井穴刺络放血法对MCAO模型大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达的影响

[目的]从脑内应激热休克蛋白70(HSP70)蛋白表达的角度观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。[方法]以凝结法阻断大鼠一侧大脑中动脉造成急性局灶性缺血性脑损伤模型,用免疫组织化学法观察缺血区皮层脑组织HSP70蛋白的表达变化及施加井穴放血法后对其的干预作用。[结果]急性缺血性脑损伤可快速诱导HSP70蛋白在皮层缺血区脑组织的表达增加,其表达有随缺血时间延长逐渐增多的趋势,提示脑的缺血性损伤可应激性地增强神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力,而应用井穴放血的干预治疗可明显上调缺血区皮层脑组织HSP70的表达水平,进一步增强脑组织对抗缺血性损伤的应激能力,抵抗缺血性脑损害的进一步发展,增强脑修复能力。[结论]表明井穴放血法在中风早期可提高缺血区脑组织的抗应激能力,发挥出有效的脑保护作用。

仔猪HSP70蛋白表达与断奶腹泻关系研究

为了探讨HSP70在断奶过程中的作用,试验通过免疫组化方法检测民猪、长白猪断奶仔猪的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠六个组织中HSP70蛋白的组织定位与定量变化。结果表明,胃肠道中HSP70蛋白主要在黏膜上皮和肠腺内表达,在各组织内的表达没有因腹泻与否而发生组织定位的改变,在除胃以外的其他消化道组织中,长白健康组仔猪的HSP70蛋白的表达量显著高于长白腹泻组、民猪健康与腹泻组。

+Gz暴露对大鼠海马HSP70蛋白表达的影响

目的观察不同值的+G z暴露对大鼠海马HSP70蛋白表达水平的影响,探讨+G z暴露诱导产生HSP70蛋白的机制。方法100只SD大鼠随机分为对照组、+2G z暴露组、+6G z暴露组、+10G z暴露组,各组在+G z暴露后的6h、1d、2d、4d、6d处死,采用免疫组织化学方法观察大鼠海马HSP70蛋白表达情况,并对实验结果进行统计分析。结果3个+G z暴露组,HSP70蛋白表达水平表现出相同的变化趋势:在+G z暴露后6h,HSP70蛋白表达水平开始增加,1d达峰值,6d时基本恢复正常,而对照组没有这一变化趋势;不同+G z值之间的比较表明,+6G z组HSP70蛋白表达水平最高,+10G z组最低。结论+G z暴露对大鼠海马HSP70蛋白表达有显著影响,+6G z暴露时HSP70蛋白表达水平最高。

脑缺血再灌流后HSP70蛋白的表达及其与凋亡的关系

目的 :研究脑缺血再灌流后 HSP70蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 :应用免疫组化的方法观察大鼠局灶性脑缺血再灌流后脑组织 HSP70蛋白的表达和细胞凋亡的分布。结果 :缺血 2 h再灌流 0 h即可见 HSP70表达和凋亡细胞 ,HSP70至 2 4h达高峰 ,凋亡细胞数于再灌流后 2 4～ 48h达高峰。结论 :脑缺血诱导 HSP70蛋白的表达和细胞凋亡 ,脑缺血后

大鼠严重烧伤后大脑皮质神经元和腓肠肌细胞bcl-2、HSP70蛋白的表达及意义

目的 探讨大鼠严重烧伤后大脑皮质神经元和腓肠肌细胞bcl 2、HSP70蛋白的表达及其意义。方法 应用免疫组化SP法检测大鼠体表总面积 (TBSA)为 30 %Ⅲ度烧伤后大脑皮质及腓肠肌组织bcl 2、HSP70蛋白的表达及动态变化。结果 严重烧伤后 1- 3hbcl- 2、HSP70在大脑皮质神经元胞浆呈中度阳性表达 ,此后呈阴性 ;而在腓肠肌呈强阳性表达且持续至伤后 12h ,两种蛋白的表达强度及持续时间与细胞的损伤程度密切相关。结论 严重烧伤后bcl 2。

