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RNA pull-down联合质谱分析lncRNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制
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作者 夏童童 马芳 +8 位作者 孙浩原 刘虹麟 张正皓 杨佳琪 张慧萍 吴凯 沈江涌 姜怡邓 李桂忠 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2492-2499,共8页
背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行... 背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行增生性瘢痕组织切除手术患者的新鲜增生性瘢痕皮肤组织和增生性瘢痕旁正常皮肤组织标本,应用免疫荧光技术检测两种皮肤组织冰冻切片中长链非编码RNA HSFAS的表达。应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白,利用GO和KEGG分析长链非编码RNA HSFAS参与增生性瘢痕进展的主要功能和通路,通过catRAPID和RPISeq网站分析确定长链非编码RNA HSFAS与蛋白的靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中的长链非编码RNA HSFAS表达升高(P<0.05);与正常皮肤组织来源成纤维细胞相比,增生性瘢痕组织来源成纤维细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达升高(P<0.05);②RNA pull-down联合质谱技术明确与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白有510个;GO和KEGG分析结果显示:这些蛋白主要涉及RNA剪接和加工、染色体合成和分离、细胞周期等过程,其中涉及RNA剪接和加工的蛋白有支架附着因子B2和DICER1,并且与长链非编码RNA HSFAS的结合分数较高;生物信息学技术分析验证结果显示,长链非编码RNA HSFAS与支架附着因子B2和DICER1蛋白存在相互结合;③结果显示,长链非编码RNA HSFAS可能通过与支架附着因子B2和DICER1蛋白相互结合调控RNA剪接和加工修饰影响基因表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 lncRNA hsfas 成纤维细胞 RNA pull-down 质谱分析
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水稻热激转录因子HsfA2b调控非生物胁迫抗性的功能分析 被引量:1
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作者 邹修为 岳佳妮 +2 位作者 李志宇 戴良英 李魏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期90-98,共9页
【目的】水稻在生长发育过程中,常会受到各种非生物胁迫而严重影响产量。热激转录因子作为植物抗逆过程中的一个重要元件,通过调控一系列胁迫响应基因的表达以提高植物抗逆性。探究水稻热激转录因子OsHsfA2b调控非生物胁迫的功能与初步... 【目的】水稻在生长发育过程中,常会受到各种非生物胁迫而严重影响产量。热激转录因子作为植物抗逆过程中的一个重要元件,通过调控一系列胁迫响应基因的表达以提高植物抗逆性。探究水稻热激转录因子OsHsfA2b调控非生物胁迫的功能与初步机理,为培育水稻抗逆新品种提供了优异基因资源和理论支撑。【方法】通过构建OsHsfA2b过量表达和RNAi的转基因水稻,分别观察水稻幼苗在高温、低温、干旱和高盐处理后的抗逆表型,统计存活率。同时,在逆境胁迫处理后,通过DAB染色检测水稻叶片活性氧(ROS)含量及RT-qPCR检测抗氧化途径相关基因OsSOD和OsCAT的表达量,分析OsHsfA2b对抗氧化途径的调控作用。【结果】在高温、低温、干旱和高盐等非生物胁迫条件下,水稻热激转录因子OsHsfA2b被显著诱导表达。与野生型NPB相比,OsHsfA2b过量表达转基因水稻对非生物胁迫的抗性明显增强,植株损伤程度较轻,存活率提高。相反,OsHsfA2b-RNAi水稻对非生物胁迫更加敏感,植株损伤严重,存活率降低。此外,在非生物胁迫条件下,OsHsfA2b过量表达转基因水稻比NPB和OsHsfA2bRNAi水稻体内活性氧的含量减少,并且OsHsfA2b显著诱导了抗氧化途径相关基因OsSOD和OsCAT的表达,OsHsfA2b参与抑制水稻体内活性氧的积累以降低逆境胁迫诱导的活性氧大量积累对植株的伤害。【结论】非生物胁迫下,水稻热激转录因子OsHsfA2b被显著诱导表达,可通过抗氧化途径正调控水稻对逆境胁迫的抗性。 展开更多
关键词 水稻 HsfA2b 热激转录因子 非生物胁迫 抗性 活性氧
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产业集聚推动农业高质量生产的机制研究:来自专业村的证据 被引量:1
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作者 张哲晰 穆月英 潘彪 《宏观质量研究》 2023年第4期119-128,共10页
推动农业高质量生产是建设农业强国和实现农业现代化的重要命题。新发展阶段中,以专业村为表现形式的产业集聚发展模式能否推动高质量生产、成为促进农业现代化的新出路受到各界关注。依托产业集聚理论,从经验共享、服务共享和空间共享... 推动农业高质量生产是建设农业强国和实现农业现代化的重要命题。新发展阶段中,以专业村为表现形式的产业集聚发展模式能否推动高质量生产、成为促进农业现代化的新出路受到各界关注。依托产业集聚理论,从经验共享、服务共享和空间共享三个维度,对专业村集聚发展模式作用于农户生产技术效率的机理进行系统分析,并运用异质性随机前沿函数模型、分组回归以及样条模型等方法进行实证检验。结果表明:总体来看,专业村通过经验共享、空间共享两个主要维度提高农户生产技术效率,而服务共享发挥的作用相对较弱;具体来看,经验共享、服务共享有利于缩小农户技术效率差异,空间共享则表现出对大规模经营主体效率提升作用更明显的特征。需要注意的是,产业集聚存在“拥挤”效应,低水平的扩容会造成规模不经济。对此,提出欲继续高质量推动专业村建设、发挥产业集聚优势,应将重点置于发挥规模化经营主体的技术示范带动作用,优化农民专业合作社服务能力,强化公共资源配套建设,创建区域特色品牌,实现竞争力提高与农民增收、促进农业高质量发展。 展开更多
