娟姗和荷斯坦奶牛HSPA1A基因SSCP多态性与耐热性能的相关分析

设计引物扩增HSPA1A基因的5′侧翼区,通过PCR SSCP技术分析启动子区的多态性,寻找SNPs位点,分析发现:扩增片段大小280 bp,扩增产物具有基因多态性。供试的70头娟姗牛和荷斯坦奶牛共发现4种基因型,分别为AA型、BB型、AB型和AC型,卡方检验奶牛在该位点基因频率差异极显著(P<0.01),未达到Hardy Weinberg平衡。AC型奶牛耐热性能高于其他基因型(AA,AB,BB)奶牛,差异显著(P<0.05),建议作为抗热应激的奶牛选育分子遗传标记。

逍遥散对慢性应激大鼠海马组织HSPA1A基因表达的影响

目的:探讨并比较中药复方逍遥散和抗抑郁药百忧解(盐酸氟西汀)对慢性应激大鼠海马组织中HSPA1A基因表达的干预作用。方法:将SPF级Wistar大鼠120只随机分为空白组、模型组、逍遥散组、百忧解组,除空白组外,采用足底电击、冰水游泳、禁食24 h、禁水24 h、束缚4 h等应激源对大鼠进行慢性应激刺激。空白组和模型组每只大鼠按照10 mL/(kg·d)的剂量灌胃生理盐水,百忧解组和逍遥散组每只大鼠分别按10 mL/(kg·d)的剂量灌胃百忧解和逍遥散。评价模型制备21 d、28 d、35 d的造模效果;荧光定量PCR检测实验21 d、28 d、35 d时大鼠海马组织中HSPA1A mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠造模21 d、28 d、35 d,体质量均明显减轻(P<0.01),水平运动得分及垂直运动得分均降低(P<0.05,P<0.01),血清皮质酮含量升高(P<0.05,P<0.01),海马组织中HSPA1A mRNA相对表达量降低(P<0.01)。与模型组比较,逍遥散组和百忧解组大鼠造模21 d体质量均升高(P<0.05,P<0.01);逍遥散组大鼠造模21 d、28 d、35 d水平运动得分升高(P<0.05,P<0.01);逍遥散组和百忧解组大鼠造模21 d、35 d垂直运动得分均升高(P<0.05);逍遥散组及百忧解组大鼠造模21 d、28 d、35 d血清皮质酮含量降低(P<0.05,P<0.01);逍遥散组大鼠造模21 d海马组织中HSPA1A mRNA相对表达量升高(P<0.01);百忧解组大鼠造模35 d海马组织中HSPA1A mRNA相对表达量升高。与百忧解组比较,逍遥散组大鼠造模35 d水平运动得分较高(P<0.01),HSPA1A mRNA相对表达量较低(P<0.01)。结论:逍遥散对慢性应激造成的HSPA1A mRNA表达降低的调节作用随时间延长逐渐减弱,百忧解对慢性应激引起的HSPA1A m RNA表达下调的干预作用则在实验35 d时才突显,说明中药复方的治疗作用具有时效性,应该随证变化及时调整方药;抗抑郁药起效慢,临床治疗慢性应激相关病证考虑中西医结合治疗,可能会取得更理想的疗效。

动脉栓塞化疗宫颈癌患者近期疗效差异的HSPA1A基因多态性及影响因素分析

目的探讨动脉栓塞化疗宫颈癌患者近期疗效差异的HSPA1A基因多态性及影响因素。方法随机选取187例宫颈癌患者(Ⅰb~Ⅲb期)作为宫颈癌组,再根据化疗效果分为疗效好组(n=142)和疗效差组(n=45);随机选取同时期体检正常的女性106例作为对照组。采用TaqMan探针基因分型法研究HSPA1A基因SNP位点rs1008438(G>T)的等位基因、基因型的分布频率;采用荧光定量PCR法检测XIAP和Smac基因的相对表达量。结果rs1008438位点等位基因G和T在疗效好组和对照组、疗效好组和疗效差组中的分布频率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。动脉栓塞化疗后,疗效好组XIAP基因的相对表达量降低,凋亡细胞数增加(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,患者动脉栓塞化疗前的XIAP基因表达量、凋亡细胞数、宫颈病灶大小评分、宫旁受侵质地评分及总分与化疗后疗效差异相关(P<0.05)。结论针对宫颈癌化疗疗效差的患者,要综合考虑宫颈局部病灶和宫旁受侵组织的情况,进一步改进治疗方案。