HSP70蛋白在神经元样PC12细胞氧糖剥夺后的表达变化

目的探讨神经细胞氧糖剥夺(OGD)造模后PC12细胞凋亡和热休克蛋白(HSP)70水平,评价OGD模型。方法利用PC12细胞,经NGF刺激诱导向神经细胞分化,利用OGD建立神经细胞OGD模型;利用MTT法、共聚焦显微镜鉴定PC12细胞转化为神经元样细胞及OGD模型的建立,Western印迹检测OGD后HSP70蛋白的表达。结果应用终浓度50 ng/ml NGF的DMEM完全培养基培养PC12细胞,随培养时间的增加细胞呈典型的神经元形态。微管相关蛋白(MAP)2免疫荧光细胞化学染色呈强阳性;建立OGD后神经元出现不同程度的损伤、坏死及凋亡,随OGD时间延长存活率逐渐降低、凋亡率升高、HSP70蛋白表达增加。结论 NGF有效地诱导PC12细胞转化为神经细胞,OGD可以有效诱导HSP70表达。

+Gz暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达的影响

目的:观察+G z暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达水平的影响,探讨+G z暴露致脑损伤的机理。方法:100只SD大鼠随机分为对照组,+2 G z暴露组,+6 G z暴露组,+10 G z暴露组,各组在G暴露后的6 h、1、2、4、6 d处死,免疫组织化学方法观察大鼠脑皮层HSP70蛋白表达情况,并对结果进行统计分析。结果:3个+G z暴露组的HSP70蛋白表达水平均显著高于对照组;不同G值之间的比较表明,+6 G z组HSP70蛋白表达水平最高,+10 G z组最低。结论:+G z暴露对大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达水平有显著影响。

旋毛虫HSP70蛋白诱导大鼠心肌细胞线粒体凋亡机制的研究

为了解旋毛虫HSP70致心肌损伤的机制,本研究将不同浓度旋毛虫重组HSP70蛋白(Ts-Hsp70)与大鼠心肌细胞H9c2共孵育后,采用CCK-8试剂盒筛选Ts-Hsp70作用H9c2细胞的最适浓度。以最适浓度Ts-Hsp70与H9c2细胞共孵育不同时间后,采用微孔板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,采用比色法检测细胞培养上清液中心肌细胞损伤标志物肌酸激酶(CK)的含量,采用免疫荧光检测Ts-Hsp70作用后H9c2细胞活性氧(ROS)的释放,采用qPCR和western blot方法检测Ts-Hsp70作用后的H9c2细胞线粒体凋亡与抗凋亡途径中的Bax、Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome C与Bcl-2的基因转录水平与蛋白表达水平。结果显示,经最适浓度为60μg/mL的Ts-Hsp70分别刺激H9c2细胞6 h、12 h和18 h后,随着Ts-Hsp70对H9c2细胞作用时间的延长,LDH、CK、ROS含量与Bax、Cytochrome C及激活状态下的Caspase-3、Caspase-9基因转录水平与蛋白表达水均升高,且均于作用12 h时达峰值,显著高于对照组(P<0.01),而线粒体抗凋亡基因Bcl-2基因转录水平与蛋白表达水平随着Ts-Hsp70对H9c2细胞作用时间的延长均逐渐降低,且均于作用12 h时达谷值,显著低于对照组(P<0.01)。本研究首次证实Ts-Hsp70可增加细胞中LDH、CK、ROS的含量,激活并调节H9c2细胞中的线粒体凋亡通路,该研究结果为进一步研究旋毛虫致心肌损伤机制提供了基础数据。

