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HSP70-2基因多态性与体质指数、饮酒的交互作用对维吾尔族缺血性心力衰竭患者预后的影响
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作者 郭淑丽 罗先道 +2 位作者 尹小雨 杨毅宁 杨磊 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期101-109,共9页
目的:探讨HSP70-2基因多态性与体质指数(BMI)、饮酒对维吾尔族缺血性心力衰竭(IHF)患者预后的影响及其交互作用。方法:选择2014年6月—2017年6月在乌鲁木齐市友谊医院心内科住院的维吾尔族IHF患者205例,匹配年龄、性别、民族,收集同期... 目的:探讨HSP70-2基因多态性与体质指数(BMI)、饮酒对维吾尔族缺血性心力衰竭(IHF)患者预后的影响及其交互作用。方法:选择2014年6月—2017年6月在乌鲁木齐市友谊医院心内科住院的维吾尔族IHF患者205例,匹配年龄、性别、民族,收集同期在该院门诊体检指标无明显异常的健康体检者200名作为健康对照组。采用聚合酶链反应检测HSP70-2基因+1267多态性。采用多因素非条件logistic回归分析IHF患者预后相关的危险因素,并通过叉生分析法计算交互作用的相对超额风险(RERI),分析HSP70-2基因多态性与BMI、饮酒的交互作用对患者预后的影响。结果:随访3年,205例IHF患者中,预后不良56例(27.32%),预后良好149例(72.68%)。与健康对照组和预后良好组比较,预后不良组饮酒比例明显增加,BMI、左心室射血分数明显降低,丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)明显升高(均P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组HSP70-2基因型AA/AG/GG、A/G等位基因分布差异有统计学意义(均P<0.05),且不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级IHF患者HSP70-2基因型分布不同(χ^(2)=45.42,P<0.01);A/G等位基因分布也不同,随着心功能级别升高,HSP70-2基因A等位基因频率升高、G等位基因频率降低(χ^(2)=19.14,P<0.01)。多因素logistic回归分析结果显示,饮酒、ALT、AST是IHF患者预后不良的危险因素,而BMI、HSP70-2GG基因型(相比AA基因型)为IHF患者预后不良的保护因素(均P<0.05)。叉生分析结果显示,BMI与HSP70-2基因多态性有显著加性交互作用(RERI=1.15,95%CI:0.54~1.76,P<0.01),对于携带HSP70-2 AA/AG基因型的患者,BMI小于26.5 kg/m^(2)会增加预后不良的风险(OR=7.47,95%CI:2.51~22.22,P<0.01);饮酒与HSP70-2基因多态性无显著加性交互作用(RERI=0.56,95%CI:-6.07~7.20,P>0.05)。结论:维吾尔族IHF患者HSP70-2基因多态性与BMI具有交互作用,携带AA/AG基因型、BMI小于26.5 kg/m^(2)会增加IHF患者预后不良的风险。 展开更多
关键词 缺血性心力衰竭 hsp70-2基因 体质指数 饮酒 交互作用
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HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用 被引量:5
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作者 隋春阳 李航宇 +3 位作者 胡勇 宗志红 李洪秀 郭仁宣 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第18期1775-1779,共5页
目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,... 目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况.结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1.5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0.1 mg/L:t=-0.2500,P=0.00; t=-0.1777,P=0.001:t=-0.3094,P=0.001; 0.5 mg/L:t=-0.2878,P=0.00;t=-0.2044,P= 0.00;t=-0.3285,P=0.00;1 mg/L:t=-0.3118, P=0.00;t=-0.2592,P=0.00;t=-0.1994, P=0.025;5 mg/L:t=-0.4007,P=0.00;t= -0.1302,P=0.016;t=-0.2537,P=0.005),细胞存活率明显高于对照组(P<0.01).结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长. 展开更多
关键词 hsp70-肿瘤肽复合物 纯化 肝癌 HepG-2细胞系 WESTERN BLOT MTT
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抑制HSP70-2基因表达诱导肝癌细胞G_2/M期阻滞的机制研究 被引量:3
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作者 夏丽敏 田德安 +5 位作者 张琼 晏维 周珍珍 朱倩 罗敏 张全乐 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2008年第12期966-970,共5页
