HSD17B6的主要功能及其在内分泌代谢和肿瘤中的作用

羟基类固醇脱氢酶是醛酮还原酶和短链脱氢酶⁃还原酶超家族的成员,对于类固醇激素在体内发挥正常功能起着至关重要的作用。HSD17B6是羟基类固醇脱氢酶中的一种,在体内主要参与雄激素的代谢和生物合成,产生雌激素受体β的高亲和力配体,进而可能影响体内糖脂代谢,造成内分泌及生殖系统的紊乱与疾病的发生。HSD17B6表达异常也与机体免疫功能有关,可参与肿瘤的发生与发展,作为潜在生物标志物用于肿瘤的诊断与评估,为药物或靶向治疗提供参考信息。尽管其对疾病影响的精细机制尚不明确,但HSD17B的功能丧失可能对机体造成不同程度的损伤。本文就HSD17B6在代谢病和肿瘤方面的作用进行综述。

HSD类黏指剂热管氧化沉积物形成与表征

采用热管氧化试验法分别对单一基础油和1wt.%HSD类黏度指数改进剂[ω(氢化苯乙烯双烯共聚物):ω(基础油)=1∶99]在220℃、250℃、280℃、310℃温度下开展试验,并利用SEM、EDS、FT IR、1H-NMR对管壁沉积物进行表征。研究表明:在220℃、250℃试验温度下,单一基础油形成管壁沉积物含量高,在280℃、310℃试验温度下,1wt.%HSD黏度指数改进剂形成管壁沉积物含量明显高于单一基础油。与220℃、280℃试验温度下的管壁沉积物相比,1wt.%HSD黏度指数改进剂在280℃、310℃下的管壁沉积物平均粒径90~100μm,沉积物的O、S含量相近,C元素含量略有增加。另外,管壁沉积物化学位移0.85×10^(-6)峰面积明显增大,但化学位移1.26×10^(-6)、1.56×10^(-6)峰面积明显变小。由此说明,1wt.%HSD类黏度指数改进剂中烷烃链长变短,但异构化程度显著增加。这可能是因为HSD类黏度指数改进剂在280℃、310℃温度下发生深度氧化引起的。

睾丸酮丛毛单胞菌激素降解关键酶3,17β-HSD蛋白质相互作用研究

为研究睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas Testosteroni,C.T.)ATCC11996降解甾体类激素过程中关键蛋白质的相互作用关系,本文利用基因同源重组及移码突变原理构建睾丸酮降解关键酶3,17β-HSD基因敲除突变株,在回收率95%条件下高效液相检测野生株与突变株睾丸酮降解率,突变株对睾丸酮降解能力明显低于野生株;原核表达3,17β-HSD获得浓度2.4 mg/mL纯化蛋白,制备特异性鼠源多克隆抗体,ELISA检测抗体效价1∶320000;将多克隆抗体与经睾丸酮诱导的野生型C.T.细胞裂解液蛋白质复合物进行免疫共沉淀,质谱测定蛋白质相互作用组,结果表明短链脱氢酶SDRy(WP_003078287.1)为睾丸酮降解过程中关键酶3,17β-HSD的主要相互作用蛋白。

HSD17B12对兔卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响

本实验旨在研究羟基类固醇17-β脱氢酶12(17βHydroxysteroid Dehydrogenase Type 12,HSD17B12)对兔卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。首先克隆了兔HSD17B12基因,进行生物信息学分析;分离原代兔颗粒细胞(Granulosa Cells,GCs),并利用FSHR免疫荧光法进行鉴定;构建HSD17B12基因过表达质粒及干扰RNA,转染GCs,利用qRT-PCR检测HSD17B12对增殖、凋亡相关基因的调控作用,并利用流式细胞、CCK8等方法检测HSD17B12对GCs增殖、凋亡的影响。结果显示:①利用FSHR免疫荧光染色,鉴定分离原代细胞是GCs,FSHR表达呈阳性。②克隆HSD17B12基因,发现其cDNA全长为938 bp,编码312个氨基酸。进化树显示兔与黑猩猩(Pan Troglodytes)、猕猴(Macaca Mulatta)等聚在一起,鸡(Gallus Gallus)为外支。③过表达HSD17B12可以提高增殖相关基因AKT1-1的表达(P<0.01),降低凋亡相关基因Bad、Fas、FasL、P53(P<0.01)以及Bcl-2(P<0.05)的表达;干扰后,对基因的调控作用相反。④HSD17B12可促进GCs增殖,抑制GCs凋亡(P<0.01)。因此,HSD17B12可能通过调控AKT1、Bad、Fas、FasL、P53等基因的表达,显著促进兔GCs增殖,抑制其凋亡,为其在母兔卵巢发育中的作用机制研究提供理论依据。

