温阳化浊清解方对Hp感染GES-1细胞IceA 、SabA基因及HSP70、TRL4表达的影响

目的探讨温阳化浊清解方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)IceA、SabA基因及HSP70、TRL4表达的影响。方法制备幽门螺杆菌感染GES-1体外模型。实验分组为空白组、模型组、西药组、低、中、高浓度中药组(10,20,40μg/ml)。空白组为正常人GES-1细胞,不予任何处理;模型组为Hp感染后人GES-1细胞;西药组为标准四联杀菌药干预;低、中、高中药组分别以上述浓度中药进行干预。干预完成后,采用PCR法分别检测各组细胞中幽门螺杆菌IceA、SabA基因表达,采用Western斑点印迹技术进行HSP70及TRL4表达水平的检测。结果IceA1、IceA2、SabA模型组较空白组mRNA转录水平变化均明显上升,差异性明显(P<0.05)经药物干预后,各组mRNA转录水平均下降差异显著(P<0.05),温阳化浊清解方在降低IceA2mRNA转录水平表达方面存在量-效关系,随浓度梯度升高而增强。SabA基因mRNA转录水平变化,高浓度中药组优于其余几组,差异有特异性(P<0.05)。且在降低Sa-bA基因mRNA转录水平方面存在量-效关系。与空白组相比,各组样本TLR4、HSP70蛋白相对表达量及IL8水平均升高(P<0.05)。与模型组相比,西药组、温阳化浊清解方各浓度组TLR4、HSP70蛋白相对表达量及IL8水平均明显降低(P<0.05)。结论温阳化浊清解方能增强Hp感染后人胃黏膜上GES-1活力,降低细胞凋亡率,抑制IceA、SabA基因表达和HSP70、TRL4蛋白表达,抑制IL8,减轻炎症,这可能是其抑制Hp相关胃炎的作用机制。

禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的克隆和表达

本研究参照GenBank中编码禽源热休克蛋白HSP70、HSP40和核糖体蛋白RL4等的基因序列,分别设计特异性引物,采用RT-PCR扩增HSP70、HSP40和RPL4基因,经双酶切后克隆到真核表达载体pEF1α-Myc,得到重组质粒pEF1α-Myc-HSP70、pEF1α-Myc-HSP40和pEF1α-Myc-RPL4;将构建好的重组质粒,转染HEK293T细胞后,采用间接免疫荧光和Western-blot技术,对目的蛋白进行验证。结果表明,Myc-HSP70、Myc-HSP40和Myc-RPL4融合蛋白在HEK293T细胞内得到了正确表达。本研究为后续禽源HSP70、HSP40和RPL4基因的功能研究奠定了基础。

RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞生长和凋亡的影响(英文)

RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SMMC7721肝癌细胞,通过G418稳定筛选,建立转染RTN4-C/SMMC7721稳定细胞株。MTT法测定转染前后细胞生长改变、吖啶橙染色检测细胞凋亡改变、免疫细胞化学检测肿瘤相关蛋白p53、Hsp70和c-Fos表达改变。结果表明,RTN4-C/SMMC7721细胞生长减慢,与对照组相比,第2、3、4d细胞生长抑制率分别为33·8%±0·026、56·2%±0·094、34·8%±0·077;凋亡明显增多。突变型p53蛋白从核内转移到细胞质且表达减弱,c-Fos、Hsp70蛋白表达量明显减弱。提示RTN4-C基因在肝癌组织中存在表达差异,促进突变型p53的核转移并减少其表达量、抑制癌基因c-Fos和Hsp70的表达,从而抑制SMMC7721细胞的生长,促进其凋亡。

猪带绦虫HSP70-4的真核表达及其抗血清的制备

为了研究猪带绦虫(Taenia solium)热休克蛋白70-4(TsHSP70-4)基因序列的特征及其真核表达蛋白的抗原性,参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,设计特异性引物,RT-PCR扩增TsHSP70-4 ORF序列。根据毕赤酵母密码子偏好性,对TsHSP70-4基因密码子进行优化,连接载体pPIC9K,在毕赤酵母中进行诱导表达,通过Western-blot及质谱测序进行蛋白鉴定。将纯化后的TsHSP70-4表达蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果显示,成功克隆出大小为1 953 bp的TsHSP70-4 ORF序列。在毕赤酵母中进行了高效表达,获得大小约为95ku的重组蛋白。Western-blot检测和质谱鉴定表明,获得的重组蛋白即为TsHSP70-4。免疫新西兰大白兔,制备出效价高达1∶409 600的抗血清。该研究为猪囊尾蚴病新疫苗的研制提供了依据。