关键词 专业村 产业集聚 农业高质量生产 技术效率 HSFA
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GmHSFA1基因克隆及其过量表达提高转基因大豆的耐热性 被引量:22
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作者 陈晓军 叶春江 +6 位作者 吕慧颖 徐民新 李葳 张利明 王超 罗淑萍 朱保葛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1411-1420,共10页
热激转录因子在调节植物对逆境胁迫应答和热激蛋白基因表达方面起重要作用。采用生物信息学和比较基因组学方法结合RACE技术从大豆基因组中克隆到一个新的热激转录因子基因GmHsfA1,其cDNA全长1 781 bp,包含1个1 533 bp的开放阅读框,编... 热激转录因子在调节植物对逆境胁迫应答和热激蛋白基因表达方面起重要作用。采用生物信息学和比较基因组学方法结合RACE技术从大豆基因组中克隆到一个新的热激转录因子基因GmHsfA1,其cDNA全长1 781 bp,包含1个1 533 bp的开放阅读框,编码含有510个氨基酸残基的蛋白质(GenBank登录号为AY458843)。与其他转录因子的分子结构相似,GmHSFA1也含有4个典型的结构功能域-DNA结合域、寡聚域、核定位信号和C端激活域。BLAST分析表明,GmHSFA1与其同源性最高的番茄热激转录因子LpHSFA1之间的氨基酸序列相似性为52.46%。RT-PCR、Northern和遗传转化结果显示:1)GmHsfA1在大豆的不同组织中呈现组成型表达模式;2)常温下转基因大豆植株的GmHsfA1表达水平明显高于非转基因对照;3)GmHsfA1的过量表达激活了转基因大豆植株中热激蛋白基因GmHsp22在非诱导条件下的转录,并加强了高温胁迫下另2个热激蛋白基因GmHsp23和GmHsp70的表达;4)转GmHsfA1大豆植株的耐热温度(达52℃)明显高于非转基因植株。上述结果说明,GmHsfA1的过量表达激活或促进其下游3个热激蛋白基因的转录或表达,明显提高了转基因大豆植株的耐热能力。 展开更多
关键词 大豆 热激转录因子A1(HSFA1) 转基因 热胁迫 过量表达 耐热性
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水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体的构建及遗传转化研究 被引量:7
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作者 刘爱玲 邹杰 +3 位作者 王文芳 周小云 张先文 陈信波 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期225-230,共6页
为研究水稻热激转录因子基因OsHsfA7的功能及其在水稻耐热育种方面的应用价值,本文通过构建水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体获得功能抑制变异材料,从反向遗传学进行基因的功能分析。扩增OsHsfA7c DNA3'编码区470bp片段,分别以反向和正... 为研究水稻热激转录因子基因OsHsfA7的功能及其在水稻耐热育种方面的应用价值,本文通过构建水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体获得功能抑制变异材料,从反向遗传学进行基因的功能分析。扩增OsHsfA7c DNA3'编码区470bp片段,分别以反向和正向插入到中间载体pBSK连接的GUS片段两侧,然后将得到的RNA干扰片段克隆到改造的植物表达载体p1301M,构建以CaMV35S启动子驱动表达的水稻OsHsfA7基因RNA干扰表达载体。将该载体转入根癌农杆菌EHA105后,采用农杆菌介导法进行了水稻日本晴品种的遗传转化,获得了23株具有潮霉素抗性的转基因植株,其中12株经GUS染色呈蓝色并且DNA检测10株已插入目的片段,RNA检测其中6株OsHsfA7基因的表达水平下降甚至未检出。结果说明本研究构建的OsHsfA7基因RNA干扰载体对该基因表达沉默是有效的。 展开更多
关键词 水稻 热激转录因子基因HsfA7 干扰载体
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白桦HSFA4转录因子的克隆及耐盐功能分析 被引量:6
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作者 刘中原 刘峥 +4 位作者 徐颖 刘珊珊 田志兰 解庆军 高彩球 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期69-79,共11页
【目的】热激转录因子(HSF)在植物对非生物胁迫应答中起重要的调节作用。本研究拟从白桦中克隆获得HSFA4基因(命名为BpHSFA4),研究该基因的抗逆功能,为该基因用于林木基因工程育种奠定理论基础。【方法】在白桦转录组中筛选获得1条HSFA... 【目的】热激转录因子(HSF)在植物对非生物胁迫应答中起重要的调节作用。本研究拟从白桦中克隆获得HSFA4基因(命名为BpHSFA4),研究该基因的抗逆功能,为该基因用于林木基因工程育种奠定理论基础。【方法】在白桦转录组中筛选获得1条HSFA4基因,通过RT-PCR克隆获得BpHSFA4基因序列。利用生物信息学工具进行序列分析。利用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分析不同逆境胁迫下BpHSFA4基因在白桦叶、茎和根中的表达模式。构建植物过表达载体pROKⅡ-BpHSFA4和抑制表达载体pFGC5941-BpHSFA4,进行白桦瞬时转化,同时以pROKⅡ瞬时侵染白桦作为对照。分析NaCl胁迫下不同瞬时转化白桦株系的MDA、H2O2、SOD、POD、相对电导率及二氨基联苯胺(DAB)、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)及伊文思蓝(Evans blue)染色情况,以综合评定BpHSFA4基因的耐盐功能。