糖尿病对大鼠睾丸病理变化及睾酮合成、17 β-HSD_3和3 β-HSD_1 mRNA表达的影响

目的:研究大鼠糖尿病时睾丸的主要病理变化及对间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成、17β-HSD3和3β-HSD1 mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠19只,随机分为正常对照(NC)组10只,糖尿病(DM)组9只。DM组予高脂饮食加小剂量(25mg/kg)链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型,12周后处死。用光镜及电镜观察大鼠睾丸的组织形态学改变;RT-PCR法检测睾丸组织17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)和3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(3β-HSD1)mRNA含量;酶联免疫吸附法测定血清中睾酮含量。结果:糖尿病大鼠光镜下主要表现为睾丸曲细精管生精细胞数量减少及生精阻滞,Leydig细胞缩小,细胞核皱缩;透射电镜下主要见到Leydig细胞萎缩,线粒体、内质网等细胞器空泡样变及扩张,细胞核皱缩,染色质聚集;睾丸组织的17β-HSD3和3β-HSD1 mRNA含量和血清中睾酮含量糖尿病组均低于正常对照组。结论:糖尿病可使大鼠睾丸Leydig细胞变性,睾酮合成降低,其机制可能与降低17β-HSD3和3β-HSD1 mRNA表达有关。

促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h。GnRHa(10-7mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达。结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90 min后,p-ERK水平在5 min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10 min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90 min时恢复到正常水平。加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5 min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平。用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24 h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRH激动剂可能通过ERKMAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌。

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD的表达影响

目的:探讨阿拉瑞林(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V(annexin5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达的影响.方法:建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa(分别为1×10-5,1×10-6,1×10-7mol/L)作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexin5和3β-HSD的表达变化情况.结果:间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10-5mol/L时,anenxin5的表达量显著升高了69.2%(P<0.01),3β-HSD的表达量也升高了25.2%(P<0.05);当GnRHa的终浓度为1×10-6mol/L和1×10-7mol/L时,anenxin5的表达量分别升高了61.5%(P<0.05)和16.64%(P>0.05),3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7.7%(P>0.05)和2.22%(P>0.05).结论:GnRHa在原代培养的睾丸间质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用.

不同年龄女性脂肪组织11βHSD1 mRNA表达水平及临床意义

目的观察儿童期、育龄期及绝经期女性皮下和网膜脂肪组织11βHSD1 mRNA表达水平,探讨人类不同年龄脂肪组织积聚和分布的分子机制。方法取开腹手术女童〔11例,年龄(5.64±3.72)岁〕、育龄期非妊娠妇女〔13例,年龄(33.24±6.25)岁〕及绝经期妇女〔11例,年龄(66.06±7.13)岁〕皮下和网膜脂肪组织。同时测定身高、体重和腰臀围,计算体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)。应用实时定量PCR方法测定脂肪组织11βHSD1 mRNA表达水平。结果无论皮下及网膜,女童脂肪组织11βHSD1 mRNA表达水平明显低于育龄期(皮下:P<0.001;网膜:P=0.003)及绝经期妇女(皮下:P<0.001;网膜:P<0.001);育龄期妇女11βHSD1 mRNA表达水平明显低于绝经期妇女(皮下:P<0.001;网膜:P<0.001)。绝经期妇女网膜脂肪组织11βHSD1 mRNA表达明显高于皮下(P=0.01)。成年期女性网膜脂肪组织11βHSD1 mRNA表达水平与BMI(r=0.416,P<0.05),WHR(r=0.775,P<0.001)正相关。结论脂肪组织11βHSD1 mRNA的表达呈现年龄依赖性及部位差异性,并与成年女性BMI、WHR密切相关。提示其可能参与了人类脂肪组织的生长和不同部位分布的调节。

