热休克蛋白27对水泡性口炎病毒体外增殖的调控作用

本研究旨在探究热休克蛋白27(heat shock protein 27, HSP27)对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)体外增殖及VSV感染介导的维甲酸诱导基因I样受体家族(retinoid acid-inducible gene-I-like receptor, RLR)信号通路的作用及机制。利用实时荧光定量PCR、免疫印迹、免疫共沉淀、病毒滴度测定及免疫荧光等方法,首先检测VSV感染对HSP27 mRNA和蛋白表达的影响,进而验证过表达和干扰HSP27对VSV增殖的影响,进一步探究HSP27对VSV感染介导的RLR信号通路的影响,最后分析HSP27与RLR信号通路靶分子的相互作用及共定位情况。结果表明,VSV感染可促使HSP27基因转录和蛋白表达上调,稳定过表达和瞬时过表达HSP27均能显著抑制VSV的体外增殖;干扰宿主细胞中HSP27表达可促进VSV增殖。HSP27能够增强VSV及维甲酸诱导基因I蛋白(retinoic acid-inducible gene I protein, RIG-I)介导的IFN-β的产生及RIG-I的蛋白表达,而且HSP27与RIG-I相互作用并共定位于细胞质中。本研究揭示了HSP27靶向RIG-I上调其表达,增强RLR信号通路的转导,进而负调控VSV体外增殖,为深入揭示宿主因子HSP27在病毒感染中的作用机制奠定基础。

短指软珊瑚(Sinularia acuta)热休克蛋白HSP70家族特征及进化分析

热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)在生物细胞或组织免受热或氧化应激等方面起着关键作用,是已知高度保守的蛋白质之一。由于全球环境持续升温,珊瑚大面积白化、死亡,珊瑚如何应对持续升温的抗逆机制是科学研究热点。本研究从高温胁迫短指软珊瑚测序蛋白序列数据库分析鉴定出了28个HSP70蛋白家族成员,均为酸性亲水蛋白,大部分蛋白质结构较为稳定。亚细胞定位表明HSP70蛋白主要分布在珊瑚细胞核、细胞质中,在线粒体、内质网上也有少量分布。信号肽预测表明, 28个HSP70蛋白成员中26个没有信号肽,大部分不属于分泌蛋白,不存在跨膜结构。系统进化树结果表明短指软珊瑚HSP70蛋白家族成员聚成5大类。短指软珊瑚HSP70蛋白家族结构和保守基序分析中预测到了10条保守基序motif分为5个亚族。短指软珊瑚HSP70蛋白家族二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,α-螺旋的含量占比大。28个HSP70家族蛋白中有25个预测到了N-糖基化位点,且位点个数在1~9范围内。28个HSP70家族蛋白均预测到磷酸化位点和O-糖基化位点,总个数分别在41~96和1~23范围内。本研究HSP70家族蛋白结果为今后珊瑚在应对全球升温胁迫中的适应机制等方面研究奠定了基础。

超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β和热休克蛋白27对慢性肺源性心脏病的诊断价值

目的 探讨超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和热休克蛋白27(HSP27对慢性肺源性心脏病(CPHD)的诊断价值。方法 将100例CPHD患者设为观察组,100名健康体检者设为对照组。比较两组受试者一般资料、实验室检查结果、超声检查结果、GSK-3β及HSP27水平。采用Pearson相关性分析法探讨超声检查指标与血清HSP27、GSK-3βmRNA水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声检查和各项血清指标对CPHD的诊断效能。结果 观察组受试者肺动脉压高于对照组,主肺动脉内径、右室内径及右房内径均长于对照组(P<0.01)。观察组受试者血清HSP27水平高于对照组,血清GSK-3β mRNA水平低于对照组(P<0.01)。血清HSP27水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈正相关(P<0.05或0.01)。血清GSK-3β mRNA水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈负相关(P<0.05或0.01)。超声参数、血清GSK-3β、HSP27诊断CPHD的曲线下面积(AUC)分别为0.880、0.834和0.868,联合诊断的AUC为0.923,高于单独诊断。结论 超声参数、血清GSK-3β和HSP27对CPHD均具有较高的诊断价值,联合检测的诊断效果更高。

热休克蛋白65及其融合蛋白Hsp65-6×P277的分离纯化和稳定性研究(英文)