目的探讨HSP70-2在肝癌组织中的表达,以及抑制HSP70-2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制。方法免疫组织化学检测HSP70-2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达,Western blot检测HSP70-2在5种肝癌细胞株中的表达。设计合成针对HSP7... 目的探讨HSP70-2在肝癌组织中的表达,以及抑制HSP70-2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制。方法免疫组织化学检测HSP70-2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达,Western blot检测HSP70-2在5种肝癌细胞株中的表达。设计合成针对HSP70-2基因的特异性shRNA,构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2。转染肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测HSP70-2表达及细胞周期相关蛋白p-Cdc2(Tyr15)、Cdc25C、Cdc2和cyclinB1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示,45例肝癌组织中有33例(73.3%)HSP70-2蛋白表达阳性,45例癌旁组织中仅4例(8.9%)表达阳性,表达差异有显著性(P<0.05)。HSP70-2蛋白在HepG2、Bel-7402、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞中的表达明显高于其在L02细胞中的表达。HSP70-2 shRNA1和shRNA2均能有效抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7402中HSP70-2的表达。与control shRNA组相比,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2组HepG2和Bel-7402细胞生长增殖速度均明显减慢,细胞周期表现为处于G2/M期的细胞比例显著增加。Western blot检测发现,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2后肝癌细胞中磷酸化的p-Cdc2(Tyr15)表达增加,Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达显著减少。结论HSP70-2在肝癌中过表达,抑制HSP70-2表达可以显著抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞,其诱导G2/M期阻滞的机制是通过影响Cdc25C-Cdc2/cyclinB1通路来实现的。 展开更多
关键词 hsp70-2 肝癌 RNA干扰 细胞周期
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冠心病患者HSP70-2+1267A/G多态性与高敏C反应蛋白水平的相关性研究 被引量:1
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作者 段成城 陈倩 +5 位作者 王方剑 江勇 潘小华 郑美梅 董丽妍 温武金 《心脑血管病防治》 2010年第4期267-269,共3页
Objective To explore the relationship between heat-shock protein 70-2 gene +1267A/G polymorphism(HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism) and serum level of high sensitivity C-reactive protein(Hs-CRP) in patients with coro... Objective To explore the relationship between heat-shock protein 70-2 gene +1267A/G polymorphism(HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism) and serum level of high sensitivity C-reactive protein(Hs-CRP) in patients with coronary artery disease(CAD).Methods Serum Hs-CRP level and HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism were detected in 185 patients with CAD.HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism was screened by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP).Results The genotype distribution of the HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism was as follows: AA was in 24 of 185 patients(12.97%),AG in 93 of 185 patients(50.27%) and GG in 68 of 185 patients(36.76%).Patients with GG、AG subtype had higher Hs-CRP levels compared with carriers of the AA subtype(4.5±1.8mg/L,3.2±1.2mg/L and 2.7±1.1mg/L,respectively,P<0.05).Among patients who had Hs-CRP >3mg/L,GG,and AG gene subtypes had higher percentage than A allele homozygotes(92.6%,74.2% and 45.8%,respectively.χ2=17.75,28.04,P<0.05).Conclusions This study indicated G allele of HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism may be an independent risk factor in systemic inflammation with stable CAD. 展开更多