【结果】BpHSFA4基因cDNA全长为1170 bp,编码389个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为44.15 kDa,理论等电点为5.14,具有典型HSF结构域。非生物胁迫(NaCl、PEG6000、镉、高温和低温)条件下和激素(ABA、GA3和JA)处理下,BpHSFA4基因的表达均发生了不同程度的改变,且每种处理后至少有1个时间点发生了明显上调或者下调,其中盐胁迫下表达变化尤为明显。3种瞬时表达白桦株系中的BpHSFA4基因的表达分析结果显示成功获得了瞬时过表达转基因株系(OE)和抑制表达转基因株系(SE)。进一步对不同转基因白桦株系的生理指标和生理染色进行分析,结果显示:NaCl胁迫条件下,过表达BpHSFA4植株H2O2含量、MDA含量和相对电导率明显低于对照植株,抑制表达BpHSFA4植株的H2O2含量、MDA含量和相对电导率则明显高于对照植株;过表达BpHSFA4植株的SOD活性和POD活性明显高于对照植株,而抑制表达BpHSFA4植株的SOD活性和POD活性明显低于对照株系;NBT、DAB染色结果与H2O2含量测定结果一致,显示OE植株的着色明显比对照植株浅,而抑制表达株系着色明显比对照植株深,Evans blue染色结果和MDA含量测定结果一致。【结论】BpHSFA4基因能对非生物胁迫(NaCl、PEG6000、镉、高温和低温)和激素(ABA、GA3和JA)处理做出应答,特别是盐胁迫条件下,应答强烈,该基因可能参与白桦耐盐胁迫应答。在盐胁迫条件下,瞬时过表达BpHSFA4基因株系能通过提高SOD和POD等保护酶的活性从而增强活性氧清除能力、降低膜脂氧化程度,减少细胞受损或细胞死亡,进而提高白桦的耐盐能力。本研究初步证实BpHSFA4基因是一个耐盐胁迫应答候选基因。 展开更多
关键词 白桦 HSFA4转录因子 基因表达 耐盐
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番茄HsfA3基因功能验证中相关植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 李振军 张丽丽 李景富 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期30-35,共6页
以pBI121质粒为基本载体,分别构建了由35S启动子驱动的用于番茄HsfA3基因亚细胞定位(Subcellular location)和遗传转化的植物表达载体pBI-sl-A3、pBI-A3。将pBI121质粒上的35S启动子进行改造,分别构建了植物表达载体pBI-mini35S、pBI-HS... 以pBI121质粒为基本载体,分别构建了由35S启动子驱动的用于番茄HsfA3基因亚细胞定位(Subcellular location)和遗传转化的植物表达载体pBI-sl-A3、pBI-A3。将pBI121质粒上的35S启动子进行改造,分别构建了植物表达载体pBI-mini35S、pBI-HSE-mini35S,用于研究热激转录因子HsfA3与热激元件(Heat shockelements,HSEs)的互作。通过冻融法将以上4种重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404中,用于后续试验,为进一步研究HsfA3基因在耐热中的功能和分子生物学机制奠定了基础。 展开更多
关键词 番茄 HsfA3 35S启动子 植物表达载体
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拟南芥热激因子HsfA1a部分氨基酸的表达与纯化 被引量:2
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作者 郭丽红 王定康 +2 位作者 袁燕 刘开庆 张乐民 《昆明学院学报》 2009年第3期50-52,共3页
以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1 a C端氨基酸331到氨基酸486(简称ΔHsfA1 a)的大肠杆菌E coliM15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达ΔHsfA1 a,再通过N i-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的ΔHsfA1 a,通过SDS-PAGE电泳分... 以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1 a C端氨基酸331到氨基酸486(简称ΔHsfA1 a)的大肠杆菌E coliM15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达ΔHsfA1 a,再通过N i-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的ΔHsfA1 a,通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的ΔHsfA1 a. 展开更多
关键词 拟南芥HsfA1a 部分氨基酸 表达 纯化
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马铃薯热激转录因子HsfA3基因的克隆及其耐热性功能分析 被引量:4
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作者 唐锐敏 贾小云 +2 位作者 朱文娇 印敬明 杨清 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期672-683,共12页
马铃薯在田间生长时常会受到各种不利环境的影响。夏季高温常导致马铃薯块茎产量和质量的下降。因此,阐明马铃薯对热胁迫的响应机制,发掘耐热相关基因,对马铃薯耐热性的提高意义重大。热激转录因子(heat shock transcription factor A3,... 马铃薯在田间生长时常会受到各种不利环境的影响。夏季高温常导致马铃薯块茎产量和质量的下降。因此,阐明马铃薯对热胁迫的响应机制,发掘耐热相关基因,对马铃薯耐热性的提高意义重大。热激转录因子(heat shock transcription factor A3,HsfA3)在植物机体内的活动影响到大量功能基因的表达,在植物响应热胁迫的过程中发挥重要的作用。为了研究马铃薯中HsfA3的结构和功能,本研究通过RT-PCR从马铃薯品种Désirée中克隆到长度为1506 bp的StHsfA3基因,编码501个氨基酸。StHsfA3的相对分子量为55.23 kD,理论等电点为4.9,属于亲水性蛋白。构建StHsfA3-pBA002过表达载体,并转化马铃薯植株,共鉴定得到5个独立的StHsfA3过表达转基因马铃薯株系。通过对转基因植株和非转基因植株叶片中的相对含水量(relative water content,RWC)以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的测定发现,在高温胁迫下,转基因植株叶片中的RWC显著高于非转基因植株,MDA含量显著低于非转基因植株,说明StHsfA3在耐热过程中起到正调控作用。对StHsfA3、StHsp26-CP和StHsp70在不同马铃薯植株中的表达分析显示,StHsfA3过量表达诱导了StHsp26-CP和StHsp70的表达,预示着StHsfA3可能协同StHsp26-CP和StHsp70来增强过表达转基因株系的耐热性。 展开更多