Grb7蛋白和HSP70蛋白在胃肠道间质瘤中的表达及临床意义

目的探讨Grb7和HSP70蛋白在胃肠道间质瘤(GISTs)中的表达及其与GISTs生物学行为的关系,为预测该肿瘤的侵袭潜能提供理论依据和可能的预测指标。方法收集58例手术切除的GISTs标本,应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Grb7和HSP70蛋白的表达,并结合病理形态学及生物学行为评价进行统计学分析。结果肿瘤组织中的Grb7和HSP70蛋白阳性率分别为83.3%、67.24%,并随着GISTs恶性分级的增高,其表达均出现递增趋势,差异有显著性意义(P<0.05);与生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死、肿瘤细胞特殊排列结构亦有明显关系(P<0.05)。结论 Grb7和HSP70蛋白表达与GIST的发生、发展有关,检测P53、Grb7表达结合特殊病理学形态可以作为评价GISTs生物学行为及预后的客观指标。

艾叶水提取物对肝癌细胞的抑制作用及对Bcl-2和HSP70蛋白表达的影响

目的观察艾叶水提取物对H27人肝癌细胞抑制作用及对Bcl-2、热休克蛋白(HSP70)蛋白表达的影响。方法从细胞的形态学观察,并进一步使用免疫细胞化学剂、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等分析方法研究癌基因Bcl-2及HSP70蛋白的表达情况。结果 60mg/mL的艾叶水提取物处理肝癌细胞12h后,肝癌细胞均出现严重皱缩、固缩、细胞质膜突出等,免疫组化及Western blotting分析显示实验过程中伴随着癌基因Bcl-2表达的减弱(P<0.05),而HSP70蛋白表达则无明显变化(P>0.05)。结论艾叶水提取物能够诱导体外人肝癌细胞凋亡,而这个凋亡过程可能跟癌基因Bcl-2有关,与HSP70的表达关系不明显。

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达的影响

目的研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP(热休克蛋白)70mRNA和HSP70蛋白的动态表达规律及其作用的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交原理检测HSP70 mRNA,应用组织化学染色法检测HSP70蛋白。结果异丙酚使HSP70 mRNA的表达增强,时间延长(P<0·05);HSP70蛋白表达量显著增多(P<0·05)。结论异丙酚能显著促进脑缺血再灌注时HSP70的表达。提示异丙酚一方面发挥自身的神经保护作用,另一方面也可以通过诱导HSP70的合成而发挥神经保护作用。

Bag-1、HSP70蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达和意义

目的:探讨Bag-1和热休克蛋白70(HSP70)在宫颈上皮内瘤变中的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法,对64例宫颈上皮内瘤变(CINⅠ-Ⅱ39例,CINⅢ25例)及36例宫颈鳞癌组织的Bag-1和HSP70蛋白进行检测,以20例正常宫颈鳞状上皮作对照。结果:(1)Bag-1在CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ和宫颈鳞癌组的阳性表达率分别为48.72%(19/39)、80.00%(20/25)、83.33%(30/36),宫颈上皮内瘤变及宫颈癌各组阳性率高于正常宫颈鳞状上皮阳性率(P<0.05)。CINⅢ和宫颈鳞癌组的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。(2)HSP70在CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ组和宫颈鳞癌组的阳性表达分别为48.72%(19/39)、72.00%(18/25)、86.11%(31/36),各组阳性表达率均高于正常宫颈鳞状上皮(P<0.05)。CINⅢ组和宫颈鳞癌组的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。(3)在宫颈鳞癌组织中Bag-1与HSP70之间存在正协同作用(r=0.393,P=0.016)。结论:Bag-1和HSP70在CIN和宫颈鳞癌中的过表达提示它们在宫颈鳞癌的发生、发展起促进作用。Bag-1与HSP70之间存在相关性,说明宫颈鳞癌的发生、发展是多基因调控的过程。