来源于牛分枝杆菌的热休克蛋白65(Hsp65)在没有佐剂的情况下可作为载体分子将抗原表位递呈给免疫系统。热休克蛋白具有蛋白酶的催化活性,容易发生自溶而降解,这制约了基于Hsp65疫苗的研究。该研究中,建立了纯化Hsp65及其融合蛋白Hsp65-6×P277(P277为来源于人热休克蛋白60的肽段,线性重复6次)的方法。Hsp65与Hsp65-6×P277以可溶形式表达于大肠杆菌。在低温及添加EDTA的条件下经细胞裂解、硫酸铵沉淀及阴离子交换树脂等纯化方法,可得到电泳纯的目的蛋白。用纯化的融合蛋白Hsp65-6×P277免疫小鼠,可激发机体产生强烈的免疫应答,该融合蛋白有希望作为免佐剂的糖尿病疫苗加以进一步研究开发。

热休克蛋白HSP27抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力

目的:探讨HSP27分子的表达水平与食管鳞癌高、低转移潜能细胞系侵袭转移能力的关系。方法:选用EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L两对食管鳞癌高、低转移潜能细胞系,利用细胞划痕实验检测不同细胞侵袭转移能力的差异;利用Western blot检测HSP27在不同转移潜能细胞中的表达水平;利用慢病毒转染技术上调HSP27低表达细胞中HSP27的表达,采用细胞划痕实验检测其侵袭转移能力的变化。结果:细胞划痕实验证实,EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭转移能力高于EC9706-L细胞和EC109-L细胞;Western blot实验结果显示,HSP27在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达,在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达;通过慢病毒转染技术上调EC9706-H细胞和EC109-H细胞中HSP27的表达,二者的侵袭转移能力明显降低。结论:HSP27与食管鳞癌的侵袭转移能力呈负相关,即HSP27高表达的食管鳞癌细胞其侵袭转移能力受到抑制。

慢性心力衰竭患者血清热休克蛋白27和可溶性糖蛋白130水平与近期预后的相关性

目的探讨血清热休克蛋白27(HSP27)和可溶性糖蛋白130(Sgp130)在评估慢性心力衰竭(CHF)患者近期预后方面的临床价值。方法收集2014年1月至2016年1月武汉大学人民医院重症医学科就诊的116例CHF患者的病历资料,随访6个月,根据是否发生主要不良心血管事件(MACE)分为2组,即非MACE组(n=83)和MACE组(n=33),采用Logistic回归分析MACE发生的相关危险因素。结果与非MACE组比较,MACE组在糖尿病、扩张型心肌病、纽约心脏病协会(NYHA)分级、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)和舒张早期最大血流速度/舒张晚期最大血流速度(E/A)、HSP27和Sgp130等方面差异均有统计学意义(均为P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CHF患者发生MACE的危险因素包括NYHA分级(OR:5.283,95%CI:2.861~9.460,P=0.00)、LVEF(OR:1.647,95%CI:1.242~1.845,P=0.04)、LVEDD(OR:5.281,95%CI:2.782~10.018,P=0.02)、LVESD(OR:4.735,95%CI:2.240~8.062,P=0.02)、E/A(OR:3.546,95%CI:1.844~4.307,P=0.03)、HSP27(OR:1.844,95%CI:1.153~3.638,P=0.02)和Sgp130(OR:3.064,95%CI:1.519~4.233,P=0.01)。Spearman相关分析结果显示,血清HSP27和Sgp130水平与LVEF和E/A呈显著负相关(均为P<0.01),而与LVEDD、LVESD和NYHA分级呈明显正相关(均为P<0.01)。结论血清Sgp130和HSP27水平的动态变化对CHF患者心功能状态和预后评估具有较好的应用价值。