关键词 马铃薯 热胁迫 HsfA3 基因克隆 遗传转化 功能分析
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青杄转录因子PwHAP5及其同源蛋白AtHAP5下游靶基因的鉴定
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作者 苗雅慧 游韩莉 +1 位作者 郜银涛 张凌云 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期6-12,16,共8页
利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体... 利用分子生物学手段,对青杄PwHAP5及其拟南芥同源基因AtHAP5的下游调控基因进行探究,旨在丰富青杄以及拟南芥中HAP5转录因子的调控网络。通过转录激活活性分析,发现PwHAP5和AtHAP5均无转录激活活性。两个酵母单杂交体系(pHis2和pAbAi体系酵母单杂交实验)显示A37、HSFA2启动子全长、只含有CCAAT box的区域均不能与PwHAP5和AtHAP5直接结合。EMSA试验结果表明,AtHAP5与A37和HSFA2启动子在体外不能直接结合;单(双)荧光素酶试验结果表明,AtHAP5对HSFA2具有负调控作用,但对A37表达无影响。通过RT-qPCR试验检测在异源过表达OE-PwHAP5植株中预测靶基因的表达量,结果显示A37与HSFA2相对表达量均无显著变化,而在同源过表达植株OE-AtHAP5中,HSFA2的相对表达量下降。这些结果显示AtHAP5在体内负调控HSFA2表达,而PwHAP5在进化上与AtHAP5的功能存在差异。 展开更多
关键词 青杄 转录因子 PwHAP5 AtHAP5 HSFA2
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Heat Shock Factor A1s are required for phytochrome-interacting factor 4-mediated thermomorphogenesis in Arabidopsis
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作者 Bingjie Li Shimeng Jiang +7 位作者 Liang Gao Wenhui Wang Haozheng Luo Yining Dong Zhihua Gao Shuzhi Zheng Xinye Liu Wenqiang Tang 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2024年第1期20-35,共16页
Thermomorphogenesis and the heat shock(HS)response are distinct thermal responses in plants that are regulated by PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR 4(PIF4)and HEAT SHOCK FACTOR A1s(HSFA1s),respectively.Little is known ab... Thermomorphogenesis and the heat shock(HS)response are distinct thermal responses in plants that are regulated by PHYTOCHROME-INTERACTING FACTOR 4(PIF4)and HEAT SHOCK FACTOR A1s(HSFA1s),respectively.Little is known about whether these responses are interconnected and whether they are activated by similar mechanisms.An analysis of transcriptome dynamics in response to warm temperature(28℃)treatment revealed that 30 min of exposure activated the expression of a subset of HSFA1 target genes in Arabidopsis thaliana.Meanwhile,a loss-of-function HSFA1 quadruple mutant(hsfa1-cq)was insensitive to warm temperature-induced hypocotyl growth.In hsfa1-cq plants grown at 28℃,the protein and transcript levels of PIF4 were greatly reduced,and the circadian rhythm of many thermomorphogenesis-related genes(including PIF4)was disturbed.Additionally,the nuclear localization of HSFA1s and the binding of HSFA1d to the PIF4 promoter increased following warm temperature exposure,whereas PIF4 overexpression in hsfa1-cq partially rescued the altered warm temperature-induced hypocotyl growth of the mutant.Taken together,these results suggest that HSFA1s are required for PIF4 accumulation at a warm temperature,and they establish a central role for HSFA1s in regulating both thermomorphogenesis and HS responses in Arabidopsis. 展开更多