关键词 冠心病患者 冠状动脉粥样硬化斑块 蛋白水平 相关性 C反应 多态性 Protein ARTERY
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谷氨酰胺对高温应激奶牛乳腺上皮细胞凋亡及Bcl-2、HSP70表达的影响 被引量:1
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作者 张响英 唐现文 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第10期111-115,共5页
为探讨谷氨酰胺预处理抗高温应激损伤的作用,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞,分为对照组、谷氨酰胺组、高温组、谷氨酰胺+高温组,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡、荧光... 为探讨谷氨酰胺预处理抗高温应激损伤的作用,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞,分为对照组、谷氨酰胺组、高温组、谷氨酰胺+高温组,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡、荧光定量PCR检测Bcl-2基因和HSP70基因的表达水平、比色法分析Caspase-3活性。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞经谷氨酰胺预处理后,HSP70 mRNA表达量极显著增加(P <0. 01),提高了热应激状态下细胞的热耐受性和存活力;与高温组相比,谷氨酰胺+高温处理组Bcl-2 mRNA表达量在热恢复0、6、12 h分别提高3. 23倍(P <0. 05)、2. 49倍(P <0. 05)、1. 89倍(P> 0. 05),Caspase-3活性分别下降68. 04%(P <0. 01)、40. 89%(P <0. 05)、52. 06%(P <0. 01)。综上,谷氨酰胺预处理促进了奶牛乳腺上皮细胞Bcl-2和HSP70表达,缓解了高温应激引起的Caspase-3活性上升,抑制了热应激所致的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 谷氨酰胺 热应激 hsp 70基因 Bcl-2基因 CASPASE-3活性
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热应激对小鼠睾丸Hsp70-2基因mRNA转录水平的影响 被引量:2
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作者 姜忠玲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第36期15799-15801,共3页
用半定量RT-PCR方法检测不同温度、相同时间(4 h)热应激处理小鼠睾丸组织中Hsp70-2基因的mRNA转录水平,以研究热应激对Hsp70-2基因mRNA转录的影响。结果显示,各热应激组小鼠睾丸Hsp70-2 mRNA转录水平下降,并且温度越高,其下降幅度越大... 用半定量RT-PCR方法检测不同温度、相同时间(4 h)热应激处理小鼠睾丸组织中Hsp70-2基因的mRNA转录水平,以研究热应激对Hsp70-2基因mRNA转录的影响。结果显示,各热应激组小鼠睾丸Hsp70-2 mRNA转录水平下降,并且温度越高,其下降幅度越大。与对照组相比,33℃组小鼠Hsp70-2 mRNA相对转录水平显著(P<0.05)下降,而37℃组和42℃组下降极显著(P<0.01)。42℃组Hsp70-2 mRNA相对转录水平仅为对照组的44.7%。上述结果说明,热应激使Hsp70-2基因mRNA转录水平下降,热应激对雄性生殖机能的影响与Hsp70-2减少有关,而Hsp70-2 mRNA转录水平可以作为热应激对雄性生殖机能损伤程度的判断指标之一。 展开更多
关键词 热应激 小鼠 睾丸 RT-PCR hsp70-2 MRNA
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低质量浓度2-硝基-4′-羟基二苯胺暴露对鲫鱼鳃组织HSP70诱导的影响
7
作者 沈骅 孙媛媛 +1 位作者 张景飞 王晓蓉 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期87-90,共4页
采用实验室模拟的方法,以日本锦鲫(Carassiusauratus)作为实验生物,运用SDS变性胶(SDS-PAGE)蛋白电泳和免疫印迹(WesternBlotting)等分子生物学技术,研究了1mgL2-硝基-4′-羟基二苯胺(HCOrangeNo.1)在不同暴露时期对鲫鱼鳃组织应激蛋白H... 采用实验室模拟的方法,以日本锦鲫(Carassiusauratus)作为实验生物,运用SDS变性胶(SDS-PAGE)蛋白电泳和免疫印迹(WesternBlotting)等分子生物学技术,研究了1mgL2-硝基-4′-羟基二苯胺(HCOrangeNo.1)在不同暴露时期对鲫鱼鳃组织应激蛋白HSP70诱导表达的情况,并探讨了鲫鱼鳃组织HSP70作为该有机污染物生物标志物的可行性。结果表明:鲫鱼鳃组织HSP70在暴露2d后相对于空白对照组开始有显著的表达(P<0.05),并随着暴露天数的增加其表达量显著增加;在暴露4d后其表达量达到最大值;在暴露7d后其表达量开始下降,但可能由于长时间的有机物毒性胁迫,造成了鲫鱼鳃组织损伤和病变,HSP70在随后的暴露时间段内表达量明显下降,均显著低于空白对照组(P<0.05),因此,鲫鱼鳃组织HSP70并不适宜作为该有机污染物在自然界水生生态系统中的生物标志物。 展开更多
关键词 鲫鱼鳃 2-硝基-4’-羟基二苯胺(HC ORANGE No.1) 生物标志物 hsp70 免疫印迹