血清HMGB1、CCL20、HSP27水平与慢性牙周炎患者牙周病变程度的相关性分析

目的探讨血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、CC趋化因子配体20(CCL20)、热休克蛋白27(HSP27)水平与慢性牙周炎(CP)患者牙周病变程度的相关性。方法选取2021年9月至2023年8月在新乡医学院第一附属医院诊治的60例CP患者纳入观察组,根据1∶1原则,另选取同期牙周健康者60例纳入对照组。比较两组及不同牙周病变程度CP患者血清HMGB1、CCL20、HSP27水平,分析各指标水平与CP牙周病变程度的相关性及联合诊断价值,并分析不同血清水平患者发生CP的危险度。结果观察组血清HMGB1、CCL20、HSP27水平高于对照组(P<0.05);不同牙周病变程度CP患者血清HMGB1、CCL20、HSP27水平比较:轻度<中度<重度,且各指标水平与牙周病变程度均呈正相关(P<0.05);入院时HMGB1、CCL20、HSP27水平联合诊断CP的曲线下面积(AUC)为0.905,最佳诊断敏感度为91.67%,特异度为88.33%,约登指数0.800,且各指标高水平患者发生CP的危险度是低水平的1.105倍、1.034倍、1.105倍(P<0.05)。结论HMGB1、CCL20、HSP27在CP患者血清中呈异常高表达,各指标水平与牙周病变程度均呈正相关,且联合检测对CP具有较高诊断价值,可作为临床诊断CP、评估牙周病变程度的有效指标。

壳聚糖纳米颗粒负载落新妇苷通过调控MAPK14/HSP27影响高糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡

目的探讨壳聚糖纳米颗粒(CS NPs)负载落新妇苷(落新妇苷-CS-NPs)通过调控丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)/热休克蛋白27(HSP27)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞铁死亡的影响。方法将HK-2细胞分组如下:正常糖(NG)组、HG组、HG+落新妇苷-CS-NPs(0、5、10、20 mg/L)组,以及HG条件下的pcDNA3.1-MAPK14组、pcDNA3.1-MAPK14+落新妇苷-CS-NP组、si-HSP27组、pcDNA3.1-MAPK14+si-HSP27组、pcDNA3.1-MAPK14+si-HSP27+落新妇苷-CS-NPs组。CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡。同时通过试剂盒测定铁离子水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、谷胱甘肽(GSH)水平、活性氧(ROS)水平。构建糖尿病肾脏病(DKD)大鼠模型,并使用落新妇苷-CS-NPs干预,探究其对体内DKD的影响。结果与NG组相比,HG组HK-2细胞活力降低、凋亡增加,铁离子水平、LDH活性、ROS水平升高,而GSH水平明显降低(P<0.05)。经过落新妇苷-CS-NPs处理组明显逆转了HG对HK-2细胞生物学行为及铁死亡相关指标的影响。此外,相比于pcDNA3.1组,pcDNA3.1-MAPK14组铁死亡增加,而敲减HSP27或者联合落新妇苷-CS-NPs干预则改善了这一情况。体内实验结果表明,落新妇苷-CS-NPs能够改善DKD大鼠肾损伤、抑制铁离子水平以及MAPK14/HSP27的表达。结论落新妇苷-CS-NPs可能通过抑制MAPK14与HSP27表达,改善HG诱导的肾小管上皮细胞铁死亡。

热休克蛋白(HSP70、HSP27)在食管癌组织中表达的意义

目的 :探讨HSP70和HSP2 7在食管癌组织中的表达情况。方法 :采用SP免疫组织化学染色检测 5 9例食管癌组织中HSP70和HSP2 7。结果 :HSP70和HSP2 7的总阳性率分别为 6 4.4 1% (38/5 9)和 5 8.6 2 % (34/5 8) ,HSP70和HSP2 7的共同阳性率为 30 .0 0 % (9/30 )。结论 :在食管癌中HSP70和HSP2 7普遍表达。

肿瘤细胞释放热休克蛋白Hsp27逃避免疫攻击促进自身生长

【动态】美国科学家最近发现人类乳腺癌细胞释放高水平的热休克蛋白Hsp27，不仅使免疫细胞对肿瘤失去反应，而且还增加肿瘤的血供，促进肿瘤生长。虽然之前在老鼠的乳腺癌等癌症中也发现了相同的躲避免疫系统的机制，但是由于肿瘤细胞在老鼠身上的作用方式并不完全与人一样，本研究试验了人类乳腺癌细胞，

鼠青光眼模型中热休克蛋白27的表达及其作用(英文)