关键词 HSFA1 PIF4 thermomorphogenesis
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HY5-HDA9 orchestrates the transcription of HsfA2 to modulate salt stress response in Arabidopsis 被引量:2
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作者 Jiaheng Yang Xiao Qu +14 位作者 Tao Li Yixiang Gao Haonan Du Lanjie Zheng Manchun Ji Paifeng Zhang Yan Zhang Jinxin Hu Liangyu Liu Zefu Lu Zijian Yang Huiyong Zhang Jianping Yang Yongqing Jiao Xu Zheng 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期45-63,共19页
Integration of light signaling and diverse abiotic stress responses contribute to plant survival in a changing environment.Some reports have indicated that light signals contribute a plant’s ability to deal with heat... Integration of light signaling and diverse abiotic stress responses contribute to plant survival in a changing environment.Some reports have indicated that light signals contribute a plant’s ability to deal with heat,cold,and stress.However,the molecular link between light signaling and the saltresponse pathways remains unclear.We demonstrate here that increasing light intensity elevates the salt stress tolerance of plants.Depletion of HY5,a key component of light signaling,causes Arabidopsis thaliana to become salinity sensitive.Interestingly,the small heat shock protein(sHsp)family genes are upregulated in hy5-215 mutant plants,and HsfA 2 is commonly involved in the regulation of these sH sps.We found that HY5directly binds to the G-box motifs in the HsfA2promoter,with the cooperation of HISTONE DEACETYLASE 9(HDA9),to repress its expression.Furthermore,the accumulation of HDA9 and the interaction between HY5 and HDA9 are significantly enhanced by salt stress.On the contrary,high temperature triggers HY5 and HDA9 degradation,which leads to dissociation of HY5-HDA9from the HsfA2 promoter,thereby reducing salt tolerance.Under salt and heat stress conditions,fine tuning of protein accumulation and an interaction between HY5 and HDA9 regulate HsfA2 expression.This implies that HY5,HDA9,and HsfA2play important roles in the integration of light signaling with salt stress and heat shock response. 展开更多
关键词 HDA9 heat shock HsfA2 HY5 light signaling salt stress small Hsps temperature
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The spliceophilin CYP18-2 is mainly involved in the splicing of retained introns under heat stress in Arabidopsis
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作者 Areum Lee Hyun Ji Park +6 位作者 Seung Hee Jo Haemyeong Jung Hyun-Soon Kim Hyo-Jun Lee Youn-Sung Kim Choonkyun Jung Hye Sun Cho 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期1113-1133,共21页
