细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,EG)2热休克蛋白70(heat shock protein,2HSP70)表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70/pGEM-T/JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因,将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21,鉴定后以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE检测其表达水平,用亲和层析纯化并分离重组蛋白,利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性。结果酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒;IPTG诱导表达后,融合蛋白占菌体总蛋白的39%,占裂解物上清总蛋白的70.4%,表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶性状态存在。亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70,通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别。结论成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒,重组的EG2HSP70能够高效表达,表达的EG2HSP70具有免疫学活性。

逆灸对心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70的影响

目的:观察逆灸对心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70表达的影响,并与缺血预处理的效果进行比较,探讨逆灸有效性和对心肌的保护机制。方法:①选用健康Wistar大鼠30只,雄性,体重(250±20)g,随机分成5组:正常对照组、假手术组、心肌缺血再灌注组(IR组)、心肌缺血预处理组(IP组)、逆灸组,每组6只。②免疫组织化学法检测大鼠心肌组织HSP70表达。③计量资料差异比较采用spss16.0软件统计。结果:逆灸"内关""膻中"穴可明显增加心肌缺血再灌注损伤型大鼠心肌组织中HSP70的表达,与IR组比较差异显著(P<0.05),且与IP组无显著差异(P>0.05)。结论:逆灸与缺血预处理均可增加HSP70的表达,减轻心肌缺血再灌注对心肌造成的损伤,丰富了"治未病"理论。

急性脑梗死患者不同时期Apelin-13及应激相关蛋白水平的变化及其与预后的关系研究

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者不同时期Apelin-13和应激相关蛋白热休克蛋白70(HSP-70)、β内啡肽(β-EP)水平的变化及其与预后的相关性。方法选取2013年1月—2014年12月在复旦大学附属上海市第五人民医院确诊为ACI的患者50例作为ACI组,另选取同期在本院体检正常者40例作为对照组。采集两组受试者血液,并检测对照组和ACI组发病第1、3、7、14、21、30天Apelin-13、HSP-70、β-EP水平。ACI患者根据改良Rankin分级法评估预后,分为预后好(n=28)、一般(n=15)、差(n=7),并比较不同预后患者发病第1天的Apelin-13、HSP-70、β-EP水平、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、美国国立卫生研究所卒中量表(NHISS)评分、洼田饮水试验分级。结果对照组、ACI组不同时期Apelin-13、HSP-70水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),β-EP水平比较差异无统计学意义(P>0.05);其中ACI组第1天Apelin-13水平低于对照组,ACI组第14、21、30天Apelin-13水平高于ACI组第1天(P<0.05);ACI组第1、3天HSP-70水平高于对照组,ACI组第3、7、14、21、30天HSP-70水平低于ACI组第1天(P<0.05)。ACI患者Apelin-13与HSP-70呈直线负相关(r=-0.909,P=0.012),Apelin-13与β-EP无直线相关性(r=-0.172,P=0.744),HSP-70与β-EP无直线相关性(r=0.121,P=0.820)。不同预后ACI患者β-EP水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同预后ACI患者Apelin-13、HSP-70水平、GCS评分、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中预后差者Apelin-13水平、GCS评分均低于预后好和预后一般者,HSP-70水平、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后好和预后一般者(P<0.05);预后一般者GCS评分低于预后好者,APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后好者(P<0.05)。结论Apelin-13水平在ACI发病第1天降低,随ACI病程逐渐升高;HSP-70水平在ACI发病第1天升高,随ACI病程逐渐下降。预后差的ACI患者发病第1天的Apelin-13水平、GCS评分低于预后一般和预后好者,而HSP-70水平、APACHEⅡ评分、NHISS评分、洼田饮水试验分级高于预后一般和预后好者,可以根据这些指标的变化判断ACI患者预后。

水蛭提取液对实验性脑血肿周围组织热休克蛋白70与转移生长因子β-1表达的影响

目的探讨水蛭提取液对实验性脑血肿周围组织热休克蛋白70（HSPTO）及转移生长因子β-1（TGFβ-1）表达的影响。方法采用成组设计的随机对照研究，用定量胶原酶注人大鼠尾状核建立脑出血模型，并于制模后随机分为水蛭提取液治疗组和生理盐水对照组，分别经尾静脉注射水蛭提取液和生理盐水，每日1次；制模后每日给予神经功能缺损评分，术后第3d、6d及10d通过免疫组化染色观察鼠脑血肿周围脑组织HSPTO与TGFβ-1的表达，图像分析仪计算阳性细胞面积。结果脑出血后两组神经功能缺失评分均随时间延长而显著改善（P〈0．01～0．001），治疗组评分各时间点明显优于对照组（均P〈0．01）；术后第3d、6d及10d治疗组脑血肿周围组织HSPTO及TGFβ—1阳性细胞面积显著高于对照组（均P〈0．05）。结论水蛭提取液对实验性脑出血血肿周围组织保护作用机制可能与HSPTO与TGFβ—1表达增强有关。