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丙氨酰-谷氨酰胺对体外培养的免疫抑制建鲤淋巴细胞IL-1β,IL-2以及HSP70 mRNA表达的影响
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作者 陈秀梅 王桂芹 +5 位作者 芦洪梅 韩宇田 申斌 李萌 丛林梅 徐贺 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2015年第2期78-84,共7页
以建鲤(Cyprinus carpio var.jian)为研究对象,探讨丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对体外培养的免疫抑制建鲤淋巴细胞IL-lβ、IL-2以及HSP70mRNA表达的影响。通过对建鲤注射环磷酰胺(CY)来建立免疫抑制模型,以注射生理盐水的建鲤作为对... 以建鲤(Cyprinus carpio var.jian)为研究对象,探讨丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对体外培养的免疫抑制建鲤淋巴细胞IL-lβ、IL-2以及HSP70mRNA表达的影响。通过对建鲤注射环磷酰胺(CY)来建立免疫抑制模型,以注射生理盐水的建鲤作为对照,分离外周血和头肾淋巴细胞在含不同Ala-Gln浓度(0.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0 mmol/L)的培养液中进行体外培养。结果表明,Ala-Gln浓度为0.0、2.0、4.0mmol/L时,免疫抑制组建鲤外周血(PBL)IL-1β表达显著高于对照组(P〈0.05),其他组差异不显著。对照组和免疫抑制组建鲤PBL IL-2表达均随Ala-Gln浓度增加而显著提高(P〈0.05),且对照组均显著高于免疫抑制组(P〈0.05)。免疫抑制组头肾淋巴细胞HSP70mRNA的表达随着Ala-Gln浓度的增加而显著增加(P〈0.05),均显著高于对照组(P〈0.05)。在本试验条件下,一定范围(4.0~10.0mmol/L)内添加Ala-Gln,可显著提高HSP70mRNA表达,降低血淋巴细胞IL-lβ表达的水平,恢复血淋巴细胞IL-2表达的水平,从而缓解免疫抑制。 展开更多
关键词 丙氨酰-谷氨酰胺 建鲤 免疫抑制 IL- IL-2 hsp70 mRNA
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Fas/FasL、Hsp70-2、HSF2和P16蛋白在热压或11酸睾酮诱导恒河猴无精或严重少精过程中作用的研究
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作者 周新昌 胡召元 +1 位作者 韩晓彬 刘以训 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第B10期33-34,共2页
关键词 恒河猴 无精 少精 热压 11酸睾酮 诱导 分子机理 FAS/FASL hsp 70-2 HSF2 P16蛋白
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HSP70-2基因多态性与急性胰腺炎的相关性分析 被引量:2
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作者 杨彩芳 闫乐 梁浩卫 《实验与检验医学》 CAS 2019年第4期578-581,共4页
目的探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因多态性与急性胰腺炎的相关性。方法选取2016年3月至2017年7月在河南省新密市中医院治疗的急性胰腺炎患者91例,其中轻型胰腺炎患者47例(轻型组),重型胰腺炎44例(重型组),同时选取健康志愿者100例作为对照... 目的探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因多态性与急性胰腺炎的相关性。方法选取2016年3月至2017年7月在河南省新密市中医院治疗的急性胰腺炎患者91例,其中轻型胰腺炎患者47例(轻型组),重型胰腺炎44例(重型组),同时选取健康志愿者100例作为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测HSP70-2基因多态性;同时比较不同预后患者基因多态性的等指标差异。结果重型组基因型GG和等位基因G比例分别为43.18%和62.50%,明显高于轻型组和对照组(P<0.05);轻型组基因型GG和等位基因G比例分别为31.91%和52.13%,明显高于对照组(P<0.05);91例急性胰腺炎患者中死亡16例(死亡组);死亡组基因型GG比例为87.50%,明显高于存活组(P<0.05);死亡组C反应蛋白(CRP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、CT严重指(CTSI)评分和性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)评分明显高于存活组(P<0.05);Logistic回归分析,结果显示CTSI评分、APACHEⅡ评分和HSP70-2基因型GG是急性胰腺炎患者死亡的影响因素(OR=2.252(1.131~8.821)、2.188(1.201~6.984)和1.324(1.131~3.154),P<0.05)。结论HSP70-2基因GG型及等位基因G与急性胰腺炎病情、预后有关。 展开更多
关键词 hsp70-2基因 基因多态性 急性胰腺炎 病情程度 预后
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毛细管电泳-激光诱导荧光法检测HSP70-2基因多态性研究 被引量:2
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作者 阮佳 李永儒 +2 位作者 孙成均 周琛 李永新 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1135-1138,共4页