Peptidyl-prolyl isomerase-like 1(PPIL1)is associated with the human spliceosome complex.However,its function in pre-mRNA splicing remains unclear.In this study,we show that Arabidopsis thaliana CYCLOPHILIN 18-2(AtCYP1... Peptidyl-prolyl isomerase-like 1(PPIL1)is associated with the human spliceosome complex.However,its function in pre-mRNA splicing remains unclear.In this study,we show that Arabidopsis thaliana CYCLOPHILIN 18-2(AtCYP18-2),a PPIL1 homolog,plays an essential role in heat tolerance by regulating pre-mRNA splicing.Under heat stress conditions,AtCYP18-2 expression was upregulated in mature plants and GFP-tagged AtCYP18-2 redistributed to nuclear and cytoplasmic puncta.We determined that AtCYP18-2 interacts with several spliceosome complex B^(ACT)components in nuclear puncta and is primarily associated with the small nuclear RNAs U5 and U6 in response to heat stress.The AtCYP18-2 loss-of-function allele cyp18-2 engineered by CRISPR/Cas9-mediated gene editing exhibited a hypersensitive phenotype to heat stress relative to the wild type.Moreover,global transcriptome profiling showed that the cyp18-2 mutation affects alternative splicing of heat stress–responsive genes under heat stress conditions,particularly intron retention(IR).The abundance of most intron-containing transcripts of a subset of genes essential for thermotolerance decreased in cyp18-2 compared to the wild type.Furthermore,the intron-containing transcripts of two heat stress-related genes,HEAT SHOCK PROTEIN 101(HSP101)and HEAT SHOCK FACTOR A2(HSFA2),produced functional proteins.HSP101-IR-GFP localization was responsive to heat stress,and HSFA2-Ⅲ-IR interacted with HSF1 and HSP90.1 in plant cells.Our findings reveal that CYP18-2 functions as a splicing factor within the B~(ACT)spliceosome complex and is crucial for ensuring the production of adequate levels of alternatively spliced transcripts to enhance thermotolerance. 展开更多
关键词 alternative splicing CYP18-2 HSFA2-Ⅲ intron retention spliceophilin spliceosome complex B~(ACT) THERMOTOLERANCE
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白魔芋热激转录因子AaHSFA2a和AaHSFA2c的分离、亚细胞定位及表达分析 被引量:3
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作者 张蓓 胡文霞 +4 位作者 靳燚 王志敏 王凯 张盛林 牛义 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第24期8005-8012,共8页
以白魔芋(Amorphophallus albus)为材料,分离得到AaHSFA2a和AaHSFA2c基因的全长cDNA,序列比对分析发现,AaHSFA2a基因的开放阅读框(ORF)为1 023 bp,可编码340个氨基酸残基的多肽;AaHSFA2c基因含有一个内含子,开放阅读框为1 026 bp,可编码... 以白魔芋(Amorphophallus albus)为材料,分离得到AaHSFA2a和AaHSFA2c基因的全长cDNA,序列比对分析发现,AaHSFA2a基因的开放阅读框(ORF)为1 023 bp,可编码340个氨基酸残基的多肽;AaHSFA2c基因含有一个内含子,开放阅读框为1 026 bp,可编码341个氨基酸残基的多肽。亚细胞定位结果显示,AaHSFA2a和AaHSFA2c蛋白均定位在细胞核中。实时荧光定量结果表明,AaHSFA2a和AaHSFA2c基因在白魔芋叶中的表达量明显高于根和球茎,均在热处理1 h时达到表达顶峰,并且AaHSFA2a基因的相对表达量明显高于AaHSFA2c基因。因此,推测AaHSFA2a和AaHSFA2c参与了魔芋热应激响应过程。 展开更多
关键词 白魔芋(Amorphophallus albus) HSFA2a HSFA2c 亚细胞定位 QRT-PCR
