μg/mL组。用加入各组药物的培养基分别培养HSC-T6细胞24、48、72 h,采用CCK8法检测各组细胞24、48、72 h的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组对HSC-T6细胞24、48、72 h时的增殖抑制率明显增高(P<0.01),且各组HSC-T6细胞早期凋亡率与晚期凋亡率明显升高(P<0.05,0.01),G0/G1期细胞数明显增多(P<0.01),G2/M期细胞数无明显差异(P>0.05),S期细胞数明显减少(P<0.01)。Western blotting结果显示,与对照组相比,TLHPS10、20、30、40μg/mL组Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,0.01),TLHPS 40μg/mL组Bax蛋白表达明显升高(P<0.01),TLHPS 20、30、40μg/mL组NF-κB表达明显降低(P<0.01)。结论 TLHPS抗肝纤维化的作用机制可能是通过降低Bcl-2、NF-κB的表达抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。

亚临床甲状腺功能减退对２型糖尿病患者高敏Ｃ反应蛋白水平与大血管病变的影响

目的观察亚临床甲状腺功能减退(SCH)对T2DM患者血清高敏C反应蛋白(hsC-RP)水平及大血管病变的影响。方法将328例T2DM患者分为T2DM合并SCH(T2DM+SCH)组及单纯T2DM(T2DM)组,测定BMI、WC、促甲状腺激素(TSH)、血清游离甲状腺素(FT4)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、FPG、FC-P、TC、TG、LDL-C、HDL-C、HbA1c、血清hsC-RP水平、颈动脉内-中膜厚度(CIMT)、颈动脉斑块发生率、踝肱指数(ABI)及评估大血管病变发生率。结果 T2DM+SCH组女性患者比例、BMI、WC、TSH、TC、TG、LDL-C、hsC-RP水平均高于T2DM组(P<0.05);T2DM+SCH组CIMT增厚,颈动脉斑块、大血管病变发生率增加,高血压病、脑血管病、冠心病患病率均高于T2DM组(57.7%vs 36.6%、40.4%vs 25.0%、42.3%vs 19.2%,P均<0.05),而ABI低于T2DM组(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,SCH是糖尿病大血管病变发生的独立危险因素。结论 T2DM合并SCH患者颈动脉斑块及大血管病变发生率增加,脂代谢异常及炎性反应参与了颈动脉斑块及大血管病变的形成。