建立了HSP70-2基因多态性的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法。采用试剂盒法提取人血清标本中全基因组DNA作为模板,选择特异引物进行PCR扩增反应,产物用Pst I限制性内切酶酶切;酶切产物用高灵敏度的SYBR Gold荧光染料标记后,... 建立了HSP70-2基因多态性的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法。采用试剂盒法提取人血清标本中全基因组DNA作为模板,选择特异引物进行PCR扩增反应,产物用Pst I限制性内切酶酶切;酶切产物用高灵敏度的SYBR Gold荧光染料标记后,用毛细管电泳-激光诱导荧光法检测。在优化的毛细管电泳-激光诱导荧光条件下,酶切产物在25 min内即可完成检测。GeneRular 100bp DNA ladder在同一天内连续测定6次,迁移时间和峰面积的RSD分别为1.8%~2.9%和2.8%~7.9%;连续6日测定迁移时间与峰面积的RSD分别为2.1%~4.3%和3.5%~9.3%。本研究共检测200份样品,其中G/G分型3份,A/G分型25份,A/A分型172份,检测结果与凝胶电泳结果一致。CE-LIF检测方法具有电泳时间短、试样消耗少、绿色环保等优点,能用于HSP70-2基因多态性的检测。 展开更多
关键词 hsp70-2基因 基因多态性检测 毛细管电泳-激光诱导荧光检测
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葛根素固体脂质纳米粒保护长爪沙鼠脑缺血-再灌注损伤的分子机制初探 被引量:4
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作者 朱柳 罗承锋 +2 位作者 袁牧 陈敏生 季红 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1900-1904,共5页
目的:探讨葛根素固体脂质纳米粒灌服给药对长爪沙鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其分子机制,为葛根素固体脂质纳米粒口服新剂型应用提供初步实验依据。方法:将长爪沙鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注损伤模型组、葛根素固体脂质纳... 目的:探讨葛根素固体脂质纳米粒灌服给药对长爪沙鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其分子机制,为葛根素固体脂质纳米粒口服新剂型应用提供初步实验依据。方法:将长爪沙鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注损伤模型组、葛根素固体脂质纳米粒组和葛根素注射液对照组,采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作长爪沙鼠前脑缺血-再灌注损伤模型,应用HE染色及免疫组织化学法观察脑组织形态学变化及Bcl-2、Caspase-3和HSP70的蛋白表达变化。结果:脑缺血-再灌注24 h后,与模型组比较,葛根素固体脂质纳米粒组脑组织病理变化改善,在海马区和皮质区Bcl-2及HSP70阳性细胞表达显著升高(P<0.01),而Caspase-3阳性细胞表达比模型组显著降低(P<0.01);葛根素注射剂对照组脑保护作用结果及机制与葛根素固体脂质纳米粒组结果一致。结论:葛根素固体脂质纳米粒口服给药可通过诱导HSP70及Bcl-2蛋白水平高表达并同时降低Caspase-3蛋白表达对脑缺血-再灌注损伤起保护作用。 展开更多
关键词 葛根素 固体脂质纳米粒 脑缺血-再灌注损伤 Bcl-2 CASPASE-3 hsp70
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Hsp70A-RBCS2融合启动子调控PHB合成酶基因在莱茵衣藻中的表达 被引量:1
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作者 王潮岗 胡章立 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2009年第8期775-782,共8页
利用Hsp70A-RBCS2融合启动子构建了新型的莱茵衣藻表达载体,并获得了聚-β-羟基丁酸(PHB)合成酶基因(phbC)的衣藻表达载体p105C124和pH105C124.通过"珠磨法"分别将上述两个衣藻表达载体导入细胞壁缺陷的莱茵衣藻CC-849(Chlamy... 利用Hsp70A-RBCS2融合启动子构建了新型的莱茵衣藻表达载体,并获得了聚-β-羟基丁酸(PHB)合成酶基因(phbC)的衣藻表达载体p105C124和pH105C124.通过"珠磨法"分别将上述两个衣藻表达载体导入细胞壁缺陷的莱茵衣藻CC-849(Chlamydomonas reinhardtii CC-849)中,得到了具有Zeomycin抗性的转基因藻株.Hsp70A-RBCS2启动子介导的外源基因遗传转化效率明显高于RBCS2启动子,Southern杂交结果显示,phbC基因以低拷贝数整合进莱茵衣藻的基因组DNA中.在光照下,Hsp70A-RBCS2融合启动子能够有效调控phbC基因在莱茵衣藻中的转录和翻译,得到的蛋白产物具有PHB合成酶活性,40℃热激诱导可使PHB合成酶的酶活性提高到1.8倍.因此,Hsp70A-RBCS2融合启动子可使phbC基因在莱茵衣藻中实现可诱导的表达,该研究对利用衣藻合成PHB具有重要的学术意义,进一步的研究将通过"共转化"法获得二价或三价的转基因藻,最终实现在转基因藻中合成PHB. 展开更多
关键词 转基因衣藻 phbC基因 hsp70A-RBCS2启动子 -β-羟基丁酸(PHB)
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干扰HSP70-2的shRNA表达载体的构建及筛选
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作者 马建鸿 李世文 罗仪 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第4期426-429,434,共5页