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热激转录因子HSFA1d参与植物内质网胁迫应答 被引量:3
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作者 张双双 刘建祥 陆孙杰 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2016年第4期441-448,共8页
环境胁迫是全球范围内影响植物正常生长发育的重要因素之一.研究植物的抗逆机制,运用生物技术提高作物的抗逆性,不仅具有重要的科学意义,也对农业生产具有重要的促进作用.内质网是蛋白合成和加工的重要场所,当环境胁迫引起内质网中错误... 环境胁迫是全球范围内影响植物正常生长发育的重要因素之一.研究植物的抗逆机制,运用生物技术提高作物的抗逆性,不仅具有重要的科学意义,也对农业生产具有重要的促进作用.内质网是蛋白合成和加工的重要场所,当环境胁迫引起内质网中错误折叠蛋白积累时,就会引起一个保守的未折叠蛋白应答(UPR)机制,帮助细胞达到一个新的平衡状态.热激转录因子HSFA1s在植物细胞质热激反应过程中起着重要的作用.本研究证明,拟南芥HSFA1d的表达受内质网胁迫的诱导,过表达HSFA1d的转基因植株对内质网胁迫诱导剂衣霉素(TM)具有一定程度的抗性.统计显示,在TM板上生长的转基因植株出真叶率明显提高.亚细胞定位显示,HSFA1d在正常条件下定位于细胞质中,当受到内质网胁迫时,HSFA1d从细胞质转移到细胞核中.HSFA1d可以调控UPR下游基因的表达.这些结果表明,经典的热激反应相关热激转录因子HSFA1d也参与了植物的内质网未折叠蛋白应答过程. 展开更多
关键词 拟南芥 HSFA1d 内质网胁迫 未折叠蛋白应答 高温胁迫
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野生湖北百合HSFA2耐热基因的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 蒋瑶 陈文波 陈其兵 《北方园艺》 CAS 北大核心 2022年第22期67-73,共7页
以黔东南州野生百合叶片为试材,采用RACE及荧光定量PCR技术,研究了野生百合HSFA2耐热基因的克隆及表达的影响,以期为黔东南州野生百合耐热能力提高及抗性改良提供参考依据。结果表明:获得1435 bp HSFA2全长基因序列,该基因包含5′-UTR 7... 以黔东南州野生百合叶片为试材,采用RACE及荧光定量PCR技术,研究了野生百合HSFA2耐热基因的克隆及表达的影响,以期为黔东南州野生百合耐热能力提高及抗性改良提供参考依据。结果表明:获得1435 bp HSFA2全长基因序列,该基因包含5′-UTR 77 bp、3′-UTR 155 bp和ORF 1203 bp,可编码400个氨基酸,蛋白质分子量为45.3 kD。LlHSFA2基因氨基酸序列与毛果杨、小叶杨同源性分别为87.56%和83.64%,表明其具有典型的热激转录因子结构域,DNA结合域在来源于不同物种中的HSF2A蛋白均比较保守。荧光定量结果表明,LlHSFA2基因在根、鳞茎、叶组织里均有表达且存在差异,但在叶中的表达量明显高于根和鳞茎。经热激处理3~12 h,HSFA2基因其表达量随着热激时间的增长呈上升趋势,但在24 h时其表达量下降但仍然高于对照。超量HSFA2转化成功株系比野生型均有不同程度地超量表达,其中表达量最高的株系为OE-5和OE-7,对其进行热激处理后,其光化学淬灭系数、叶绿素含量均高于野生型对照,表现出更好的耐热性,这与模式植物拟南芥HSFA2的结果类似,说明HSFA2在不同植株中均具有增强耐热性功能,是一个保守的植物适应高温的正调控因子。 展开更多
关键词 野生百合 HSFA2基因 基因表达 耐热性
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HsfAld, a Protein Identified via FOX Hunting Using Thellungiella salsuginea cDNAs Improves Heat Tolerance by Regulating Heat-Stress-Responsive Gene Expression 被引量:5
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作者 Yukari Higashi Naohiko Ohama +11 位作者 Tomoko Ishikawa Taku Katori Ayaka Shimura Kazuya Kusakabe Kazuko Yamaguchi-Shinozaki Junko Ishida Maho Tanaka Motoaki Seki Kazuo Shinozaki Yoichi Sakata Takahisa Hayashi Teruaki Taji 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2013年第2期411-422,共12页
Thellungiella salsuginea (formerly T. halophila), a species closely related to Arabidopsis (Arabidopsis thali-ana), is tolerant not only to high salt levels, but also to chilling, freezing, and ozone. Here, we rep... Thellungiella salsuginea (formerly T. halophila), a species closely related to Arabidopsis (Arabidopsis thali-ana), is tolerant not only to high salt levels, but also to chilling, freezing, and ozone. Here, we report that T. salsuginea also shows greater heat tolerance than Arabidopsis. We identified T. salsuginea HsfAld (TsHsfAld) as a gene that can confer marked heat tolerance on Arabidopsis. TsHsfAld was identified via Full-length cDNA