5个品系罗非鱼热休克蛋白Hsp70基因序列比对分析

采用RT-PCR技术,对美国尼罗、埃及尼罗、美国奥利亚、中国奥利亚、奥尼杂交罗非鱼(埃及尼罗♀×美国奥利亚♂)5个品系罗非鱼热休克蛋白Hsp70基因进行扩增并克隆测序,最终获得5个品系罗非鱼Hsp70基因完整编码区(code sequences,CDS)cDNA序列,全长均为1923 bp,编码640个氨基酸,含有Hsp70家族3个签名序列IDLGTTYS、IFDLGGGTFD和VVLVGGSTRIP-KIQK,以及C末端保守序列EEVD,核定位信号标签KRKHKKDISQNKRALRR;Dank特征基序DLGTT-S-V;胞质Hsp70特征基序EEVD;靠近C末端的GGMP4肽序列;2个糖基化位点NKSI和NVSA。对5个品系罗非鱼Hsp70基因序列比较分析发现,它们之间共有12个核苷酸位点发生转换,但氨基酸序列完全一致。研究结果为深入研究不同品系罗非鱼的抗逆机理以及指导罗非鱼抗性育种奠定了可行性支撑基础。

烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯对烟粉虱地中海隐种hsp70 mRNA的诱导表达

为深入理解杀虫剂胁迫对烟粉虱Bemisia tabaci适应逆境能力的影响,本研究运用实时荧光定量PCR技术测定了LC25,LC50和LC753种浓度的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯分别处理对烟粉虱地中海隐种B.tabaci Mediterranean成虫体内热激蛋白hsp70表达水平的影响。结果表明:在低温(15℃)条件下,LC50和LC75的烯啶虫胺、毒死蜱、高效氯氰菊酯可显著诱导烟粉虱地中海隐种hsp70的表达量增加,此后随时间延长hsp70表达量逐渐下降,到72h时恢复到对照水平,但LC25的3种杀虫剂对hsp70的表达无明显影响;在常温(25℃)下,较高浓度(LC50和LC75)的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯处理24h同样可促进hsp70表达量的增加,然后hsp70表达量逐渐下降,到72h时恢复至正常水平,但低浓度(LC25)的3种药剂处理后hsp70表达量随时间延长而增加,到72h时达到最高;在高温(32℃)条件下,LC25和LC50的烯啶虫胺、毒死蜱和高效氯氰菊酯处理24h可显著增强hsp70的表达水平,此后随时间的延长hsp70表达恢复至正常水平。杀虫药剂诱导的hsp70表达量增加增强了烟粉虱地中海隐种对杀虫药剂和高温的耐受能力,这可能是导致其在我国快速扩张的原因之一。

夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热休克蛋白70基因表达的影响

本试验旨在研究夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热应激蛋白70(HSP70)基因表达的影响。挑选28日龄、体重相近的健康皖西白鹅150只,随机分成3组,即对照组、试验1组和试验2组,每组5个重复,每个重复10只鹅。对照组试验鹅饲喂基础饲粮,试验1组和试验2组试验鹅分别饲喂在基础饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物的试验饲粮。预试期7 d,正试期14 d,试验期间最高气温37℃,最低气温24℃,日平均气温31.6℃。饲喂2周后,每个重复挑选1只鹅屠宰,采集血样,并分离出肝脏,测定血清脂质代谢指标和肝脏中HSP70基因的相对表达量。结果表明:饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅的平均日采食量和平均日增重均无显著影响(P>0.05),但添加200 mL/kg刺梨提取物可显著降低料重比(P<0.05);饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物均可显著提高血清高密度脂蛋白含量(P<0.05),但对血清总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响(P>0.05);与对照组相比,试验1组和试验2组肝脏中HSP70基因的相对表达量均极显著提高(P<0.01),同时试验1组肝脏中HSP70基因的相对表达量还极显著高于试验2组(P<0.01)。由此得出,在夏季高温条件下,在皖西白鹅饲粮中添加刺梨提取物可提高饲料转化率、调节脂质代谢、上调肝脏中HSP70基因的表达,具有较明显的抗应激效果,且添加量为100 mL/kg时的抗应激效果优于添加量为200 mL/kg时。