目的:利用pGenesil-1质粒构建针对热休克蛋白HSP70-2的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计针对HSP70-2表达shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,... 目的:利用pGenesil-1质粒构建针对热休克蛋白HSP70-2的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计针对HSP70-2表达shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析。利用质粒转染大鼠精原细胞,用RT-PCR和Western blotting法检测转染后HSP70-2 mRNA和蛋白表达变化。结果:成功构建靶向HSP70-2的3个shRNA重组质粒载体pGenesil-1-HSP70-21、pGenesil-1-HSP70-22和pGenesil-1-HSP70-23。酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。质粒筛选实验提示pGenesil-1-HSP70-23质粒对精原细胞HSP70-2基因的抑制作用最强,而pGenesil-1-HSP70-21的抑制作用最弱。结论:成功构建表达靶向HSP70-2的shRNA重组质粒载体。 展开更多
关键词 hsp70-2 RNAI SHRNA 串联质粒
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闭塞性动脉硬化症血瘀证患者bcl-2和HSP70基因的表达
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作者 马民 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2004年第S2期1-5,共5页
目的:从基因水平探讨闭塞性动脉硬化症血瘀证微观实质.方法:以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160例闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,用流式细胞技术,进行了bcl-2和HSP70基因的表达的观察、对比、分析,并以健康人为对照,从基... 目的:从基因水平探讨闭塞性动脉硬化症血瘀证微观实质.方法:以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160例闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,用流式细胞技术,进行了bcl-2和HSP70基因的表达的观察、对比、分析,并以健康人为对照,从基因水平对闭塞性动脉硬化症血瘀证形成的微观机理和演变规律进行探索.结果:闭塞性动脉硬化症血瘀证患者存在CD62p基因、HSP70基因的异常表达(P<0.01或P<0.05),并且其指标异常与基因表达水平的高低与血瘀证各型之间存在密切关系.结论:基因组学是病证研究的最佳切入点. 展开更多
关键词 闭塞性动脉硬化症 血瘀证 BCL-2基因 hsp 70基因
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利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白 被引量:1
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作者 徐国双 姜童潇 +3 位作者 郭艺迪 段铭 张茂林 关振宏 《广东农业科学》 CAS 2022年第1期121-127,共7页
【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进... 【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒H7N9 PA-X GST pull-down 质谱 hsp70-2 蛋白互作
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Heat shock protein 70-2 and tumor necrosis factor-α gene polymorphisms in Chinese children with Henoch- Schönlein purpura 被引量:3
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作者 Gui-Xia Ding Chen-Hu Wang +5 位作者 Ruo-Chen Che Wan-Zhen Guan Yang-Gang Yuan Min Su Ai-Hua Zhang Song-Ming Huang 《World Journal of Pediatrics》 SCIE CSCD 2016年第1期49-54,共6页
Background:Henoch-Schönlein purpura(HSP)or IgAassociated vasculitis is related to immune disturbances.Polymorphisms of the heat shock protein 70-2 gene(HSP70-2)and the tumor necrosis factor-αgene(TNF-α)are know... Background:Henoch-Schönlein purpura(HSP)or IgAassociated vasculitis is related to immune disturbances.Polymorphisms of the heat shock protein 70-2 gene(HSP70-2)and the tumor necrosis factor-αgene(TNF-α)are known to be associated with immune diseases.The purpose of this study was to investigate the likely association of HSP70-2(+1267A/G)and