目的:探讨热休克蛋白27(HSP27)在鼠青光眼模型视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达以及眼压对抗HSP27自身抗体的影响。方法:使用SPSS12.0软件将55只Wistar大鼠随机分为高眼压组(25只鼠)、sham对照(假手术)组(25只鼠)及正常对照组(5只鼠)。采用电凝鼠巩膜表面至少3组静脉及角膜缘周围血管,建立鼠青光眼模型。采用免疫组化和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测术后1,2,3,4及8wk视网膜中RGCs以及神经纤维层(RNFL)HSP27的表达、分布以及血清中抗HSP27抗体水平。结果:随着眼压升高及高眼压持续时间延长,高眼压组右眼RGCs中HSP27表达逐渐增强,与其左眼、sham对照组右、左眼和正常对照组右、左眼比较,差异均有统计学意义(P<0.001),且RNFL中也出现HSP27的表达。高眼压组血清中抗HSP27抗体水平在术后1wk轻度升高(P>0.05),随着眼压升高及高眼压持续至术后8wk,血清中HSP27抗体水平逐渐升高并稳定于较高水平,与sham对照组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:内源性HSP27表达增强可能在青光眼视神经病变中具有重要作用。

合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析

采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

研究不同热休克条件对H22小鼠肝癌细胞的HSP70mRNA及蛋白表达的影响,以期获得最佳诱导条件.分别用MTT、RT-PCR、免疫荧光和FCM检测等方法观察不同热休克条件对鼠H22细胞的生存率、胞内HSP70mRNA转录水平及胞膜HSP70蛋白表达水平的改变.结果表明,H22细胞经轻度热休克(42～43℃),细胞生存率无影响,而中重度热休克(44～45℃)则随休克时间的延长,细胞生存率明显下降;42℃热休克初期(0.5～4小时)胞内HSP70mRNA水平低于对照组,休克后期(8～12小时)mRNA水平有所恢复并逐渐增高;不同时间热休克组H22细胞胞膜HSP70表达均较对照组显著增高(P<O.005),其中非致死性热休克以12小时表达最高,42℃为59.5%,43℃为96.8%.因此适当热休克条件可引起H22细胞HSP7OmRNA的改变及膜上HSP70蛋白表达的增加,从而增加肿瘤细胞的免疫原性.

热休克蛋白27,60和90在胃癌中表达及其临床价值

目的:探讨HSP-27、-60和-90在胃癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学检测66例胃癌组织中HSP-27、-60和-90的表达情况,并结合临床病理特征、肿瘤增殖能力和患者生存期分析三种热休克蛋白表达的临床意义。结果:HSP-27、-60和-90在胃癌组织中异常高表达。HSP-27表达与肿瘤大小(p T,P=0.026)、器官转移(p M,P=0.046)及病理分期(P=0.041)相关,而HSP-27染色强度与淋巴腺状态明显相关(p N,P=0.042)。HSP-60表达与患者性别相关(P=0.011),而HSP-60染色强度与患者年龄(P=0.027)和肿瘤病理组织学分级(P=0.031)相关。HSP-90表达与本研究分析的临床病理参数无相关性;但是,HSP-90染色强度与肿瘤大小存在着显著关系(p T,P=0.020)。单因素分析表明HSP-90高表达与生存期更长显著相关(P=0.033),多因素分析证实HSP-90高表达是胃癌独立预后因素(P=0.026)。结论:HSP-27、-60和-90与某些临床病理参数有关,这些参数对于胃腺癌患者的治疗至关重要。胃腺癌患者HSP-90高表达是独立预后指标。

温度刺激下栉孔扇贝不同组织热休克蛋白HSP70的表达研究

采用免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)方法,研究了热激栉孔扇贝不同组织内热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的表达变化.免疫印迹结果显示,HSP70的诱导表达有组织特异性,即热休克可以使扇贝鳃组织中HSP70的表达明显升高,但在肌柱、外套膜和性腺组织中,未检测到HSP70 的表达.流式细胞术结果表明:在不同的季节,相同的热刺激对扇贝血淋巴中HSP70的诱导表达存在差异.高温刺激后,栉孔扇贝血淋巴细胞中HSP70的表达量逐渐升高,在诱导7h时达到最高.

