新型Hsp90/HDAC双靶点抑制剂对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的 研究新型热休克蛋白90(Hsp90)/组蛋白去乙酰化酶(HDAC)双靶点抑制剂FXX-W-12-4对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测FXX-W-12-4对MDA-MB-231细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC50)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC50值为依据,在MDA-MB-231细胞中分别加入终浓度为0、100、200、300 nmol/L的FXX-W-12-4(分别设为A、B、C、D组),采用划痕实验、Transwell实验分别检测FXX-W-12-4对各组MDA-MB-231细胞侵袭以及迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测各组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着FXX-W-12-4浓度的升高,MDA-MB-231细胞活力逐渐下降(F=2 663.00,P<0.05)。划痕实验结果显示,与A组相比,B~D组MDA-MB-231细胞在第12、24、48小时时迁移能力均明显降低(F=86.47~212.59,P<0.05)。Transwell实验结果显示,与A组相比,随着FXX-W-12-4浓度的升高,B~D组MDA-MB-231细胞的侵袭能力均受到了抑制(F=68.67,P<0.05)。Western Blot检测结果显示,与A组比较,随着FXX-W-12-4浓度的增加,B~D组MDA-MB-231细胞中ac-H3、Hsp70蛋白相对表达量显著性增高(F=645.60、1 017.00,P<0.05),而p-Akt、p-mTOR蛋白表达量显著性下降(F=480.30、14.32,P<0.05)。结论 新型Hsp90/HDAC双靶点抑制剂FXX-W-12-4可有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移,其抑制作用可能是通过调节Akt/mTOR通路实现的。

热休克蛋白90抑制剂治疗新生血管性眼病的研究现状

热休克蛋白90（HSP90）作为一种广泛存在的分子伴侣，在新生血管性疾病的发生发展中起重要作用。HSP90抑制剂能抑制HSP90活性，引起与细胞增生、细胞周期调节、细胞凋亡有关的重要信号蛋白选择性降解，并通过与磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B和类风湿性关节炎因子／蛋氨酸脑啡肽／促分裂原活化蛋白激酶等信号通路中的多种HSP90客户蛋白分子相互作用，降低血管生成因子的表达，从而抑制血管内皮细胞的增生和存活。研发特异性的HSP90抑制剂药物已经成为治疗肿瘤及相关新生血管性疾病的新选择。其可能成为治疗新生血管性眼病的全新靶点。

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对HUT-102细胞株JAK3／STAT5信号通路的影响

目的通过体外实验探索成人T细胞白血病（ATL）细胞内JAK／STAT信号通路的异常持续激活与HSP90蛋白的相关性。方法使用不同浓度17-烯丙胺-17．脱甲氧格尔德霉素（17-AAG）作用于HTLV-1感染ATL细胞株HuT_102，CCK8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，RT-PCR检测JAK3基因mRNA表达，Westernblot检测JAK3、STAT5、P—STAT5、HSP90蛋白表达。结果HUT-102细胞株内HSP90蛋白表达量品著高于正常人外周血单个核细胞（P〈0．05）。17-AAG能显著抑制HUT-102细胞增殖，17-AAG的浓度在0-2000nmol／L时，细胞存活率随着给药浓度的提高逐渐下降，17-AAG浓度在2000-8000nmol／L范同时，细胞存活率差异无统计学意义（P〉0．05）。细胞凋亡实验中，未刺激组细胞凋亡率为（9．23i0．67）％，刺激组凋广率随着17-AAG浓度增加而显著增加，浓度2000nmol／L时凋亡率达到（87．82±2．46）％；但在不同浓度（0、250、500、1000nmol／L）抑制剂刺激HuT-102细胞24h后，JAK3mRNA的表达无明显变化。结论HTLv感染的ATL细胞株HUT-102细胞中，JAK3激酶作为HSP90的客体蛋白被异常活化，导致其下游信号蛋白p-STAT5异常持续性激活。17-AAG能显著下训JAK3、p-STAT5蛋白表达，抑制HUT-102细胞增殖、诱导凋亡。

共同抑制mTORC2和热休克蛋白90对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的探讨共同抑制mTORC2信号通路和热休克蛋白90对多发性骨髓瘤（MM）细胞AKT蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法采用雷帕霉素（20nmol／L）、17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素（17-AAG）（600nmol／L）分别及两药联合处理MM细胞株U266、KM3细胞0、8、24、48h，MTT法检测其对细胞增殖的影响；流式细胞术检测其对细胞凋亡及细胞周期的影响；Westernblot法检测其对p-AKT（ser473）、P—AKT（thr450）、P．S6（$235／236）及AKT蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较，雷帕霉素、17一AAG分别及两药联合后均可抑制U266、KM3细胞增殖，尤以联用后抑制作用最为明显（P值均〈0．05）；均可使细胞周期阻滞在G。期，尤其在作用48h时周期阻滞最明显（P值均〈0．01）；处理48h后空白对照组、雷帕霉素组、17-AAG组、两药联用组KM3细胞的凋亡率分别为（12．21±0．89）％、（18．88±1．83）％、（21．04±0．60）％、（60．07±2．13）％，U266细胞的凋亡率分别为（8．72±0．15）％、（16．45±0．65）％、（17．14±0．59）％、（54．25：t=1．76）％，与空白对照组比较差异均有统计学意义，两药联用组促凋亡作用更为明显（P值均〈O．01）。雷帕霉素作用48h后可抑制mTORC2信号通路；单用雷帕霉素或17-AAG时可降低AKT蛋白的表达，两药联用作用更为明显（P值均〈0．01）。结论共同抑制mTORC2和HSP90活性可降低AKT蛋白的表达，在体外可明显促进MM细胞株U266、KM3细胞的凋亡。

文摘

具有抗乳腺癌作用的新型芳香化酶抑制剂；口服有效的热休克蛋白90抑制齐；新型抗线粒体类抗癌化合物；新型口服有效的螺乙内酰脲类CGRP受体拮抗剂；再生与癌症的平衡。

HSP_70与p57^kip2在骨巨细胞瘤中的表达及意义

目的探讨骨巨细胞瘤中HSP_70和p57^kip2皿的表达与其Enneking外科分期及预后的关系。方法应用免疫组化S-P法检测30例骨巨细胞瘤石蜡切片中HSP_70与p57^kip2的表达，并与13例骨软骨瘤作对比。结果随着骨巨细胞瘤Enneking分期的升高，HSP_70的表达强度增加，而p57^kip2的表达强度减弱。1-3期骨巨细胞瘤的HSP_70阳性率分别为22．2％、88．9％、100％，1～3期骨巨细胞瘤的p57^kip2弘阳性率分别为88．9％、88．9％、33．3％。HSP_70与p57^kip2表达存在负相关（r=-0．54，P〈0．01）。HSP_70在侵袭性强的骨巨细胞瘤中高表达，p57^kip2在侵袭性弱的骨巨细胞瘤中高表达。结论HSP_70与p57^kip2与骨巨细胞瘤的发生、发展有关，可为其外科分期和预后判断的提供一定的辅助参考。