肾细胞癌中HSPgp96的免疫组化研究

目的 研究HSPgp96在人肾细胞癌组织中的表达及其与临床分期、病理分级、细胞类型的相关性。方法 应用免疫组化S P法检测 5 4例人肾细胞癌组织标本中HSPgp96的表达情况。 结果 在人肾细胞癌组织中HSPgp96表达阳性率为88.9% ,表达强度明显较正常肾组织增高 (P <0 .0 5 ) ,但其高表达却与临床分期、病理分级及细胞类型无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 人肾细胞癌组织中HSPgp96高表达在肿瘤的发生、发展中具有重要的促进作用。

三步法提取纯化肺腺癌组织中HSPgp96多肽复合物

目的建立从人肺癌组织中提取,为肺癌肿瘤免疫治疗的临床应用提供实验依据纯化热休克蛋白(HSP heatshock protein)gp96多肽复合物的方法 ;并通过体外实验对其在肺癌肿瘤免疫中的作用进行初步研究。方法运用三步蛋白纯化法从肺腺癌(PAa)组织中提取、纯化HSPgp96肽复合物,SDSPAGE、Westernblot鉴定HSPgp96多肽复合物。提取的gp96-多肽复合物与树突状细胞共孵育培养3～10天后,第10天加入到由人外周血中分离的淋巴细胞,继续培养3～7天刺激细胞毒T淋巴细胞的产生;以gp96-多肽复合物致敏淋巴细胞作为阳性对照组;以未加入任何抗原成分的DC为阴性对照。收集被致敏淋巴细胞的上清,采用IFN-γELISA检测试剂盒分析淋巴细胞所释放的IFN-γ量作为CTL反应的指标。结果应用该方法提取的蛋白质经SDSPAGE和Westernblot特异性鉴定,证实是HSPgp96多肽复合物;蛋白产率为每克PAa肺癌组织可纯化HSPgp96肽复合物约50μg。肿瘤免疫学实验发现,以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原负载DC,以及单独以gp96-多肽复合物作为肿瘤抗原,分别致敏淋巴细胞后均可以诱导产生CTL反应;且gp96/DC为疫苗所释放的IFN-γ量高于单独以gp96为疫苗所释放的IFN-γ量,有显著性差异(P<0.01)。结论三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSPgp96肽复合物具有高获率、高纯度、高免疫效应等优点。gp96-多肽复合物能诱导出肿瘤特异性CTL反应,而将其负载DC后能激发起更强的CTL,显示出gp96-多肽复合物/DC疫苗抗肿瘤作用的广泛前景。

热休克蛋白gp96肽复合物免疫治疗小鼠骨肉瘤的研究

目的研究热休克蛋白gp96(HSPgp96)肽复合物体内外特异性抗肿瘤作用。方法采用51Cr释放法测定经HSPgp96肽复合物修饰的树突状细胞(DC)对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响,同时在骨肉瘤动物模型上观察HSPgp96肽复合物与修饰后的DC对骨肉瘤的生长状况及体内免疫水平的影响。结果HSPgp96肽复合物修饰的DC可激活小鼠脾淋巴细胞,后者能对人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞进行特异性杀伤;HSPgp96肽复合物及修饰后的DC使IL-10表达水平明显降低,IFN-γ水平明显上升(P<0.01),能有效抑制体内肿瘤的生长。结论HSPgp96肽复合物能很好地修饰体外诱导获取的DC,使DC具有很强的体内外抗肿瘤作用。

肾癌组织与正常肾组织中热休克蛋白gp96-肽复合物体外免疫效应比较

目的:研究人肾癌组织中提取、纯化的热休克蛋白(HSP)gp96 肽复合物的体外免疫效应。方法:分别从12例肾癌患者肿瘤组织标本及5例肾外伤患者切除的正常肾组织中提取、纯化 HSPgp96 肽复合物。应用酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测肾癌患者肿瘤组织,正常肾组织中提取的HSPgp96 肽复合物、单纯多肽刺激人外周血单核细胞(PMBC)产生γ 干扰素效应T细胞频数。结果:肿瘤组中 HSPgp96 肽复合物产生γ 干扰素效应 T细胞频数最高[每孔(287.6±22.3)个],肿瘤组中HSPgp96 肽复合物,单纯多肽产生γ 干扰素效应 T细胞频数明显高于正常肾组织组(P<0.01)。两组中HSPgp96 肽复合物与单纯多肽产生γ 干扰素效应T细胞频数存在明显差异(P<0.05)。结论:肾肿瘤组织中提取的HSPgp96 肽复合物具有明显最强的体外免疫效应。