热休克蛋白27对臂丛神经根撕脱后脊髓运动神经元NOS的影响

目的：观察热休克蛋白27（Hsp27）对大鼠臂丛神经根撕脱后脊髓运动神经元一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法：Wistar大鼠60只，随机分为实验组和对照组。实验组动物分别以45℃预处理热处理15min，再置于42％维持20min，置室温恢复24h后，手术显微镜下进行脊髓C5～C8节段神经根撕脱术；对照组仅施行臂丛神经根撕脱术，两组分别于术后12h、1d、3d、5d、7d处死动物。各组取C5～C8节段脊髓，行Hsp27免疫组化、NADPH—d组化染色，结合自动图象分析系统对结果进行半定量分析。结果：①实验组在12h即有NOS大量表达，之后迅速回落；对照组伤后第5天开始大量出现NOS阳性。②两组Hsp27表达高峰均在热休克后1d，且实验组强于对照组。结论：臂丛神经根撕脱伤后Hsp27可能通过抑制NOS神经元来发挥其细胞保护作用。

牦牛肉宰后成熟过程中热休克蛋白27表达量与食用品质的相关性分析

为研究牦牛肉宰后成熟过程中热休克蛋白27（heat？shock？protein？27,Hsp27）的变化及其与食用品质的相关性,测定了5头青海大通母牦牛背最长肌肉成熟过程中色度L＊、a＊、b＊值、p H值、剪切力、蒸煮损失以及Hsp27的表达量,进一步研究了Hsp27与肉品质的相关性。结果表明：Hsp27表达量总体呈降低的趋势,宰后0～48？h？Hsp27表达量显著降低（P〈0.05）,72～120？h？Hsp27表达量显著升高,至168 h又显著降低（P〈0.05）;Hsp27表达量与a＊值成显著正相关（P〈0.05）,与b＊值成极显著负相关（P〈0.01）,与p H值成极显著正相关（P〈0.01）。证明Hsp27与牦牛肉食用品质之间存在相关性。

心肌特异性高表达热休克蛋白27转基因鼠建立

目的:建立人热休克蛋白27(heat shock protein27,Hsp27)基因在小鼠心肌特异性表达的转基因鼠模型。方法:将人心肌Hsp27cDNA插入含有心肌特异性表达启动子αMHC的pBSⅡ-SK+载体中,限制性内切酶EcoRI酶切、纯化后,获得含有αMHC启动子-Hsp27cDNA-HGHpolyA的线性DNA片段,以显微注射法将目的基因导入受精卵,PCR筛选基因型,Western blot鉴定转移基因的表达和表达的组织特异性。结果和结论:共获得两个转基因系小鼠,均呈心肌组织特异性高表达。

昆虫热休克蛋白Hsp70的研究进展

热休克蛋白Hsp70诱导性显著,合成量多并具有高度的保守性。Hsp70表达于所有的活体细胞中。Hsp70具有分子伴侣、抗细胞凋亡功能,参与免疫反应、抗氧化功能,可以提高细胞对环境胁迫或伤害的耐受性。文章对Hsp70的特性以及其在昆虫学中的研究意义、研究现状及前景进行了综述。

热休克蛋白27在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达及机制研究

利用不同转移潜能肝癌细胞系探讨热休克蛋白27(HSP27)参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制.细胞免疫荧光技术、RT-PCR和免疫印迹技术显示,HSP27在转移潜能不同的肝癌细胞Hep3B、MHCC97L和MHCC97H中定位于细胞浆,亦可见于细胞核,HSP27 mRNA和蛋白质的表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关.高转移潜能肝癌细胞系MHCC97H的HSP27 RNA干扰试验结果显示,HSP27 RNA干扰后MHCC97H的侵袭(MHCC97H组:21.36±2.92;对照RNAi组:19.88±2.23;RNAi组:11.40±2.05)、运动能力(MHCC97H组:26.35±3.29;对照RNAi组:24.43±3.17;RNAi组:10.92±2.27)明显减弱,细胞凋亡显著增加(MHCC97H组:15.12%;对照RNAi组:17.56%;RNAi组:27.64%).同时进行信号转导基因芯片检测发现,HSP27干扰后核因子κB(NF-κB)通路抑制,并且免疫印迹显示细胞核内活化的NF-κBp65减少,细胞内磷酸化IκBα降低.另外,免疫共沉淀检测发现,在肝癌细胞内HSP27可与IKKβ、IκBα共沉淀,且在HSP27RNA干扰后IKKβ与IKKα结合能力下降.这些结果提示,HSP27可能通过参与细胞内NF-κB通路的激活,影响细胞凋亡和细胞运动,在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.