温热对BGC-823胃癌细胞HSP70表达及超微结构的影响

目的:探讨热处理BGC-823人胃癌细胞后,HSP70表达与细胞凋亡及超微结构改变的关系.方法:采用MTT法及流式细胞术对BGC-823胃癌细胞株在42℃及43℃两个温度,分别热处理2、7、12h后,进行细胞增生、凋亡及HSP表达测定,同时在透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构特点.结果:高热对肿瘤细胞的杀伤作用明显,各加热组均可使BGC-823细胞高表达HSP70,在43℃条件下热休克7h后,HSP70表达量最高,并与细胞的凋亡有关.随着时间延长,对肿瘤细胞超微结构的影响加大.大多数细胞表现出染色质浓缩、DNA分裂的形态学特征.结论:热处理对肿瘤细胞具有杀伤作用,43℃/7h为诱导BGC-823细胞凋亡的最适宜条件,凋亡是BGC-823细胞热诱导死亡的重要机制,热处理后HSP70过表达可能与肿瘤细胞凋亡有关.

不同强度冷应激对大鼠肌肉、脾脏和肝脏中HSP70表达的影响

通过两个低温温度段对健康Wistar大鼠进行冷应激试验,利用免疫印迹技术检验肌肉、脾脏和肝脏中HSP70表达的相对变化情况,探讨不同时间和强度冷应激条件下,3种组织中HSP70表达的情况以及通过HSP70表达量的变化看是否可以将其作为评估冷应激的指标.正常饲养的大鼠环境温度为(20±1)℃,而实验组大鼠分别在(0±1)℃和(10±1)℃环境下进行低温冷应激,然后在冷应激后不同时间宰杀取组织,利用Western-blotting检测HSP70的表达量.结果表明:(1)在(0±1)℃急性冷应激条件下,随着冷应激时间的延长,肌肉和脾脏中HSP70的表达持续增加,与对照组(CK)相比,差异显著(P<0.05);(2)在(10±1)℃慢性冷应激条件下,仅1wk肌肉组中HSP70的表达增加(P<0.05),其它情况下各组织中HSP70的表达与CK相比无显著差异(P>0.05).上述结果说明,相应强度的冷应激可以诱导机体的HSP70表达,并且随时间延长,HSP70的表达增加,可以考虑将HSP70作为监测大鼠应激的指标.

HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系

【目的】探索热应激蛋白90(HSP90)表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液(编号1～9),测定新鲜精液指标(活力、形态、活率和密度),评定其品质,合格的精液样品经过冷冻-解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs(Low freezing resistance teams)2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90ku的蛋白表达量显著高于LFTs组(P<0.05),经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。

HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究

背景与目的:对人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中HSP70基因的表达进行研究,以了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供依据。材料与方法:由医院手术室提供癌组织(胃癌、食道癌、宫颈癌)样本,分离出癌组织、癌旁组织和正常组织,分别按异硫氰酸胍法提取RNA,并进行1%琼脂糖电泳,再将RNA从凝胶中转移到(Northernblot)滤膜中,之后采用人的HSP70基因探针P17与人的胃癌、食道癌及宫颈癌的癌组织中提取的RNA进行Northern杂交。结果:从胃癌、食道癌、宫颈癌样本分离的癌组织均出现了较相应正常组织强的杂交信号。结论:HSP70基因癌组织中高表达,表明该基因在组织癌变过程中起着重要的作用。从而为了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供了有价值的证据。

甜菜夜蛾HSP90基因克隆及高温胁迫下其表达量的变化

为阐明热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)幼虫抵抗高温过程中的作用,克隆了其HSP90基因cDNA全长序列,并检测了在系列高温胁迫下不同龄期幼虫体内其相对表达量。根据已报道的热激蛋白90基因序列同源性设计简并引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了甜菜夜蛾HSP90基因全长cDNA(GenBank登录号FJ862050)。该cDNA序列开放阅读框长2154bp,编码717个氨基酸,预测的相对分子量和等电点分别为82.6kD和5.0。该序列具有HSP90家族的典型特征和特殊的功能结构域,并且与多种生物的HSP90基因序列有较高的同源性。为了研究HSP90抵抗高温的作用,构建荧光定量RT-PCR体系,检测了37,39,41,43和45℃胁迫下甜菜夜蛾不同龄期幼虫体内HSP90表达量的变化。结果表明,高温胁迫对甜菜夜蛾幼虫体内的HSP90表达具有明显的诱导作用。幼虫体内HSP90表达量随着温度升高呈增加的趋势。43℃和45℃胁迫下,各龄幼虫体内HSP90的表达量均显著高于常温(P<0.05),但不同龄期之间没有显著差异。这说明HSP90在甜菜夜蛾幼虫抗高温中起到重要作用。

葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响

目的:探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响。方法:采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对脑组织用免疫组化SP法作Hsp70染色,观察其Hsp70表达情况。结果:葛根素干预组Hsp70表达强度显著强于单纯缺血组(P<001)。结论:葛根素有上调大鼠急性脑缺血损伤时Hsp70表达的作用。

热应激对小鼠胚胎细胞HSP70表达和超微结构的影响

本研究旨在确定体外培养的小鼠胚胎细胞合成HSP70的时期,研究热应激对该阶段胚胎细胞超微结构的影响。将合子和体外发育至2-细胞、4-细胞、8～16-细胞及囊胚阶段的胚胎分别进行37、39和41℃的热应激处理,用免疫荧光细胞化学法检测胚胎细胞中HSP70的诱导表达;将体外培养至早期囊胚的小鼠胚胎分别施以39℃2h和41℃2h处理,分别在热应激后0和2h时收集胚胎,制作超薄切片,用电子显微镜观察胚胎细胞的超微结构变化。在各细胞期胚胎中,37℃组胚胎HSP70表达阴性(-);39℃组胚胎,从8～16-细胞开始呈现弱表达(+),囊胚呈阳性表达(++);41℃组的胚胎从4-细胞开始呈现弱阳性表达(+),8～16-细胞胚胎和囊胚呈阳性表达(++)。39和41℃热应激处理的小鼠早期囊胚超微结构和对照组均发生明显的变化,但经37℃恢复培养2h后,39℃组胚胎的各细胞器超微结构恢复正常,而41℃组胚胎未能恢复。结果表明,小鼠胚胎从4-细胞期有HSP70的诱导合成,在囊胚期诱导合成最多;热应激使胚胎亚细胞结构出现退行性变化,轻度退行性变化是可逆的。

宰后藏羊肉Hsp70表达量变化及其与肉品质相关性分析

为研究欧拉藏羊肉宰后成熟过程背最长肌中热休克蛋白Hsp70表达量的变化及其与肉品质间的关系,选取了24头甘南欧拉藏母羊,宰后在4℃环境中成熟,在成熟过程的不同时间点(2、12、24、48、72、120、168 h)进行pH值、L~*、a~*、b~*、剪切力、系水率、肌原纤维小片化指数(MFI)、糖原含量、Hsp70表达量的测定,并进行Hsp70表达量与肉品质指标的相关性分析。结果表明:Hsp70表达量与MFI呈极显著负相关(P<0.01),与L~*呈显著负相关(P<0.05),与剪切力、糖原含量呈显著正相关(P<0.05),与系水率呈极显著正相关(P<0.01)。

白花蛇舌草诱导HSP_(70)表达对H22肝癌细胞移植瘤的干预作用

目的观察白花蛇舌草诱导HSP_(70)表达对H22肝癌细胞移植瘤小鼠病理改变及T细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞免疫小鼠采用HSP_(70)单抗封闭技术分为白花蛇舌草未封闭、封闭,党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组,观察各组移植瘤小鼠瘤组织、胸腺及脾脏的病理改变及外周血CD4^+、CD8^+表达情况。结果白花蛇舌草未封闭组肿瘤组织坏死较为明显,胸腺皮质及脾脏白髓增厚,可见大量巨噬细胞；白花蛇舌草封闭组,党参未封闭及封闭组肿瘤组织的坏死、胸腺及脾脏的病理改变与空白对照组比较除脾脏可见少量巨噬细胞外,未见其他明显不同。白花蛇舌草未封闭、封闭和党参未封闭、封闭组CD3^+的表达均较空白对照组增高；与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8^+、封闭组CD4^+表达明显上调。党参未封闭及封闭组CD4^+、CD8^+表达与空白对照组比较也有所增高,但差异无显著性意义。结论经白花蛇舌草处理的H22肝癌细胞能一定程度提高小鼠对同种移植瘤的主动免疫抗瘤作用,其机理可能与诱导肝癌细胞HSP_(70)表达,增强其免疫原性有关。

