活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响

目的观察活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响。方法活血解毒方中药冻干粉干预IFN-γ+TRAIL联合诱导的HSG细胞凋亡,以白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)作为阳性对照组,实时荧光定量(quantitative real-time fluorescence,PCR)及蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞凋亡内源性途径中及自噬相关蛋白与m RNA的表达、激光共聚焦检测自噬情况。结果与空白组比较,模型组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白相对表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,两治疗组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显降低(P<0.01),Bcl-2蛋白相对表达量明显升高(P<0.01);与TGP组比较,中药组LC3B蛋白相对表达量降低(P<0.05);与空白组比较,模型组Bax mRNA相对表达量明显升高(P<0.01),Bcl-2m RNA相对表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,两治疗组Bax mRNA、LC3B mRNA相对表达量明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA相对表达量均有不同程度的升高(PTGP组<0.05,P中药组<0.01);与TGP组比较,中药组Bcl-2 mRNA相对表达量明显升高(P<0.01);空白组呈现正常的自噬过程,模型组表现为大量的自噬溶酶体和自噬体聚集物,两治疗组表现为相对较少的自噬体和的自噬溶酶体聚集物,且中药组自噬程度更低。结论活血解毒方可以通过调节内源性途径延缓细胞凋亡及自噬的发生。

活血解毒方对HSG细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的观察活血解毒方对HSG细胞凋亡及炎症因子表达的影响。方法IFN-γ+TRAIL联合诱导的HSG细胞凋亡,活血解毒方作为中药组药物干预,以白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)作为阳性对照组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,免疫组化(mmunohistochemistry,IHC)检测各组Fas、Fas L、Cyt-C蛋白OD值,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度。结果与空白组相比,模型组能有效促进细胞凋亡(P<0.01),模型组Fas、Fas L、Cyt-C、蛋白OD值、TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,TGP组和中药组Fas、Fas L、Cyt-C mRNA相对表达量均明显降低(P<0.01);中药组Cyt-C mRNA较TGP组相对表达量降低(P<0.05);与模型组相比,TGP组和中药组Fas、Fas L、Cyt-C蛋白OD值均明显降低(P<0.01);中药组与TGP组相比,Cyt-C蛋白OD值明显降低(P<0.01);与模型组相比,TGP组和中药组IL-6、IL-1β含量均明显降低(P<0.01);两治疗组TNF-α含量均有不同程度的降低(PTGP组<0.05,P中药组<0.01);与TGP组相比,中药组TNF-α、IL-1β含量明显降低(P<0.01)。结论活血解毒方能有效效抑制HSG细胞凋亡及炎症相关因子的表达。

细胞增殖抑制基因HSG/Mfn2

细胞增殖抑制基因(HSG,又称线粒体融合蛋白-2,Mfn2)是我国学者陈光慧利用差异显示技术得到的一个新基因,其编码产物HSG/Mfn2可通过抑制ERK/MAPK信号转导途径使细胞周期停滞在G0/G1期,抑制细胞增殖;还可与平滑肌α肌动蛋白相互作用参与血管平滑肌细胞再分化,在血管平滑肌细胞表型调节中起重要作用。另外,HSG/Mfn2具有促进线粒体融合的功能,与线粒体形态、结构和功能有着密切关系。HSG/Mfn2对血管增殖紊乱和其他过度增殖性疾病的发病及治疗具有重要的意义。