甜菜碱对夏季热应激奶牛产奶性能和HSP70及其mRNA表达的影响

为研究日粮中添加不同剂量甜菜碱对夏季热应激奶牛生产性能和HSP70及其mRNA表达的影响,根据年龄、胎次、泌乳期、产奶量相近的原则选取32头荷斯坦奶牛,随机均分为4组,对照组(C)不添加甜菜碱,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在日粮中添加10、15和20 g·d-1甜菜碱。结果表明:试验期牛舍平均温湿指数(THI)为78.68;试验Ⅱ和Ⅲ组奶牛产奶量比对照组和试验Ⅰ组显著提高(P<0.05);试验Ⅱ组乳糖含量显著高于对照组和试验Ⅲ组(P<0.05),试验Ⅰ和Ⅲ组显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组乳蛋白率显著高于对照组(P<0.05);试验后期试验Ⅱ组奶牛外周血HSP70含量与对照组相比显著降低(P<0.05)。结论:添加甜菜碱可提高奶牛生产性能,且以添加15 g·d-1的效果最优;添加15 g·d-1甜菜碱后降低了奶牛外周血HSP70含量,因而缓解了奶牛热应激。

小体鲟HSP70基因全长cDNA序列的分离及表达分析

采用RT-PCR法首次从小体鲟(Acipenser ruthenus)肝脏RNA分离获得HSP70基因全长cDNA序列(HSP70cDNA)。生物信息学分析显示,小体鲟HSP70基因含有众多的蛋白激酶C磷酸化位点,Ser、Thr、Thy磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号转导与调控中发挥作用。经过BLAST比对,认为该序列与西伯利亚鲟(Acipenserbaerii)、斑点叉尾鮰(Ietalurus punetaus)、斑马鱼(Danio rerio)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲爪蟾(Xenopus lae-vis)、中华鳖(Pelodiscus sinensis)、原鸡(Gallus gallus)、家鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的同源性均在80%以上,表明HSP70具有高度的保守性。组织表达分析表明,HSP70mRNA在小体鲟肝脏、心、脾、脑、肾、肌肉、胃、肠、垂体、精巢和卵巢组织中均有表达,但表达量不同,心脏、脾和肝脏中表达量高,脑、垂体和性腺中表达较少,鳃中没有表达。小体鲟HSP70基因的表达分析为研究应激条件下鲟科HSP70基因的差异表达和抗逆机理提供了基础。

葛根素对急性缺血脑神经细胞损伤的保护及对HSP_(70)蛋白表达的干预作用

目的探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用和对HSP70表达的影响及其作用机制。方法采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色及用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其组织病理学改变及HSP70表达情况。结果葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组,脑水肿程度较轻,而HSP70表达强度显著强于单纯缺血组。葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关(P<0.01)。结论葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制与上调HSP70的表达有关。

HSP70基因多态性对矮小型黄羽肉鸡热耐受性的影响

采用PCR产物直接测序和PCR-RFLP检测的方法,选取HSP70基因的C.-69A>G、C.+258A>G、C.+276C>G、C.+909C>A、C.+1044A>G、C.+1437C>T和C.+1476C>T 7个多态位点,分别在15和35℃条件下对矮小型黄羽肉鸡纯系母鸡进行与热耐受性相关的部分生理与免疫指标的关联分析。结果表明:热应激状态下(35℃),C.+276C>G位点与CD3+T细胞含量显著相关(P<0.05),GG基因型个体的CD3+T细胞含量极显著高于CC基因型个体(P<0.01)、显著高于CG基因型个体(P<0.05);C.+1437C>T位点与CD4+T细胞含量极显著相关(P<0.01),CC基因型个体CD4+T细胞含量极显著低于CT和TT基因型个体(P<0.01)。C.+1476C>T位点的CT基因型个体H/L值显著低于CC基因型个体(P<0.05)。常温状态下(15℃),C.-69A>G位点的GG基因型个体CD4+T细胞含量显著高于AG基因型个体(P<0.05);C.+1044A>G位点与CD4+T细胞含量显著相关(P<0.05),AG基因型个体CD4+T细胞含量显著高于AA基因型个体(P<0.05);C.+1437C>T位点与CD3+T细胞含量、皮质酮值显著相关(P<0.05),CC基因型个体的CD3+T细胞含量和皮质酮值都显著高于CT和TT基因型个体(P<0.05)。与常温状态相比,各位点同一基因型在热应激状态下T3水平、H/L值和CD4+T细胞含量都显著升高,皮质酮含量和CD3+T细胞含量都显著下降。C.-69A>G、C.+276C>G、C.+1044A>G、C.+1437C>T和C.+1476C>T 5个位点与部分生理、免疫指标显著相关。其中C.+1437C>T位点与多个生理、免疫指标都有显著或极显著相关,表明该位点对矮小型黄羽肉鸡的热耐受性具有潜在的遗传效应。