高碳水化合物日粮对异育银鲫血浆皮质醇含量和HSP70基因mRNA表达的影响

为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50%的日粮,每组3个重复。在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量。结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P<0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P<0.05);70 d时血浆皮质醇激素含量升高,且70 d时高碳水化合物组肝、心脏、脾和肾HSP70基因mRNA表达与对照组相比全部增强。各组饲养70 d后,饥饿24 h后重新投喂的0 h、6 h、12 h、24 h、48 h,高碳水化合物实验组(HS)皮质醇含量在6 h、48 h显著高于对照组(P<0.05),在6 h、12 h、48 h肝HSP70基因mRNA表达与对照组相比均增强(P<0.05),说明异育银鲫对50%碳水化合物含量的饲料的耐受性比较差,鱼体产生了应激反应。结果说明,当异育银鲫血清皮质醇激素含量升高时,其肝中HSP70基因mRNA的表达量却降低,反之亦然。本研究旨在为水生动物营养应激及营养免疫的相关研究提供新的思路,为开辟鱼类应激的营养调节提供科学依据。

抗氧化维生素对苯并(a)芘抑制内皮细胞HSP70表达的干预作用

[目的 ]研究抗氧化维生素C(VitaminC ,VitC)和维生素E(VitaminE ,VitE)对苯并 (a)芘 (benzo(a)pyrene ,BaP)抑制内皮细胞热休克蛋白 70 (heatshockprotein ,HSP70 )表达的干预作用。 [方法 ]原代培养猪主动脉血管内皮细胞。对照组不染毒 ,染毒组以不同浓度BaP( 0、0 .1、0 .5、1、5、10 μmol/L)染毒 2 4h ,VitE和VitC预处理组以 10 0 μg/ml的VitE和VitC预处理 6h后 ,再以不同浓度BaP( 0、0 .1、0 .5、1、5、10 μmol/L)染毒 2 4h ,用Western blot法检测各组细胞HSP70表达的改变。 [结果 ]BaP抑制了内皮细胞HSP70的表达 ;VitE和VitC预处理组内皮细胞HSP70表达与对照组相比差别无显著性。 [结论 ]VitE和VitC具有抵抗BaP抑制内皮细胞HSP70表达的效应。

健脾益气冲剂对不同病理分级慢性萎缩性胃炎患者HSP_(70)表达影响的比较

目的 通过健脾益气冲剂对不同病理分级慢性萎缩性胃炎 (Chronicatrophicgastritis,CAG)患者热休克蛋白 70(HSP70 )表达影响差异的比较 ,以探讨该方的作用机制。方法 观察病理变化 ,并以酶联免疫技术对患者治疗前后胃黏膜匀浆HSP70 进行检测。结果 治疗前 ,轻、中度组慢性萎缩性胃炎患者HSP70 含量与对照组比较明显增高 (P <0 .0 5 ) ,重度者无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;治疗后与治疗前比较 ,轻、中度组HSP70 含量显著增高 (P <0 .0 1) ,重度组明显增高 (P <0 .0 5 )。轻、中度者疗效明显高于重度者 (P <0 .0 5 )。结论 轻、中度与重度慢性萎缩性胃炎患者存在HSP70 表达的差异 ,这种差异对萎缩性胃炎患者的疗效有一定影响 ;健脾益气冲剂对萎缩性胃炎的疗效与促进HSP70 表达有关。

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP_(70)表达的研究

目的：研究热休克恢复期人舌癌Tea8113细胞热休克蛋白（HSP70）的表达和热动力学变化，为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法：通过人舌鳞癌细胞Tea8113在43℃加热30min，运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达，各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性，以期了解Tea8113细胞HSP70表达的动态变化。结果：热休克后恢复2h即出现HSP70的表达，8～12h达到高峰，之后逐渐减少，48h后基本恢复至加热2h后的水平，热休克后恢复12h细胞活性最强。结论：HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tea8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。

HSP70基因在人乳腺癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究

目的对人乳腺癌及宫颈癌的癌组织中HSP70基因的表达进行研究,以探讨细胞癌变机制,并对癌症的基因治疗提供依据。方法由宝安人民医院手术室提供癌组织(乳腺癌、宫颈癌)样本,分离出癌组织、癌旁组织和正常组织,提取RNA并进行1%琼脂糖电泳,逆转录成cDNA,RT-PCR结果检测HSP70基因表达情况,免疫组化检测HSP70基因表达情况。结果从乳腺癌宫颈癌样本分离的癌组织HSP70基因明显高于癌旁组织及正常组织。结论 HSP70基因在乳腺癌及宫颈癌癌组织中高表达,表明该基因在组织癌变过程中起着重要的作用,从而为了解细胞癌变机制和对癌症的基因治疗提供了有价值的证据。