HSD17B1和HSD17B2基因多态性与四川汉族人群肝癌的关联性研究

目的探讨性激素17β-羟甾类固醇脱氢酶(HSD17B1和HSD17B2)基因单核苷酸多态性与四川地区汉族人群肝癌之间的关系,为肝癌的预防、筛查、治疗及预后提供理论依据。方法以136例汉族肝癌患者,200例汉族健康人群为对象,选取HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246两个位点作为遗传标志,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测HSD17B1和HSD17B2基因多态性及其分布频率。结果与健康人群相比HSD17B1 rs676387的T等位基因显著增加肝癌患病风险(P<0.05)。结论 HSD17B1 rs676387与四川汉族HCC的发生发展具有相关性,该研究结果有待在多民族、多中心、大样本研究中进一步证实。

水牛HSD17B1基因克隆分析及其真核表达载体构建

为了阐明水牛17β-羟类固醇脱氢酶1(17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1,HSD17B1)基因对水牛繁殖性能的影响,本试验采用了3′-RACE克隆获得HSD17B1基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了生物信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明,水牛HSD17B1基因编码区长954bp,3′-UTR区长58bp,编码317个氨基酸。BLAST分析显示水牛HSD17B1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、犬、非洲象和人的相似性分别为100%、100%、92%、94%、87%、87%和87%,系统进化树分析结果表明,HSD17B1基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明HSD17B1蛋白呈弱酸性,无信号肽,亚定位于细胞质,存在type1_17beta-HSD-like_SDR_c、PRK05993、LPOR和FabG等结构域。试验成功构建了水牛HSD17B1基因真核表达载体pEGFPN1-HSD17B1,转染293T后,产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成HSD17B1-EGFP融合蛋白。水牛HSD17B1基因的克隆及其真核表达载体的成功构建,为今后阐明HSD17B1基因在水牛卵泡及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了理论基础。

促甲状腺素释放激素与HSD伍用对高原失血性休克合并肺水肿大鼠的治疗作用

目的 :研究促甲状腺素释放激素 ( TRH)与高渗氯化钠 /右旋糖酐 ( HSD)伍用对急进高原的大鼠失血性休克合并肺水肿的疗效。方法 :实验在海拔 3 76 0 m的西藏拉萨市进行 ,急进高原大鼠 49只 ,从股动脉放血至平均动脉压 ( MAP) 5 0 mm Hg( 1m m Hg=0 .133k Pa) ,静脉注射 5 0 μl/ kg油酸制造肺水肿 ,维持该血压 1h,复制失血性休克合并肺水肿模型。实验分为假手术对照组 (不放血、不给油酸 )、单纯休克组、休克合并肺水肿组、乳酸林格氏液 ( 4ml/ kg,L R)组、TRH ( 5 m g/ kg)组、HSD( 4ml/ kg)组和 TRH与 HSD合用组 ,每组 7只动物。观察给药后 15、30、6 0和 12 0 m in的血流动力学指标变化 ,30和 12 0 min的血气指标变化和 12 0 min肺、脑含水量变化。结果 :TRH及 HSD单用或伍用给药后 MAP升高 ,左心室内压 ( L VSP)、左心室内压最大变化速率 (± dp/ dt m ax)改善 ,酸碱平衡紊乱缓解、肺湿重 /干重比减少 ,其中 TRH与 HSD伍用疗效在众多方面都比两药单用为优。结论 :TRH及 HSD单用及伍用对高原失血性休克合并肺水肿大鼠有良好的抗休克及减轻肺水肿的作用 ,其中两药伍用疗效更优。