TNF-α(+308A/G)gene polymorphisms with HSP in children.Methods:The polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism method was used to detect the HSP70-2 and TNF-αpolymorphisms in 205 cases of children with HSP and 53 controls;and the association of these polymorphisms with HSP and HSP nephritis(HSPN)was analyzed.Results:The G/G genotypic frequencies at the+1267A/G position of HSP70-2 in the HSP group(22.9%)were signifi cantly higher than those in the healthy control group(9.4%)(χ^(2)=4.764,P<0.05).The frequencies of the A/A,A/G and G/G genotypes of HSP70-2 in patients in the nephritis-free group and the HSPN group showed no statistically significant difference.The A/A genotype frequency at the+308G/A position of TNF-αin the HSP group was 8.3%,which was higher than that in the control group(χ^(2)=6.447,P<0.05).The A allele frequency of TNF-αin the HSP group was higher than that in the control group,with a statistically significant difference(χ^(2)=7.241,P<0.05).Conclusions:The HSP70-2(+1267A/G)and TNF-α(+308G/A)gene polymorphisms were associated with HSP in children.The G/G homozygosity of HSP70-2 and the A/A homozygosity of TNF-αmay be genetic predisposing factors for HSP. 展开更多
关键词 gene polymorphism heat shock protein 70-2 Henoch-Schönlein purpura Henoch-Schönlein purpura nephritis tumor necrosis factor-α
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石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚联合左旋多巴对6-OHDA诱导帕金森模型大鼠的分子伴侣介导自噬的影响 被引量:4
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作者 黄丽平 宁百乐 +2 位作者 王南卜 张芹欣 邓敏贞 《中药材》 北大核心 2020年第7期1716-1720,共5页
目的:研究石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚联合左旋多巴(L-dopa)对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导帕金森(PD)模型大鼠的分子伴侣介导自噬(CMA)的影响。方法:将SD大鼠通过脑立体定位仪于内侧前脑束(MFB)处注射6-OHDA制备PD模型大鼠。将60只PD大... 目的:研究石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚联合左旋多巴(L-dopa)对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导帕金森(PD)模型大鼠的分子伴侣介导自噬(CMA)的影响。方法:将SD大鼠通过脑立体定位仪于内侧前脑束(MFB)处注射6-OHDA制备PD模型大鼠。将60只PD大鼠随机分为5组,每组12只,即模型组、MEF2D抑制剂(SB203580,0.5 mg/kg)组、MEF2D激活剂(LiCl,100 mg/kg)组、β-细辛醚(15 mg/kg)组、联合用药组(L-dopa 60 mg/kg+β-细辛醚15 mg/kg)组。给药组按上述剂量灌胃给药,2次/d,持续30 d。而假手术组和模型组按0.5 mL/kg灌胃蒸馏水,2次/d。实验结束后ELISA法检测α-syn、TH、LAMP-2A、HSP70、MEF2D水平,RT-PCR法和Western blot法检测Beclin-1、HSP70、HSC70、MEF2D mRNA及蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组α-syn和Beclin-1显著升高,TH、LAMP-2A、HSP70、MEF2D、HSC70显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,MEF2D抑制剂组的α-syn显著升高,Beclin-1、TH、LAMP-2A水平及HSP70、MEF2D、HSC70 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01),而LiCl组、β-细辛醚组和联合用药组的α-syn、Beclin-1显著降低,TH、LAMP-2A水平及HSP70、MEF2D、HSC70 mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:石菖蒲挥发油有效成分β-细辛醚与L-dopa联合用药通过调节HSP70/MEF2D/Beclin-1分子伴侣介导的自噬通路降低6-OHDA诱导PD大鼠中多巴胺能神经元的损伤。 展开更多
