叔丁醇暴露对HSPA1L敲除型雄性小鼠甲状腺的影响

以HSPA1L基因敲除(HSPA1L^(-/-))雄性小鼠为研究对象,观察甲状腺组织形态和细胞凋亡情况,分析Caspase-3蛋白表达,探讨叔丁醇(TBA)的毒性以及HSPA1L在此过程中的作用机制.结果表明,HSPA1L^(-/-)小鼠甲状腺的重量随TBA剂量增加而显著降低(P<0.05);甲状腺上皮滤泡细胞随TBA剂量增加而增大,高剂量组甲状腺滤泡甚至发生融合现象;甲状腺细胞凋亡增强,甲状腺组织Caspase-3表达量极显著增加(P<0.01).HSPA1L^(-/-)小鼠对TBA暴露更为敏感,TBA造成的伤害显著增强,提示HSPA1L可能通过负调控Caspase-3表达,抑制细胞凋亡,维持细胞稳态.

HSPA2在牦牛不同组织器官中的表达差异

【目的】探索热休克蛋白70-2(heat shock 70kD protein-2,HSPA2)在牦牛不同组织器官中的表达差异。【方法】选取3头1岁龄的健康青海高原雄性牦牛为研究对象,在正常生理条件下,于2013年9月中旬采集不同组织器官(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸)样本。(1)从牦牛不同组织器官中提取RNA,将RNA反转录成第一链cDNA,参照牦牛HSPA2和β-actin基因序列(登录号为KC790105.1和DQ838049.1)设计特异性引物,首先采用RT-PCR来验证实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是否能应用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定;然后采用RT-qPCR测定牦牛不同组织器官中HSPA2相对表达量的差异。(2)将牦牛不同组织器官样本4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,免疫组织化学法测定HSPA2在不同组织器官中的分布。采用Image-Pro Plus 6.0软件进行免疫组化图像分析,测定HSPA2阳性反应物的积分光密度,进行吸光度分析;通过SPSS 19.0统计软件,用单因素方差分析进行差异显著性测定。【结果】(1)RT-PCR结果表明RT-qPCR法可用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定。实时荧光定量PCR结果表明,HSPA2在睾丸中的相对表达量,分别是在脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏中的83.33、97.09、111.11、133.33、222.22和285.71倍。(2)免疫组织化学结果显示,牦牛睾丸、肾脏、脑、心脏、肺脏、肝脏和脾脏中均有HSPA2的阳性表达。其中,在牦牛肾脏皮质肾小管、髓质肾小管,大脑皮质海马CA1区、小脑皮质,心肌细胞,肺泡上皮细胞,肝细胞,脾脏边缘区和红髓中有HSPA2阳性反应,着色深浅不等,大部分阳性反应位于细胞质,细胞核阳性反应极少;而在睾丸曲精小管中生精细胞细胞质和细胞核中均有HSPA2阳性反应,着色深浅不等;阴性对照组未观察到阳性反应。根据积分光密度值比较得出,HSPA2蛋白的阳性表达量在睾丸中最高,脑、肾脏、心脏、肺脏和肝脏次之,脾脏最少。【结论】通过基因水平和蛋白水平两个层面的研究,发现HSPA2在牦牛各组织器官中存在表达差异;睾丸中HSPA2基因和蛋白表达量均高于脑、肾脏、心脏、脾脏、肺脏和肝脏,提示HSPA2可能与睾丸的生殖功能密切相关。