不同热休克蛋白在肾细胞癌组织中的表达及其意义

目的 研究HSPgp96、HSP90、HSP70在肾细胞癌组织中的表达及其相互关系。方法 应用免疫组化S P法检测 5 4例肾细胞癌组织标本中HSPgp96、HSP90、HSP70的表达情况。结果 在肾细胞癌组织中HSPgp96、HSP90、HSP70表达明显较正常肾组织增强 (P <0 0 5 ) ,阳性率分别为 88 9%、 85 2 %、 90 7% ,三者之间无明显差异性 (P >0 0 5 ) ,其表达程度均与肾细胞癌临床分期、病理分级及细胞类型无显著相关性 (P >0 0 5 )。结论 HSPgp96、HSP90、HSP70的高表达在肾细胞癌的发生、发展中起促进作用 ,尤其是在加强肿瘤抗原的呈递、表达上具有重要临床应用价值。

鼠肝细胞癌变发生过程中热休克蛋白gp96及其基因的动态表达

目的:探讨肝细胞癌变过程中热休克蛋白(HSP)gp96及基因的动态表达与变化。方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌,观察肝病理组织学(HE染色)和总RNA的改变,以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段;以免疫组化分析肝细胞癌变过程中gp96的动态表达。结果:SD鼠在喂饲2-FAA后,在诱癌早期肝细胞发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节。癌变过程中肝组织gp96-mRNA表达明显增加,且显著高于对照组肝组织(P<0.01);正常肝gp96蛋白表达较少,肝细胞癌变过程中gp96表达呈显著的梯度增加。结论:gp96参与肝细胞的癌变过程,癌变初期的过度表达有助于肝癌的早期诊断。

热休克蛋白gp96在人胃癌组织中的表达及意义

目的探讨热休克蛋白gp96在人胃癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组化S-P法检测对60例胃癌手术根治标本及癌旁组织进行HSPgp96检测。结果HSPgp96在胃癌和癌旁组织中阳性表达率为65%和31.7%,差别有统计学意义(P<0.05)。HSPgp96阳性表达率随着肿瘤病程进展(TNM分期)而增加(P<0.05);在低分化型胃癌中的阳性表达率高于中、高分化型胃癌(P<0.05);在伴淋巴结转移肿瘤中的表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05);但HSPgp96阳性表达率与肿瘤的大体形态、侵犯深度不同之间的差别无统计学意义(P>0.05)。结论热休克蛋白gp96可作为早期胃癌的诊断,临床治疗,手术成功率,和胃癌预后判断的新的综合参考指标。

热休克蛋白糖蛋白96的量子点荧光标记检测及意义

热休克蛋白（HSP）糖蛋白（gp）96可作为肿瘤抗原肽的分子载体，在呈递肿瘤抗原和激活CD8^＋T淋巴细胞方面发挥重要作用。量子点（QDs）是一种能够接受激发光产生荧光的半导体纳米颗粒。本研究尝试采用量子点荧光这一新型标记技术，检测体外培养人肾癌细胞株（ACHN）和人成纤维细胞中HSPgp96的表达，证实量子点荧光标记检测技术的可行性。

人肾癌组织中热休克蛋白gp96-肽复合物提取、纯化及体外的免疫效应

目的建立从人肾癌组织中提取、纯化热休克蛋白(HSP)gp96肽复合物的方法,并检测其体外免疫效应。方法采取三步蛋白纯化法从人肾癌患者肿瘤组织中提取、纯化HSPgp96肽复合物,SDSPAGE、Westernblot鉴定HSPgp96肽复合物。应用酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测HSPgp96肽复合物、单纯多肽产生γ-干扰素效应T细胞频数的体外免疫活性。结果应用该方法提取的蛋白质经SDSPAGE和Westernblot特异性鉴定,证实是HSPgp96肽复合物;蛋白得率为每g湿重肾癌组织可纯化HSPgp96肽复合物40～60μg。γ-干扰素ELISPOT检测,HSPgp96肽复合物组产生γ-干扰素效应T细胞频数最高(287.50±22.34),以后依次为单纯多肽组(135.25±12.80)、阳性对照组组(102.25±14.76)、阴性对照组(35.50±11.10),各组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);HSPgp96肽复合物组与单纯多肽组、阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);单纯多肽组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSPgp96肽复合物具有高获率、高纯度、高特异性及高免疫效应等优点。

大鼠肝细胞癌变过程中热休克蛋白gp96的异常表达及变化特征

目的探讨大鼠肝细胞癌变过程中热休克蛋白(HSP)gp96的表达与变化特征。方法以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲SD大鼠诱发肝癌,以免疫组化染色及Western blot观察大鼠肝组织中gp96蛋白的定位及表达水平。结果SD大鼠在喂饲2-FAA后,在诱癌早期肝细胞发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节。癌变过程中肝组织gp96蛋白主要定位于细胞浆,表达水平从变性组到癌前组到癌变组呈明显的梯度增加,均显著高于对照组肝组织(P<0.01)。结论gp96参与肝细胞的癌变过程,癌变初期的过度表达有助于肝癌的早期诊断。