大鼠增殖抑制基因通过Ras-Raf-MEK-ERK信号通路抑制C6胶质瘤细胞增殖

目的探讨Ras-Raf-MEK-ERK通路在大鼠增殖抑制基因(r HSG)抑制C6大鼠胶质瘤细胞增殖中的作用。方法用r HSG过表达腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP)转染C6细胞后,流式细胞仪分析腺病毒转染效率;Western blot检测r HSG蛋白表达变化;流式细胞仪分析细胞周期;qRT-PCR检测H-ras、N-ras、K-ras、Erk1、Erk2基因mRNA表达变化;Western blot检测H-ras、N-ras、K-ras、p-Erk1/2、Erk1/2、p-Rb、Rb蛋白表达变化。结果腺病毒载体能高效的转染C6细胞并表达GFP蛋白,Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白表达显著高于未转染组(PBS)和AdvGFP组,C6细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.01);经IGF-1刺激后,Adv-r HSG-GFP组细胞H-ras、N-ras、K-ras、Erk1、Erk2基因的mRNA和蛋白表达水平与PBS组和Adv-GFP组无明显差异(P>0.05);Adv-r HSG-GFP组细胞过表达r HSG能显著抑制IGF-1诱导的Erk1/2的活化,p-Erk1/2蛋白表达量显著低于其余两组(P<0.01);同时其p-Rb蛋白的表达量显著低于其余两组(P<0.01),而Rb蛋白表达量3组无明显差异(P>0.05)。结论 r HSG可能通过抑制Ras-Raf-MEK-ERK信号通路的激活抗C6恶性胶质瘤细胞增殖。

活血解毒方对HSG细胞凋亡中Caspase家族及关键蛋白的影响

目的:观察活血解毒方对HSG细胞凋亡中Caspase家族及关键蛋白的影响。方法:IFN-γ+TRAIL联合诱导的HSG细胞凋亡,活血解毒方作为中药组药物干预,以白芍总苷(TGP)作为阳性对照组,实时荧光定定量(qPCR)检测各组Caspase(3,8,9)mRNA表达,免疫组化(IHC)检测各组Caspase(3,8,9)蛋白OD值,基因沉默Caspase-8,流式细胞术检测各组细胞Caspase-8的凋亡率。结果:与空白组比较,模型组Caspase(3,8,9)mRNA相对表达量及蛋白OD值显著升高(P<0.01);与模型组比较,TGP组和中药组Caspase(3,8,9)mRNA相对表达量均显著降低,Caspase-3蛋白OD值均显著降低(P<0.01),中药组Caspase(8,9)蛋白OD值显著降低(P<0.01,P<0.05);与TGP组比较,中药组Caspase(3,8,9)mRNA相对表达量显著降低(P<0.01);与空白组比较,siRNA NC和siRNA Caspase-8组HSG细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与siRNA NC组比较,siRNA-Caspase-8组HSG细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与siRNA NC+IFN-γ+TRAIL+中药组比较,siRNA-Caspase-8+IFN-γ+TRAIL组HSG细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与siRNA-Casepase-8+IFN-γ+TRAIL组比较,siRNA-Caspase-8+IFN-γ+TRAIL+中药组HSG细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:活血解毒方能有效抑制Caspase家族细胞凋亡相关因子,这一过程可能是通过下调Caspase-8的表达实现的。

细胞增殖抑制基因对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖与凋亡的影响

目的 观察细胞增殖抑制基因（HSG）对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖与凋亡的影响.方法 制备携带HSG基因的重组腺病毒载体,瞬时转染至大鼠肝星状细胞HSC-T6,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测细胞中HSG信使核糖核酸（mRNA）及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析HSG对细胞周期和凋亡状态的影响,Western blot检测HSG对细胞周期蛋白激酶抑制剂p21、p27及细胞增殖核抗原（PCNA）的作用.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染组HSG的mRNA（14.93 ±1.10比1.03±0.33,14.93±1.10比1.00 ±0.15）和蛋白表达量明显增加（P＜0.05）;转染后细胞生长减缓,细胞增殖活性明显受到抑制（P＜0.05）;转染组G0/G1期细胞比例和凋亡率分别为[（66.57±1.29）％、（23.88 ±0.96）％],与空白对照组[（49.32±2.86）％、（3.38±0.16）％]和阴性对照组[（52.46±3.17）％、（3.54±0.24）％]比较明显增高（P＜0.05）;转染后细胞周期调控蛋白p21、p27表达升高,PCNA表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 HSG基因过表达可有效的抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6的增殖,使其阻滞于G0/G1期并诱导其凋亡,并可能是通过参与细胞周期的调节发挥作用.