益肾通络方对少弱精子症大鼠睾丸组织PI3K-AKT-mTOR通路、CatSper-1、HSPA2蛋白及mRNA表达的影响

目的:基于PI3K-AKT-mTOR通路研究益肾通络方对少弱精子症模型大鼠睾丸组织的影响及作用机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为正常对照组、模型组、左卡尼汀组、益肾通络方(YTP)组(高、低剂量组)、Omipalisib抑制剂(OI)组、Omipalisib抑制剂+益肾通络方高剂量组(OI+YTP高剂量组)、Omripalisib抑制剂+益肾通络方低剂量组(OI+YTP低剂量组),每组各6只。除正常对照组外其余大鼠均在雷公藤多苷灌胃建立少弱精子症模型大鼠基础上给予相对应药物,镜下观察各组大鼠精子参数,HE染色观察各组睾丸组织病理变化,Western印迹和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PI3K-AKT-mTOR信号通路相关蛋白及mRNA表达情况。结果:与模型组相比,左卡尼汀组、YTP高剂量组、YTP低剂量组在精子浓度和精子活力(PR、PR+NP)方面均显著提高(P<0.001);HE染色结果显示模型组生精细胞排列不整齐,生精小管管腔缩小,间隙变宽等,左卡尼汀组、YTP高剂量组、YTP低剂量组也观察到了与模型组相似的病理改变,但同时也观察到了较为完好的精子细胞且在数量相对模型组较多,OI组、OI+YTP高剂量组、OI+YTP低剂量组的病理改变与模型组相近。Western印迹结果显示:与模型组相比,左卡尼汀组可上调p-AKT、CatSper-1、HSPA2蛋白表达量(P<0.05),YTP低剂量组可上调p-AKT、mTOR、CatSper-1、HSPA2蛋白表达量(P<0.05),YTP高剂量组除可上调上述蛋白表达外,还可上调PI3K蛋白表达量(P<0.05);OI组PI3K、mTOR、CatSper-1的蛋白表达量与模型组对比无差异(P>0.05);OI+YTP高剂量组及OI+YTP低剂量组PI3K、p-AKT、mTOR、CatSper-1、HSPA2的蛋白表达与模型组、OI组对比无差异(P>0.05)。qRT-PCR结果显示:与模型组相比,左卡尼汀组、YTP高、低剂量组均可上调PI3K mRNA、mTOR mRNA、CatSper-1 mRNA、HSPA2 mRNA表达(P<0.05);YTP高剂量组可显著上调CatSper-1 mRNA表达(P<0.001),且与YTP低剂量组对比时,YTP高剂量组可以更有效上调PI3K的mRNA表达(P<0.05)。OI组PI3K、mTOR、CatSper-1、HSPA2的mRNA表达与模型组对比无差异(P>0.05);OI+YTP高剂量组及OI+YTP低剂量组PI3K、mTOR、CatSper-1、HSPA2的mRNA表达与模型组、OI组对比无差异(P>0.05)。结论:益肾通络方可改善雷公藤多苷诱导的少弱精子症SD模型大鼠精子质量及睾丸组织病理形态变化,其机制可能与该方上调了睾丸组织PI3K-AKT-mTOR通路的相关蛋白及mRNA表达有关。

TD-SCDMA的长期演进与HSPA+增强技术

为了提高TD-SCDMA系统的传输速率,向国际电联IMT-Advanced所提技术指标迈进,TD-SCDMA的演进策略提上了研究议程。鉴于TD-SCDMA的短期演进HSPA(包括HSDPA和HSUPA)无法满足IMT-Advanced的要求,提出了HSPA+和LTE的概念。本文首先介绍了TD-SCDMA未来演进和发展的趋势,包括TD-SCDMA的增强、短期演进、中长期演进以及基于IMT-Advanced的4G等。然后重点分析了HSPA+的关键技术和协议架构等,最后对LTE的帧结构和多址方式进行了分析,提出了演进时的关键点和对策。

牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因的克隆及序列分析

为了解牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因的特点,根据GenBank已公布的牛应激型HSPA1A和HSPA2基因序列设计4对引物,每个基因分两段扩增,测序并拼接,首次克隆牦牛应激型HSPA1A和HSPA2基因。序列分析表明,扩增到的牦牛应激型HSPA1A基因全长2 134bp,开放阅读框全长1 926bp,编码641个氨基酸,分子质量为70.26ku;HSPA2基因全长1 911bp,开放阅读框全长1 911bp,编码636个氨基酸,分子质量为69.85ku。将HSPA1A和HSPA2基因开放阅读框编码的氨基酸序列进行ScanProsite分析,均得到3个HSP70蛋白家族标记。核苷酸序列同源性分析表明,HSPA1A和HSPA2基因具有较高的保守性,牦牛与牛的HSPA1A和HSPA2基因核苷酸序列同源性最高,分别为99.8%和99.1%。遗传进化关系分析表明,牦牛与牛的应激型HSPA1A和HSPA2基因亲缘关系最近。

幽门螺杆菌UreB和HspA DNA疫苗的构建及免疫评价

本研究选择幽门螺杆菌尿素酶B和热休克蛋白A为候选抗原,通过PCR扩增基因,克隆至真核表达质粒pCD-NA3.1(-)His-Myc上,构建成DNA疫苗。通过小鼠免疫效果的评价,获得两株具有免疫源性DNA疫苗。

幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达

目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.