Over-eXpressing gene (FOX) hunt-ing from among a collection of heat-stress-related T. salsuginea cDNAs. Transgenic Arabidopsis overexpressing TsHsfAld showed constitutive up-regulation of many genes in the Arabidopsis AtHsfA1 regulon under normal growth tempera-ture. in Arabidopsis mesophyll protoplasts, TsHsfAld was localized in both the nucleus and the cytoplasm. TsHsfAld also interacted with AtHSP90, which negatively regulates AtHsfAls by forming HsfA1-HSP90 complexes in the cytoplasm. It is likely that the partial nuclear localization of TsHsfAld induced the expression of the AtHsfAld regulon in the transgenic plants at normal temperature. We also discovered that transgenic Arabidopsis plants overexpressing AtHsfAldwere more heat-tolerant than wild-type plants and up-regulated the expression of the HsfAld regulon, as was observed in TsHsfAld-overexpressing plants. We propose that the products of both TsHsfAld and AtHsfAld function as positive regulators of Arabidopsis heat-stress response and would be useful for the improvement of heat-stress tolerance in other plants. 展开更多
关键词 Thellungiella salsuginea heat-stress tolerance HsfA1 FOX hunting.
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Brassinosteroids promote thermotolerance through releasing BIN2-mediated phosphorylation and suppression of HsfA1 transcription factors in Arabidopsis
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作者 Jinyu Luo Jianjun Jiang +1 位作者 Shiyong Sun Xuelu Wang 《Plant Communications》 SCIE 2022年第6期282-298,共17页
High temperature adversely affects plant growth and development.The steroid phytohormones brassinosteroids(BRs)are recognized to play important roles in plant heat stress responses and thermotolerance,but the underlyi... High temperature adversely affects plant growth and development.The steroid phytohormones brassinosteroids(BRs)are recognized to play important roles in plant heat stress responses and thermotolerance,but the underlying mechanisms remain obscure.Here,we demonstrate that the glycogen synthase kinase 3(GSK3)-like kinase BRASSINOSTEROID INSENSITIVE2(BIN2),a negative component in the BR signaling pathway,interacts with the master heat-responsive transcription factors CLASS A1 HEAT SHOCK TRANSCRIPTION FACTORS(HsfA1s).Furthermore,BIN2 phosphorylates HsfA1d on T263 and S56 to suppress its nuclear localization and inhibit its DNA-binding ability,respectively.BR signaling promotes plant thermotolerance by releasing the BIN2 suppression of HsfA1d to facilitate its nuclear localization and DNA binding.Our study provides insights into the molecular mechanisms by which BRs promote plant thermotolerance by strongly regulating HsfA1d through BIN2 and suggests potential ways to improve crop yield under extreme high temperatures. 展开更多
关键词 BRASSINOSTEROIDS THERMOTOLERANCE BIN2 HsfA1d PHOSPHORYLATION
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