HSD型高效耐硫脱氧剂的研究

本文叙述了所开发的钼系ＨＳＤ型高效耐硫脱氧剂的各种性能．对普氮、普氢、氩气等不同气源（氧含量０．１～０．５％）的脱氧试验表明：在空速：２０００～３００００ｈ－１、压力：常压～１．２ＭＰａ、温度：２９８～４７３Ｋ的条件下，尾气中残氧量小于０．３×１０－６（Ｖ）．对含硫含氢气源，可脱氧至０．１ｐｐｍ（Ｖ）。对不含氢的气源脱氧，氧容量可达８４ｍｌ／ｇ，１０００余小时的长期运转表明该脱氧剂具有良好的耐硫和热稳定性能，且成本低廉．可广泛地用于化学工业和其它工业领域。

半滑舌鳎hsd11b1l和hsd11b2基因的克隆及其温度响应的表达规律

皮质醇在鱼类应对外界环境压力的过程中起到重要调控作用,而hsd11b1l和hsd11b2具有调节体内皮质醇浓度的重要功能。本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) hsd11b1l和hsd11b2基因的cDNA全长序列,分析了其序列特征,研究了其时空表达特征及温度响应的表达规律。结果显示,hsd11b1l cDNA全长为1650 bp,开放性阅读框长度为864 bp,编码287个氨基酸;hsd11b2 cDNA全长为4526 bp,开放性阅读框长度为1209 bp,编码402个氨基酸。半滑舌鳎不同组织和性腺发育时期的表达分析结果显示,hsd11b1l在肝脏中表达量最高,在卵巢的表达量是精巢的2倍,且在6月龄和3龄鱼的卵巢中呈现较高表达;而hsd11b2主要在精巢中表达,在6月龄鱼的精巢中表达量最高,随后表达量急剧降低,在卵巢中各个时期几乎不表达。半滑舌鳎温度响应的表达结果显示,高温(28℃)处理2个月后,与正常温度(22℃)对照组相比,hsd11b1l和hsd11b2在雄鱼中的表达量均显著降低(P<0.05);高温短期应激48h,hsd11b1l表达在雌鱼和雄鱼中均显著降低,hsd11b2表达仅在雄鱼中有显著下调(P<0.05)。本研究探讨了hsd11b1l和hsdl1b2基因在半滑舌鳎性别分化过程中的表达规律,为研究环境温度与半滑舌鳎性别分化之间的关系奠定了基础。

HSD11B2基因多态性与胎儿发育的关系

目的探讨正常妊娠HSD11B2基因多态性与胎儿发育的关系。方法用基因测序方法检测HSD11B2启动子/G-209A、G-194C、G-151A及G-126 A基因多态性。用PCR-毛细管电泳方法检测187对正常妊娠母血及脐血HSD11B2基因1号内含子{CA}n微卫星多态性。结果1、本研究中33例汉族人群HSD11B2启动子/G-209A、G-194C、G-151A及G-126 A位点均为野生型GG纯合子;2、新生儿出生体质量及孕晚期B超下体格参数指标在母血组和脐血组HSD11B2基因1号内含子{CA}n基因型SS、SL、LL组或者SS+SL、LL组之间差异不显著(P>0.05)。在考虑分娩孕周、胎儿性别、孕妇孕前BMI、孕妇分娩体质量、年龄为混杂因素的情况下,母血及脐血HSD11B2基因1号内含子{CA}n基因型与新生儿出生体质量及孕晚期B超下胎儿体格参数指标之间的关系,均未见相关性(P>0.05)。结论正常妊娠母体及胎儿HSD11B2基因多态性与胎儿发育指标不相关。

睾丸酮诱导下的不同菌种中3α-HSD的表达及含量检测

3-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)是睾酮丛毛单胞菌分泌的一种类固醇脱氢酶。本实验利用已构建的pET-3α-HSD转化BL21,得到BL21pET-3α-HSD,经IPTG诱导表达提纯3α-HSD蛋白,建立了3α-HSD蛋白标准曲线。应用ELISA方法检测在睾丸酮的诱导下,三种工程菌C.testosterone,Ca3,BL21PET-3 hsd对3α-HSD的表达量,经过对比研究发现,在三种工程菌中,C.testosterone更宜适合作为检测环境中载体类化合物的指示菌种,并且得出3α-HSD是C.testosterone和Ca3在降解载体化合物的关键酶,在检测中可作为目标蛋白。