黏虫HSP90/70组织蛋白基因的分子特征与表达特性

为解析黏虫Mythimna separata响应环境胁迫的分子机制,采用RACE和RT-PCR的方法从黏虫中克隆了1个HSP90/70组织蛋白(heat shock 90/70 organizing protein, HOP)基因,并采用qRT-PCR分析了其在多种生物和非生物胁迫下的表达特性。结果表明,MsHOP具有1个1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸,预测的分子量为61.7 kDa。序列分析表明,MsHOP主要由已报道的3个保守四肽重复结构域(TPR1, TPR2A和TPR2B)和2个天冬氨酸-脯氨酸重复基序(DP)构成。基于鳞翅目昆虫HOP构建的系统进化树显示MsHOP与棉铃虫Helicoverpa armigera HOP和烟芽夜蛾Heliothis virescens HOP的亲缘关系最近。qRT-PCR分析表明,MsHOP在黏虫所有发育时期和组织均表达,分别在5龄幼虫和雌成虫中肠的表达量最高。在30℃下处理1 h后,MsHOP的表达水平较对照显著提高,而在33℃~39℃下处理1 h后MsHOP的表达水平则与对照差异不显著。饥饿24~72 h后,MsHOP的表达与对照相比无明显变化。Bt能显著诱导MsHOP的表达,其表达水平随Bt浓度的升高而上调,并在64 IU/mL浓度下的表达量最高。幼虫饲养密度对MsHOP的表达也具有显著影响,其表达水平随密度的升高而上调,在20头/瓶的饲养密度下达到最大值。这些结果表明,MsHOP可能在黏虫的生长发育、抵御杀虫剂和密度胁迫中发挥重要作用。

绵羊肺炎支原体Hsp70蛋白C末端基因真核表达载体的构建

为探讨绵羊肺炎支原体(Mo) Hsp70蛋白作为核酸疫苗的可能性,在对Mo贵州分离株Hsp70蛋白基因进行生物信息学分析的基础上,选择Mo Hsp70蛋白C末端基因,将其与载体pcDNA 3.1 (+)进行连接构建重组质粒,通过脂质体转染至CHO细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光方法评价转染效果和真核细胞表达效果。结果显示:Mo贵州分离株Hsp70蛋白的C末端是具有优势抗原表位的区域,通过PCR方法成功扩增出567 bpHsp70蛋白的C末端基因,并成功构建pc DNA 3.1-Hsp70重组质粒,在转染细胞中PCR扩增出预期大小的目的基因,可以观察到特异性的绿色荧光,提示本研究成功构建的重组质粒能在真核细胞中良好表达,为后续Mo Hsp70蛋白抗原性和免疫佐剂特性的研究奠定基础。

合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析

采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。

剑尾鱼热应激蛋白HSP70 cDNA片段的克隆与序列分析

为了进一步开展剑尾鱼Xiphophorus helleri——标准化实验动物在抗逆方面的相关研究,以及热应激蛋白(HSP70)在抗逆方面的作用,作者用RT-PCR方法首次克隆得到了剑尾鱼的HSP70的cDNA片段,该片段包含HSP70的特征性序列(GAT CTC GGT GGT GGC ACT TTT GAT)。通过将克隆片段与已发表的其它鱼类HSP70的核苷酸序列和其编码的氨基酸序列进行同源性比较,发现剑尾鱼核苷酸序列同源性较高,与牙鲆Paralichthys olivaceus HSP70核苷酸序列同源性最高为89%,与川鲽Platichthys flesus、虹鳟Oncorhyn-chus mykiss和黄锡鲷Rhabdosargus sarba的同源性皆在85%以上;与国外学者发表的HSP70的规律类似,所克隆的片段与其它鱼类HSP70基因编码的氨基酸序列同源性较相应核苷酸序列同源性更高,与牙鲆和川鲽的HSP70氨基酸序列同源性最高达到99%,与斑马鱼Danio rerio、虹鳟和黄锡鲷的氨基酸序列同源性均高于97%。不同鱼的HSP70 cDNA核苷酸序列存在一定差异,但氨基酸序列并未受到影响,经对照,这种不同相当一部分存在于密码子的第3个碱基,因为密码子的简并性,编码氨基酸没有发生改变。