热疗促进HSP70表达对免疫效应细胞杀伤肿瘤的影响

目的: 探讨热疗通过促进乳腺癌药物敏感细胞株与多药耐药细胞株表达热休克蛋白 (HSP)70,提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。为开展基于热疗的细胞免疫治疗提供实验依据。方法: 采用IFNγ、CD3单抗、IL 1和IL 2等细胞因子诱导并扩增免疫效应细胞。分别给予乳腺癌药物敏感株MCF7和耐受株MCF7 /ADR非致死温度热冲击 42℃ 1h,继续培养 4h, 24h, 48h后收获细胞,用流式细胞术检测靶细胞上HSP70的表达。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定靶细胞增殖活性以及免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性。结果: HSP70在两种靶细胞上的表达有差异,加热前MCF7 /ADR细胞HSP70表达明显高于MCF7,加热后 4h,HSP70在MCF7 /ADR表达提高了 6倍,在MCF7表达提高了 22倍,超过了耐药株。药物敏感株MCF7增殖的热抑制率低于耐药株MCF7 /ADR。热冲击前免疫效应细胞对MCF7细胞的杀伤活性低于MCF7 /ADR细胞。热冲击后免疫效应细胞对MCF7的杀伤活性提高了 86. 23%,超过了对MCF7 /ADR的杀伤活性 (提高了 30. 32% )。结论: 热疗明显提高HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的表达,增加了免疫效应细胞对这两种靶细胞的杀伤活性。HSP70在乳腺癌药物敏感与耐受细胞系上的差异性表达对免疫效应细胞的杀伤活性有影响。

褶纹冠蚌热休克蛋白HSP70基因的克隆及表达研究

运用兼并引物结合RT-PCR方法从褶纹冠蚌(Cristaria plicata)血细胞中克隆出热休克蛋白70(HSP70)的cDNA序列。用半定量PCR方法研究了HSP70mRNA在褶纹冠蚌不同组织的表达情况。结果表明:HSP70cDNA全长为2 664bp,5’非编码区364个核苷酸,3’非编码区383个核苷酸,开放阅读框为1 917bp,编码638个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白理论等电点为5.61,分子量为70.3kD。HSP70基因不含内含子。氨基酸序列分析发现,推导的氨基酸序列含有HSP70家族的3个标签序列(I10DLGTTYS17,V198FDLGGGTFDVSIL211和V336VLVGGSTRIPKV QK350)。氨基酸序列同源性比较显示HSP70与紫贻贝(Mytihcs galloprovincialis)和美洲牡蛎(Crassostrea virginica)氨基酸序列同源性分别为79.47%和77%。半定量PCR分析显示在正常褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃、闭壳肌和肝胰腺5种组织中均能检测到HSP70的基因表达。经过热休克或病原菌刺激后,蚌各组织中HSP70mRNA的表达显著增加,其中热休克处理后,蚌的鳃和血液中HSP70mRNA表达量增加最为显著;而嗜水气单胞菌刺激后蚌的肌肉和鳃组织中HSP70mRNA表达量增加最明显。

新生猪缺氧缺血性脑病HSP70表达的实验研究

目的 应用新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)的动物模型 ,探讨HIE早期病变中心区与周边区HSP70表达及其动态演变规律 ,为HIE的早期诊断和预后评估提供有价值的临床参考信息。方法 3日龄新生猪随机分为正常对照组、假手术组、缺氧缺血后 3,6 ,2 4h组。采用双侧颈总动脉结扎 ,混合气体 (3%氧气和 97%氮气 )吸入 30min建立动物模型。应用SP免疫组化法 ,检测HSP70阳性细胞计数 ,分析不同缺氧缺血组病变中心区和周边区HSP70表达之间的关系。结果 正常对照组和假手术组均无HSP70阳性细胞表达 ;缺氧缺血组于 3h出现HSP70阳性细胞 ,6h达高峰 ,之后逐渐下降。各组病灶中心区HSP70阳性细胞计数 3h与 6hP <0 0 5 ;6h与 2 4h组比较P <0 0 1;各组周边区HSP70阳性细胞计数比较P <0 0 1;病灶中心区和周边区HSP70表达比较P <0 0 1,差异均有显著性。结论 根据HIE病灶中心区和周边区HSP70阳性细胞表达的不同 ,提示HIE早期病灶周边区有可逆性脑组织区域存在 ,及时予以治疗可减少后遗症的发生。