关键词 Β-细辛醚 左旋多巴 分子伴侣介导的自噬 hsp70/MEF2D/Beclin-1自噬通路
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HSP70基因多态性与宁夏回汉民族2型糖尿病的关联研究 被引量:1
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作者 陶秀娟 宋琳 +3 位作者 强艳 赵川 杨阳 宋辉 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期719-723,728,共6页
目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)家族基因多态性与宁夏回汉族人群2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)之间的关联。方法采用病例对照研究设计,按照纳入与排除标准,于2010年3月至2011年10月在宁夏医科大学第二... 目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)家族基因多态性与宁夏回汉族人群2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)之间的关联。方法采用病例对照研究设计,按照纳入与排除标准,于2010年3月至2011年10月在宁夏医科大学第二附属医院与教学医院(吴忠市人民医院)收集201例T2DM患者和471例按年龄、性别、民族匹配的健康人为研究对象。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术分析基因HSP70-1(+190G/C)、HSP70-2(+1267A/G)和HSP70-hom(+2437T/C)的基因型及等位基因分布的频率。采用2检验及Logistic回归分析研究指标与T2DM间的关系。结果 HSP70-1、HSP70-hom基因各基因型及等位基因频率在病例组及对照组的分布差异均无统计学意义(P>0.05),而病例组HSP70-2基因GG基因型及G等位基因频率明显高于对照组,差异均有统计学意义(2=14.737,12.769,P<0.01);HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom基因各基因型及等位基因频率在回汉族人群中分布的差异均无统计学意义(P>0.05);病例组与对照组中不同性别人群HSP70-1基因+190位点和HSP70-hom基因+2437位点基因型及等位基因频率分布的差异均无统计学意义,病例组男性HSP70-2基因型频率分布与女性比较差异无统计学意义(P>0.05),而等位基因频率的差异有统计学意义(2=4.165,P<0.05);病例组男性HSP70-1、HSP70-hom基因各基因型及等位基因频率与女性比较差异均无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic回归分析显示,T2DM患病的危险因素主要有腰围(waist circumference,WC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、糖尿病家族史、G等位基因;而高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)为其保护性因素。结论 HSP70-2基因GG基因型及G等位基因携带可能与T2DM的发病有关;宁夏回汉民族间HSP70家族基因各基因型及等位基因频率的分布无明显差异;糖尿病家族史、LDL-C、TC、HSP70-2 G等位基因是影响回汉族人群T2DM发病的重要危险因素;不同性别间HSP70-2基因G等位基因频率的分布可能存在差异,有待进一步研究证实。 展开更多
关键词 糖尿病 2 hsp70热休克蛋白质类 基因多态性 聚合酶链反应 多态性 限制性片段长度 回族 汉族
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象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能分析 被引量:1
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作者 陈慧 王会芳 +1 位作者 赵志祥 陈绵才 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2653-2661,共9页
Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Esch... Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行表达。对转入Me Hsp70基因的大场杆菌BL21、转入空载的大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21原始菌种在55℃、65℃进行热稳定性测定,在37℃、200 r/min条件下进行生长曲线测定。热稳定性试验结果表明,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌生存时间较长,而转入p EASY-E1-Me Hsp70的菌株、转入空载的菌株和原始菌株热稳定性都相对较差。通过荧光定量PCR测定发现Me Hsp70基因均有上调表达,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌Hsp70基因水平高于其他菌株。生长曲线测定试验结果表明,重组菌株与原始菌株生长曲线基本一致,转入p ET30a-Me Hsp70载体的菌株调整期滞留时间长于其他菌株。该项研究表明Me Hsp70基因能够提升大肠杆菌BL21的抗应激能力和影响大肠杆菌BL21的生长,为进一步开展Me Hsp70基因在象耳豆根结线虫生长过程的功能研究提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 象耳豆根结线虫 热休克蛋白70基因 大肠杆菌 抗逆性 生长曲线
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