重组蛋白PSCA-HSP70的免疫活性及抗肿瘤效应观察

目的探讨重组前列腺干细胞抗原(PSCA)-热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白对前列腺肿瘤模型小鼠的免疫激活作用及抗肿瘤活性。方法健康雄性C57BL/6小鼠25只,随机均分为PSCA组、HSP组、PSCA+HSP组、PSCAHSP组及PBS组(n=5)。小鼠皮下注射1×106个前列腺肿瘤细胞(RM-PSCA/Luc细胞),3d后分别采用相应重组蛋白进行免疫(100μg/只),2周后采用相同剂量加强免疫1次,观察肿瘤生长及小鼠存活状况。加强免疫后10d处死动物,采用ELISPOT法和流式细胞术检测PSCA特异性T细胞反应,ELISA法检测PSCA特异性抗体水平。结果 ELISPOT法检测显示,PSCA-HSP组分泌IFN-γ的CD8+T细胞数明显高于其他各组(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,PSCA-HSP组CD8+/IFN-γ+T细胞数明显高于其他各组(P<0.05);ELISA检测显示,PSCA、PSCA+HSP、PSCA-HSP均可诱导产生PSCA特异的体液免疫反应,且3组间抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。PSCA-HSP组肿瘤体积明显小于其余各组,小鼠存活时间明显长于其余各组(P<0.05)。结论 HSP70是一种效应显著的分子伴侣,重组PSCA-HSP70融合蛋白在前列腺癌的治疗中具有重要的潜在应用价值。

高温胁迫下B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70表达量的变化

为了探讨热激蛋白在B型烟粉虱Bemisiatabaci B-biotype抵抗高温中的作用,以含有B型烟粉虱热激蛋白基因hsp70片段的质粒为模板,用TaqMan-MGB探针和特异性引物构建了B型烟粉虱hsp70实时荧光定量RT-PCR检测体系,并检测了37℃-45℃高温胁迫及气温变化时B型烟粉虱成虫体内hsp70表达的情况。结果表明：缓和的高温对B型烟粉虱成虫hsp70表达具有诱导作用,在37℃-41℃范围内,hsp70的表达量随着温度的升高从8.78×10^5±6.41×10^4拷贝数上升到1.99×10^7±1.45×10^5拷贝数,在41℃时达到最高峰;而当温度升高到43℃和45℃,hsp70表达量迅速降低。B型烟粉虱成虫hsp70的表达与昼夜气温变化有关,当上午气温从34℃上升到41℃时,hsp70的表达量从1.16×10^5±1.48×10^4拷贝数上升到6.29×10^6±1.80×10^5拷贝数;当傍晚气温下降到33℃时,hsp70表达量也下降到2.32×10^5±7.69×10^3拷贝数。因此推测,hsp70在B型烟粉虱抵抗高温胁迫方面可能具有重要作用。

模拟失重及再超重对猕猴腮腺组织热休克蛋白HSP70表达的影响

目的探讨模拟失重30 d及再超重对猕猴腮腺组织中热休克蛋白HSP70表达的影响。方法选用雄性猕猴23只,随机分为对照组(A组),失重(B组),超重+13 Gx/230s(C组),失重后再超重(D组,依据不同的+Gx强度和时间分为4个亚组:分别是+11 Gx/270s D1组、+13 Gx/230s D2组、+15 Gx/200s D3组、+13 Gx/230s后恢复9 d D4组)。通过HE染色观察腮腺组织形态学的变化,通过免疫组织化学染色及Western blot技术检测HSP70在腮腺中的表达。采用SPSS17.0对数据进行统计分析。结果对照组腮腺结构基本正常,实验组腮腺组织中可见不同程度的局灶性淋巴细胞浸润、腺泡细胞萎缩,导管扩张,血管扩张充血;对照组腮腺组织HSP70表达阴性,实验组腮腺组织HSP70表达阳性,随着+Gx强度的加大而表达增强的趋势。实验组(除D4组外)HSP70在蛋白水平的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论模拟失重、超重环境可造成猕猴腮腺出现轻度病理变化,腮腺组织中HSP70表达显著增强。