电针干预对单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮层基因表达的影响

目的运用基因芯片技术对形觉剥夺及电针干预后的弱视大鼠视皮层中差异表达基因进行生物学分析与关键基因的筛选,为弱视发生及电针治疗提供基因水平理论依据。方法将SD大鼠随机分为正常组、弱视组和电针组,每组5只。弱视组和电针组大鼠采用单眼缝合方法造成右眼剥夺性弱视,术后30~60 d对电针组大鼠进行电针干预,每周至少干预6 d。电针干预结束后,处死各组大鼠并取左侧视皮层,使用基因芯片技术检测视皮层中基因表达情况。筛选各组中Fold Change≥2.0且P<0.05的差异基因进行统计,应用基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析差异基因的功能及其参与的生物学通路。结果与正常组比较,弱视组有135个基因下调,28个基因上调;与弱视组比较,电针组有52个基因上调,25个基因下调。GO富集分析发现弱视组和电针组产生的差异基因主要功能集中于蛋白翻译、蛋白转运、离子跨膜转运、细胞内外小分子结合、组织器官发育等。KEGG富集分析发现弱视组和电针组产生的差异基因共同参与ERBB信号通路、光信号传导、TLR信号通路、神经胶质细胞瘤等。PPI网络显示丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和热休克蛋白A1A(HSPA1A)基因位于网络核心,二者的异常表达可能与弱视发生及电针干预密切相关,在神经突触可塑性过程中起重要作用。结论形觉剥夺弱视大鼠的视皮层在视觉发育过程中存在大量基因的异常表达,电针刺激可以拮抗部分基因的差异表达;由MAPK1和HSPA1A基因调控的代谢通路改变可能是弱视发病及电针治疗弱视的重要分子生物学机制。

云南汉族人群HSPA1A基因多态与宫颈癌发生发展的相关性研究

目的探讨云南汉族人群中HSPA1A基因多态性与宫颈癌发生和发展的相关性。方法选取宫颈癌患者以及444例癌前病变（CINⅢ期）患者130例，健康正常对照548例。用TaqMan探针基因分型方法对HSPAIA基因的4个SNP位点[rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）、rsl008438（G〉T）和rsl043618（G〉c）]进行基因分型，研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CINUI期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。结果rs1008438位点等位基因G和T在CINⅢ期组和对照组、癌症组和对照组（P=0．022和0．030）中的分布频率的差异具有统计学意义，而在CINⅢ期组和癌症组中的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）；rs1008438位点基因型GG、GT和TT仅在CINⅢ期组和对照组中分布频率差异具有统计学意义（P=0．047），而在CINⅢ期组和癌症组之间、癌症组和对照组之间的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）。rs12190359、rs562047和rs1043618位点的等位基因和基因型在病例组和对照组中的分布频率的差异均无统计学意义（P〉0．05）。根据连锁不平衡的分析结果，对rs562047、rs1008438和rs1043618三个位点构建的单倍型进行分析，结果未显示有单倍型在各组间分布频率的差异有统计学意义（P〉0．05）。结论HSPA1A基因rs1008438位点等位基因G可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素（OR=0．797；95％CI：0．674-0．943）。

HSPA1A启动子荧光素酶报告基因HepG2细胞体系在评价焦炉逸散物毒性中的应用

目的探讨利用含HSPA1A（HSPT0．1）启动子荧光素酶报告基因质粒的稳定转染HepG2/HSPA1A细胞评价焦炉逸散物毒性的可行性。方法构建含HSPA1A启动子的pGL4．17／HSPA1A重组质粒并转染人HepG2细胞，建立稳定细胞株HepG2／HSPA1A。用不同浓度的炉底、炉侧和炉顶焦炉逸散物染毒HepG2／HSPA1A细胞24h，分别测定细胞的相对荧光素酶活力、存活率、丙二醛（MDA）含量、Olive尾距和微核率。结果与对照组相比，炉底焦炉逸散物染毒组细胞的相对荧光素酶活力明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。且在0．15μg/L时，细胞的相对荧光素酶活力最高，为对照组的1．4倍。细胞的相对荧光素酶活力分别随着炉侧和炉顶焦炉逸散物浓度的增加而逐渐增加．差异均有统计学意义（P〈0．01）。且在最高浓度时（65．4μg／L，202μg／L）细胞的相对荧光素酶活力分别为对照组的2．1和5-3倍。仅炉底焦炉逸散物染毒后细胞的相对荧光素酶活力与MDA浓度呈正相关。差异有统计学意义（r=0．404，P〈0．05）。炉底、炉侧和炉顶焦炉逸散物染毒后，HepG2／HSPA1A细胞的相对荧光素酶活力均与Olive尾距、微核率呈正相关（r尾距分别为0．476、0．940、0．788，r微校率分别为0．580、0．649、0．432），P〈0．05。结论HepG2／HSPA1A细胞的相对荧光素酶活力可以敏感地反映焦炉逸散物的毒性效应，该细胞可用于快速评估职业环境复合污染物的综合毒性效应。