HSD1蛋白在精子发生过程中的空间特异性表达

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位及其核质分布情况。结果 HSD1蛋白在初级精母细胞和圆形精子细胞的胞质中表达;在成熟精子细胞中主要表达于顶体和尾部。HSD1蛋白在CHO细胞中存在3种分布形式:细胞核型、细胞质型和核质分布型。进一步研究发现该蛋白在细胞中呈动态分布,存在细胞核-质间的穿梭特性。结论HSD1蛋白在生精细胞中呈空间特异性表达并且具有核质穿梭能力。

小鼠11β-HSD1基因过表达的前成骨细胞系的建立

目的:探索小鼠11β-HSD1基因过表达的前成骨细胞系的建立方法。方法:构建过表达小鼠11β-HSD1基因的慢病毒载体,包装、收集、纯化慢病毒,感染小鼠MC3T3-E1前成骨细胞系,用BSD(一种核苷抗生素)筛选出感染成功的细胞,荧光定量PCR及Western blot检测11β-HSD1过表达情况,诱导成骨分化后用茜素红染色法染色矿化结节。结果:成功构建了小鼠11β-HSD1基因过表达慢病毒载体,高效感染MC3T3-E1细胞系。荧光定量PCR及Western blot结果显示,11β-HSD1过表达病毒组细胞11β-HSD1 mRNA水平是空载病毒对照组的17.4倍,蛋白表达量比空载病毒对照组增加。茜素红染色结果表明慢病毒感染的细胞成骨分化良好,细胞正常成骨分化功能未受影响,11β-HSD1过表达细胞成骨分化减少。结论:本研究成功建立了过表达小鼠11β-HSD1的前成骨细胞系,为研究11β-HSD1对成骨细胞的具体作用提供了研究基础。

电离层闪烁对海事卫通HSD传输性能的影响

海事卫星通信B系统是重要的岸船通信系统,基于该系统的高速数据传输业务是重要的岸船综合数据传输方式。针对该系统高速数据传输(HSD)在远洋海区通信任务中出现的信号强度不稳定、突发误码增多、系统误码率偏高等问题进行了原因分析。提出了电离层闪烁对海事卫星HSD传输性能存在一定影响的意见。通过对电离层振幅闪烁信号进行建模仿真,验证了电离层闪烁导致海事卫通HSD传输性能下降、突发误码增多的结论。

妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2表达的分子机理

目的:探讨妊娠期糖尿病患者胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2表达的分子机理。方法:选择正常胎盘组织体外给予游离脂肪酸(PA)组、地塞米松(DEX)组、胰岛素(INS)组以及3种混合液(MIX)组刺激24h后,检测11β-HSD1和11β-HSD2基因和蛋白水平。结果:与基础状态相比,PA组、DEX组、INS组、MIX组胎盘组织中11β-HSD1mRNA的表达均降低(1.00±0.01、0.54±0.03、0.63±0.10、0.42±0.04、0.61±0.07,P<0.05),11β-HSD2mRNA的表达均升高(1.00±0.01、1.46±0.12、1.48±0.13、1.53±0.08、1.93±0.09,P<0.05);11β-HSD1蛋白水平表达均降低(0.99±0.01、0.43±0.05、0.18±0.02、0.71±0.09、0.54±0.06,P<0.05),11β-HSD2蛋白水平表达均提高(1.04±0.04、2.27±0.16、4.10±0.98、3.10±0.39、3.98±0.32,P<0.05)。结论:高脂血症、高皮质醇、高胰岛素可以作为独立因素调节胎盘组织中11β-HSDs的表达,妊娠期糖尿病患者高脂血症、高皮质醇血症、高胰岛素血症可能是引起11β-HSDs调控变化的分子机理。