牦牛HSPA1A和HSPA2基因组织分布的检测

旨在建立一种检测牦牛HSP70家族应激型HSPA1A和HSPA2基因的实时荧光定量PCR方法。采用普通PCR,结合实时荧光定量PCR方法,检测正常情况下应激型HSPA1A和HSPA2基因在牦牛各组织中的表达分布。结果显示,HSPA1A基因在公牦牛与母牦牛中的表达基本一致,所有组织中均少量表达,肺中最低,肌肉相对表达较高;HSPA2基因在公牦牛与母牦牛中的表达也基本一致,所有组织均少量表达,肺中最低,脑、睾丸和卵巢相对表达较高。该研究结果提示正常情况下HSPA2基因可能在牦牛生殖繁育上发挥一定作用,为进一步研究HSPA1A基因和HSPA2基因在牦牛对环境的适应性方面提供基础资料和研究方法。

HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中高表达

目的利用cDNA芯片和荧光定量PCR(Fluorescence Quantitive Polymerase Chain Reaction,FQ- PCR)技术检测难治性癫痫患者脑组织中HSPA12A(heat shock 70kDa protein 12A,HSPA12A)mRNA的表达,并探讨其在难治性癫痫发病机制中的作用。方法收集36例难治性癫痫患者术后脑组织和8例正常对照组,用含有4096条人类靶基因的cDNA芯片进行扫描,筛选出候选基因后,用FQ-PCR,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参对芯片扫描结果进行验证。结果发现候选基因HSPA12A mRNA在难治性癫痫患者脑组织中表达上调,FQ- PCR与cDNA芯片结果一致。结论虽然HSPA12A具体生物功能尚不明确,但我们认为HSPA12A可能作为重要的调节因子参与了神经元凋亡等分子事件。HSPA12A mRNA表达上调可能在难治性癫痫发病机制中起一定作用。

hspA9基因5′侧翼区SNPs对矮脚黄羽肉鸡耐热性的影响

对矮脚黄羽肉鸡纯系hspA9基因5′侧翼区进行PCR测序和PCR–RFLP检测,将检测到的突变位点与矮脚黄羽肉鸡纯系5个耐热性状(T3、皮质酮、异嗜性粒细胞与淋巴细胞比率(H/L)、CD3+T细胞和CD4+T细胞)进行关联分析。结果表明:矮脚黄羽肉鸡纯系hspA9基因5′侧翼区有3个单核苷酸多态性(SNP)位点(C.–85C>A、C.–485G>A和C.–568G>A),根据C.–85C>A的酶切位点,这个基因可分为AA、AC、CC型;根据C.–485G>A的酶切位点,这个基因可分为GG、GA、AA型;根据C.–568G>A的酶切位点,这个基因可分为GG、GA、AA型;热应激状态下,C.–485G>A位点与皮质酮极显著相关(P<0.01),GG基因型个体的皮质酮值极显著高于GA基因型个体;常温状态下,C.–485G>A位点与T3显著相关(P<0.05),GA基因型个体的T3值显著高于AA基因型个体,C.–568G>A位点与T3显著相关(P<0.05),GG基因型个体T3值显著高于GA和AA基因型个体,C.–568G>A位点与CD4+T细胞极显著相关(P<0.01),GG基因型个体CD4+T细胞值显著高于AA基因型个体。C.–485G>A位点和C.–568G>A位点对鸡热耐受性有较大的影响,可望用于鸡抗逆性的分子标记辅助选择。

共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒载体构建及鉴定

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+Hspa5,酶切鉴定;将pgsiRNA-Birc5+Hspa5转染HepG2细胞48h后采用Real-time PCR检测Birc5和Hspa5的mRNA表达水平。结果经酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+Hspa5符合酶切鉴定结果;转染pgsiRNA-Birc5+Hspa5 48h后HepG2细胞Birc5和Hspa5mRNA表达均显著下降,未转染组Birc5和Hspa5mRNA的相对表达量均为1.0,pgsiRNA-Birc5+Hspa5组Birc5为0.15(P<0.05),Hspa5为0.37(P<0.05),表明双干扰载体构建成功。结论成功构建了Birc5和Hspa5双干扰siRNA质粒,为进一步同时靶向沉默肿瘤Birc5和Hspa5基因研究提供了工具和基础。

HSPA+无线网络性能与组网浅析

首先简要介绍了HSPA+的高阶调制、MIMO、多载波等3种关键技术,然后从理论仿真的角度对64QAM、MIMO和DC 3种技术的无线网络容量性能进行了分析,最后给出了HSPA+网络推广的建议。

