水牛HSD17B1基因克隆分析及其真核表达载体构建

为了阐明水牛17β-羟类固醇脱氢酶1(17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1,HSD17B1)基因对水牛繁殖性能的影响,本试验采用了3′-RACE克隆获得HSD17B1基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了生物信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染293T细胞验证所构建载体的准确性。结果表明,水牛HSD17B1基因编码区长954bp,3′-UTR区长58bp,编码317个氨基酸。BLAST分析显示水牛HSD17B1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、犬、非洲象和人的相似性分别为100%、100%、92%、94%、87%、87%和87%,系统进化树分析结果表明,HSD17B1基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性。蛋白质分析结果表明HSD17B1蛋白呈弱酸性,无信号肽,亚定位于细胞质,存在type1_17beta-HSD-like_SDR_c、PRK05993、LPOR和FabG等结构域。试验成功构建了水牛HSD17B1基因真核表达载体pEGFPN1-HSD17B1,转染293T后,产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成HSD17B1-EGFP融合蛋白。水牛HSD17B1基因的克隆及其真核表达载体的成功构建,为今后阐明HSD17B1基因在水牛卵泡及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了理论基础。

HSD17B1rs676387和SHBGrs6259基因多态性与四川汉族人群SLE的关联性

目的探讨性激素17β-羟甾类固醇脱氢酶1[hydroxysteroid(17-beta)dehydrogenase1,HSD17B1]和性激素结合球蛋白(sex hormone-binding globulin,SHBG)单核苷酸多态性与四川地区汉族人群系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)之间的关系。方法以98例SLE患者和346例健康对照者为研究对象,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)技术对HSD17B1 rs676387和SHBG rs6259单核苷酸多态性位点进行基因分型。结果 SLE患者SHBG rs6259 A等位基因和AG基因型频率分布与正常对照组差异存在统计学意义(P<0.05),HSD17B1 rs676387等位基因和基因型频率分布与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SHBG rs6259 A增加了四川汉族人群SLE发病易感性,提示SHBG rs6259 A可能参与了SLE的发病过程。

HSD17B1和HSD17B2基因多态性与四川汉族人群肝癌的关联性研究

目的探讨性激素17β-羟甾类固醇脱氢酶(HSD17B1和HSD17B2)基因单核苷酸多态性与四川地区汉族人群肝癌之间的关系,为肝癌的预防、筛查、治疗及预后提供理论依据。方法以136例汉族肝癌患者,200例汉族健康人群为对象,选取HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246两个位点作为遗传标志,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测HSD17B1和HSD17B2基因多态性及其分布频率。结果与健康人群相比HSD17B1 rs676387的T等位基因显著增加肝癌患病风险(P<0.05)。结论 HSD17B1 rs676387与四川汉族HCC的发生发展具有相关性,该研究结果有待在多民族、多中心、大样本研究中进一步证实。

水牛HSD17B1基因启动子荧光素酶报告基因载体构建与分析

试验旨在筛选水牛HSD17B1基因启动子活性区域及影响因素,并预测其转录结合因子,为探究该基因在水牛繁殖性能中的调控机理提供理论依据。以水牛血液基因组DNA为模板,PCR扩增得到3个HSD17B1基因启动子活性区域序列,并定向克隆至pGL3-promoter载体;将重组质粒转染到水牛卵泡颗粒细胞,通过双荧光素酶检测系统测定相对荧光素酶活性,并探究其与促黄体素(luteinizing hormone,LH)和促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)的关系;利用生物信息学方法对HSD17B1基因启动子区进行转录结合因子预测。结果显示,本试验成功克隆了3个不同长度的HSD17B1基因启动子片段,并成功构建了双荧光素酶报告载体。经不同长度启动子片段的活性检测发现,pGL-pro-HSD17B1-1500活性最强,证实-866/-1500 bp为HSD17B1基因核心启动子区域,表明该区域对HSD17B1基因转录调控有重要作用。荧光素酶活性检测结果显示,添加LH可增强HSD17B1基因启动子活性。生物信息学分析发现,HSD17B1基因启动子区存在6个转录因子结合位点:Sp1(-2327/-2317 bp)、HOXA4(-2162/-2146 bp)、Sp1(-1409/-1395 bp)、Sp1(-1391/-1380 bp)、Sp1(-1345/-1319 bp)和GATA1(-812/-801 bp),但无CpG岛,有1个TATA-box和2个CAAT-box。本研究成功构建了HSD17B1基因启动子荧光素酶报告载体,确定了HSD17B1基因启动子核心区域,并证明LH可增强启动子活性。

宁夏回、汉族人群HSD17B1基因单核苷酸多态性的分布特征

目的探讨HSD17B1基因三个SNPs位点rs605059、rs676387、rs2676531在宁夏回、汉族人群中的分布特征。方法应用Taq Man基因分型技术分析822例(回族410例,汉族412例)HSD17B1基因三个SNPs位点等位基因频率和基因型频率。结果宁夏回、汉族人群HSD17B1基因rs605059、rs676387位点基因型及等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05);而rs2676531位点基因型及等位基因频率分布在回、汉族间差异有统计学意义(P<0.05);宁夏人群各多态性位点基因型及等位基因频率总体分布与HAPMAP扫描的四个地区人群结果比较,rs605059、rs2676531位点与欧洲人群基因型及等位基因频率总体分布差异有统计学意义(P<0.05);rs676387、rs2676531位点与非洲人群基因型及等位基因频率总体分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论宁夏回、汉族人群HSD17B1基因rs605059、rs676387位点基因型及等位基因频率分布特征相同;HSD17B1的基因型及等位基因频率总体分布存在种族差异。