绵羊肺炎支原体P30-HSP70C融合蛋白的表达及免疫原性研究

为增强绵羊肺炎支原体标准株Y98的外膜抗原P30的免疫原性,本研究构建p30-hsp70C融合基因的原核重组表达载体,并转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE和western blot结果表明,P30-HSP70C融合蛋白约40%以可溶性形式表达。将r P30和r P30-HSP70C以100μg/只剂量分别免疫小鼠,免疫两次。间接ELISA试验表明,免疫的小鼠血清中两种蛋白的抗体效价分别为1∶8 000和1∶128 000。此外,两种蛋白免疫的小鼠血清中均检测出特异性的P30抗体。小鼠免疫保护试验结果显示,r P30和r P30-HSP70C的免疫保护率分别为50%和80%。这些结果表明P30和HSP70C的融合表达可以显著增强P30蛋白的免疫保护效果。

不同周龄组的C57BL小鼠多巴胺神经元对MPTP敏感性的对比及其机制探讨

目的:观察不同周龄的C57BL小鼠多巴胺神经元对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)的药物敏感性差异,探讨其差异的机制是否与热休克蛋白70(HSP70)不同表达相关。方法:将4～6周龄及15～17周龄的C57BL小鼠给予MPTP造成帕金森病模型,同时设立对照组。采用高效液相法检测纹状体内多巴胺(DA)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)的含量,免疫组化法观察黑质中酪胺酸羟化酶(TH)阳性细胞及HSP70的表达。结果:15～17周龄小鼠在MPTP造模后纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量,黑质中的TH阳性细胞数和HSP70的表达含量均明显低于4～6周龄模型组(P<0.05),而两个周龄的对照组的各项指标均无明显差异。结论:15～17周龄的C57BL小鼠对于MPTP的敏感性明显高于4～6周龄小鼠,HSP70的表达量不同可能是造成敏感性差异的原因之一。

热休克蛋白70 C末端反应蛋白对人小细胞肺癌细胞株的作用

目的探讨热休克蛋白70C末端反应蛋白(C-terminus of hsp70-interacting protein,CHIP)过表达对MET以及SCLC细胞株凋亡以及侵袭功能的影响。方法体外培养SCLC细胞株,免疫印迹法检测SCLC细胞系中CHIP,MET的表达关系。用pcDNA3-CHIP(+)和pcDNA3(-)构建的NCI-H69细胞,检测ERK,FAK,pERK1/2,Akt,pFAK,GFP,Myc和paxillin的表达,评价CHIP和MET蛋白的表达。用GFP标记的CHIP和Myc标记的MET表达载体共转染NCI-H69细胞,免疫沉淀方法检测CHIP与MET的相互作用。最后对CHIP转染的细胞行细胞活力、细胞凋亡和细胞侵袭试验。结果CHIP与MET在SCLC细胞系中的表达呈反比关系。转染pcDNA3-CHIP(+)后的细胞CHIP蛋白表达升高,同时MET蛋白表达降低。CHIP过表达的肿瘤细胞中的paxillin和FAK活化程度降低。CHIP过表达SCLC细胞株的侵袭能力下降,细胞生长活力明显下降,凋亡水平增加。转染阴性对照载体(-)或CHIP表达载体(+)的NCI-H69细胞中CHIP过表达后MET的聚泛素化水平升高。结论CHIP抑制MET依赖性信号,调节MET介导的SCLC运动、凋亡和侵袭。此外,CHIP通过在SCLC细胞系中的过表达,可明显减少细胞侵袭和生长,同时促进细胞凋亡。