山羊HSPA6蛋白的特性分析及互作蛋白网络构建

为了研究山羊热休克蛋白70(HSP70)家族成员HSPA6基因编码蛋白的结构与功能特性,本研究利用生物信息学方法,分析了山羊HSPA6基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化修饰位点、亚细胞定位,以及蛋白的二级结构和三级结构;选取多种生物的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树,另外还对HSPA6进行了蛋白互作网络分析。结果显示,山羊HSPA6蛋白序列与哺乳动物(牛、猪)的序列同源性较高;山羊HSPA6蛋白分子质量为70.9 ku,理论等电点为5.78,属于酸性蛋白和亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽;蛋白质功能预测结果显示,HSPA6包含10个分值很高的可能磷酸化位点,这些位点分布在N-端的核苷酸结合结构域(NBD)和C-端的多肽结合结构域(PBD)。经序列分析发现,HSPA6 C-端含有EEVD基序,是HSP70家族蛋白定位于细胞质的保守基序,表明HSPA6主要分布在细胞质。蛋白质二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占41.52%和33.75%,为混合型蛋白;蛋白互作网络构建结果显示,和HSPA6相互作用的蛋白包括HSP70家族成员,另外也有HSP40、HSP90家族成员,预示着山羊HSPA6可能在细胞内与HSP40和HSP90形成复合体发挥作用。本试验结果为进一步深入探讨山羊HSPA6响应环境应激的功能机制提供了理论依据。

不同幽门螺杆菌菌株ureB和hspA基因同源性分析

目的研究不同来源幽门螺杆菌菌株的ureB基因和hspA基因的同源性。方法在GenBank中调取全球来源于幽门螺杆菌不同菌株的ureB基因序列23个和中国境内来源于幽门螺杆菌不同菌株的hspA基因序列20个,利用ClustalW 2生物软件,分别对ureB基因和hspA基因序列进行同源性比较分析,并建立基因进化树,分析其特点。结果不同国家之间ureB基因序列并不一致,同一国家ureB基因序列相似性较高;中国境内hspA基因序列相似性程度很高。结论中国境内不同幽门螺杆菌菌株ureB基因序列和hspA基因序列的相似性程度都很高,都具有很高的同源性。

云南汉族人群HSPA1A基因多态性位点与肺癌的相关性研究

目的：探讨HSPA1A基因多态性与肺癌发生发展的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例为病例组,健康体检人群298例为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对HSPA1A基因中的4个多态性位点（SNPs）位点rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）、rs1008438（G〉T）及rs1043618（G〉C）进行基因分型,研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在两组人群中分布差异。结果：2组人群rs1043618（G〉C）等位基因C和G的分布频率差异有统计学意义（P=0.038）,其中等位基因C是肺癌发生的保护性因素[OR=0.767;95%CI（0.597～0.986）];rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）和rs1008438（G〉T）的等位基因和基因型的分布差异无统计学意义（P〉0.05）;rs12190359与rs1008438（G〉T）以及rs562047（C〉G）与rs11043618（G〉C）的单倍型在2组间分布频率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：HSPA1A基因rs1043618（G〉C）等位基因C可能是云南汉族肺癌发生的保护性因素。

WCDMA HSPA向LTE的演进方案探讨

在WCDMA建网以HSPA为起点的情况下,向LTE/LTE+的演进有两条路线。1)方案一:HSPA直接向LTE演进;该种方案演进过程过于激烈。2)方案二:通过HSPA+过渡向LTE演进;其优势是演进平滑。本文从技术能力和实现难易角度,对WCDMA/HSPA到LTE的过渡方案和时机掌握,进行了探讨。

Balb/c小鼠口服幽门螺杆菌疫苗rLTB-HspA的免疫应答

目的 研究幽门螺杆菌 (Hp)热休克蛋白A (rHspA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)融合蛋白 (rLTB HspA)作为口服疫苗的免疫应答效果。方法 采用rLTB HspA口服免疫Balb c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠黏液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL 4、IFN γ的变化。结果 Balb c小鼠口服rLTB HspA能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。结论 Balb crLTB

HSPA+网络管理性能探析

HSPA+的关键技术包括高阶调制、MIMO、CPC、增强L2、Dual Cell、增强Cell_FACH等,不同新技术的引入对网络性能都有着不同的影响,也给网络管理带来新的需求,本文从HSPA+各项关键技术入手,详细分析了引入HSPA+网络后对WCDMA网络管理系统的影响,包括管理对象属性、增加测量项等。

HSPA+无线网络规划浅析

在介绍HSPA+的64QAM技术的基础上,分析了链路预算特性、系统仿真、系统资源配置等无线网络规划方法,并结合中国联通的实际网络现状提出了规划建议。

HSPA+签约信息与终端兼容性分析与优化研究

通过2G接入、3G接入、重选、国际漫游等多个场景考虑,对HSPA+签约信息与终端兼容性等问题进行了详细分析,并提出了相应的优化方案。