高脂血症大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12B的表达

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏、主动脉和肝脏组织中热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达。方法模型组和对照组SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测定血清总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG);病理学观察心脏、主动脉和肝脏;用RT-PCR检测心脏、主动脉和肝脏中HSPA12BmRNA水平,用免疫组织化学法检测其蛋白表达。结果模型组总胆固醇和三酰甘油分别达(15.46±4.66)mmol/L、(0.69±0.20)mmol/L,较对照组明显升高(P<0.05);病理学观察发现模型组形成高脂性心脏病变及肝脏脂肪变性;模型组心脏、主动脉和肝脏组织中HSPA12BmRNA的表达显著高于对照组(P<0.01);模型组HSPA12B呈较强阳性表达(P<0.05)。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏、主动脉和肝脏中HSPA12B的表达升高。

LPS对大鼠星形胶质细胞HSPA12B表达的影响

目的:探讨内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对大鼠星形胶质细胞热休克蛋白A12B(Heat shock proteins A 12B,HSPA12B)表达变化和细胞定位的影响。方法:用不同浓度(0.01、0.1、1、10μg/ml)和同一浓度(1μg/ml)不同时间(1、2、4、6、8、12、24小时)的LPS刺激星形胶质细胞,分别用RT-PCR和Western blot法检测星形胶质细胞HSPA12B的mRNA和蛋白质水平表达情况,间接免疫荧光双标法检测HSPA12B在星形胶质细胞中的细胞定位。结果:用LPS 1μg/ml刺激1小时后,HSPA12B mRNA的表达增加,4小时表达活性最高。HSPA12B蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。免疫细胞化学证明LPS诱导星形胶质细胞HSPA12B的表达定位在胞核。结论:LPS可诱导星形胶质细胞HSPA12B表达上调。HSPA12B可作为一种炎症反应蛋白参与炎症反应过程。

PI3K/Akt通路调节LPS诱导的小胶质细胞内HSPA12B表达

目的:探讨PI3K/Akt通路对内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞内热休克蛋白A12B(Heat shock proteins A 12B,HSPA12B)表达的影响。方法:体外培养小胶质细胞,并分三组处理:对照组、0.1μg/ml LPS刺激组、PI3K/Akt通路抑制LPS刺激组。Western blot法检测小胶质细胞内HSPA12B和Akt磷酸化的蛋白水平表达,间接免疫荧光标记法检测HSPA12B在小胶质细胞中的细胞表达定位。结果:LPS刺激2 h后,小胶质细胞内HSPA12B和Akt磷酸化的表达增加;应用LY294002预处理后,LPS诱导HSPA12B蛋白水平表达显著抑制。免疫细胞荧光染色证明小胶质细胞LPS组HSPA12B核周荧光强度明显增强,LY294002预处理组HSPA12B荧光强度明显减弱。结论:PI3K/Akt途径参与调控LPS诱导小胶质细胞HSPA12B表达。

HSPA12B对Aβ1-42诱导PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响

目的:探讨热休克蛋白A12B (HSPA12B)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞tau蛋白磷酸化的影响。方法:将处于对数生长期的PC12细胞分为4组:对照组、DMSO组、Aβ(20μmol/L)刺激组、Aβ刺激HSPA12B-siRNA组(Aβ+HSPA12B-siRNA)。采用Western blot法检测4组细胞的HSPA12B、磷酸化tau蛋白(p-tau)表达水平。结果:4组PC12细胞HSPA12B、p-tau蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Aβ组PC12细胞HSPA12B、p-tau蛋白表达均上调(P>0.05),DMSO组无显著差异(P>0.05);而与Aβ组比较,Aβ+HSPA12B-siRNA组PC12细胞HSPA12B下调、p-tau蛋白表达均增强(均P<0.05)。结论:HSPA12B调节Aβ诱导的PC12细胞tau蛋白磷酸化,进而影响阿尔茨海默病的病程。

PI3K/Akt通路介导LPS调节星形胶质细胞HSPA12B表达的研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白kinase B(PI3K/Akt)通路对内毒素脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达的影响。方法将处于对数生长期的新生SD大鼠星形胶质细胞分为3组:con组(空白对照)、LPS组(1μg·ml^(-1)LPS刺激4h)、LPS+LY组(20μmol·L^(-1)LY294002预处理1h+1μg·ml^(-1)LPS刺激4h)。采用Western blot法检测3组细胞HSPA12B、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平,采用细胞免疫荧光染色法检测细胞HSPA12B免疫荧光强度,并进行比较。结果 3组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05);与con组比较,LPS组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均上调(均P<0.05);而与LPS组比较,LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。LPS组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度强于con组,而LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度较LPS组减弱。结论 LPS或是通过PI3K/Akt通路介导调节星形胶质细胞HSPA12B的表达,进而影响中枢神经系统炎症过程。

特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

目的通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制。方法使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型。分三组,即空白对照组(RAAEC+20%DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20%DMEM培养基+1mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1mL PBS将1mg LPS溶解后的溶液)。观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量变化。结果LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性。与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/m L:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组e NOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05)。结论特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度。

miR-134在氧-糖缺失神经元损伤中的作用

目的探讨miR-134在乳鼠脑皮层神经元氧-糖缺失(oxygen glucosedeprivation,OGD)致缺血损伤中的作用及其可能分子机制。方法离体培养乳鼠脑皮层神经元10d后,随机分为五组,正常组和OGD组,后者包括非转染组、miR对照组、miR-134抑制剂组、miR-134前体组。按照分组加入饲养液中感染24h换液,72h后对OGD组进行OGD处理。利用噻唑蓝(MTT)法检测神经元生存率,Western blotting检测热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达水平,实时定量RT-PCR方法检测miR-134和HSPA12BmRNA表达水平以及通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-134对HSPA12BmRNA 3’UTR的直接调控作用。结果与非转染组比较,在OGD致神经元缺血损伤中miR-134前体组,miR-134的表达水平明显提高,细胞存活率明显降低,HSPA12B蛋白水平明显降低,荧光素酶活性也明显降低(P<0.05);而miR-134抑制剂组miR-134的表达水平明显降低,细胞存活率显著提高,HSPA12B蛋白水平明显提高,荧光素酶活性也明显升高(P<0.05);但各组之间HSPA12BmRNA水平差异无统计学意义。结论miR-134通过负性调控HSPA12B蛋白表达水平,在OGD所致神经元缺血损伤中发挥重要作用,在mRNA水平上为治疗缺血性脑卒中提供了可能的分子靶标。