乐至黑山羊与藏山羊HSC70、HSP70.1和HSF1基因的mRNA表达差异分析

试验旨在利用qPCR技术对热休克同源蛋白(HSC70)、热休克蛋白70.1(HSP70.1)和热休克转录因子1(HSF1)基因在乐至黑山羊和藏山羊五个组织样中的表达量进行研究,以探讨热休克蛋白家族70(HSP70)与山羊生态适应性的关系。结果表明,HSC70mRNA在藏山羊心脏中的表达量是乐至黑山羊中的4.5倍(P<0.05),但在脑垂体中乐至黑山羊的表达量是藏山羊的3.7倍(P<0.05),在卵巢、肝脏和子宫中两品种间无显著差异;HSF1mRNA在藏山羊卵巢、心脏中的表达量分别是乐至黑山羊的7.9倍和3.1倍(P<0.05),在肝脏和子宫中乐至黑山羊的表达量却分别是藏山羊的6.3倍和10.4倍(P<0.05);HSP70.1mRNA在乐至黑山羊脑垂体中的表达量是藏山羊的6.8倍(P<0.05)。说明HSC70、HSP70.1和HSF1基因的表达与山羊的生活环境及饲养方式有一定的关系。

丙氨酰-谷氨酰胺对体外培养的免疫抑制建鲤淋巴细胞IL-1β,IL-2以及HSP70 mRNA表达的影响

以建鲤（Cyprinus carpio var.jian）为研究对象,探讨丙氨酰-谷氨酰胺（Ala-Gln）对体外培养的免疫抑制建鲤淋巴细胞IL-lβ、IL-2以及HSP70mRNA表达的影响。通过对建鲤注射环磷酰胺（CY）来建立免疫抑制模型,以注射生理盐水的建鲤作为对照,分离外周血和头肾淋巴细胞在含不同Ala-Gln浓度（0.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0 mmol/L）的培养液中进行体外培养。结果表明,Ala-Gln浓度为0.0、2.0、4.0mmol/L时,免疫抑制组建鲤外周血（PBL）IL-1β表达显著高于对照组（P〈0.05）,其他组差异不显著。对照组和免疫抑制组建鲤PBL IL-2表达均随Ala-Gln浓度增加而显著提高（P〈0.05）,且对照组均显著高于免疫抑制组（P〈0.05）。免疫抑制组头肾淋巴细胞HSP70mRNA的表达随着Ala-Gln浓度的增加而显著增加（P〈0.05）,均显著高于对照组（P〈0.05）。在本试验条件下,一定范围（4.0～10.0mmol/L）内添加Ala-Gln,可显著提高HSP70mRNA表达,降低血淋巴细胞IL-lβ表达的水平,恢复血淋巴细胞IL-2表达的水平,从而缓解免疫抑制。

HSP70多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对Tca8113细胞的免疫杀伤作用

目的:研究HSP70多肽(HSP70peptide complexes,HSP70-PC)对人脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性及功能的影响。方法:人舌癌Tca8113细胞在43℃条件下加热30min,恢复12h后,用亲和层析方法提纯HSP70多肽,并用Western印迹鉴定;将提纯的HSP70多肽体外刺激人脾淋巴细胞扩增、活化,然后用MTT法测定其对舌癌Tca8113细胞的杀伤作用,并用电镜和相差显微镜观察其培养上清舌癌Tca8113细胞的形态学变化。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:1g湿重的肿瘤细胞可提取纯化HSP70蛋白85μg,通过SDS-PAGE和Western印迹证实为HSP70抗原肽复合物;提取舌癌Tca8113细胞的HSP70-PC与体外免疫扩增的人脾淋巴细胞形成致敏CTL,当致敏CTL与Tca8113细胞效靶比为100:1和50:1时,致敏CTL的杀伤率分别为(77.4±2.9)%和(78.9±1.9)%,2组间无显著差异(P>0.05)。HSP70诱导的CTL对Tca8113的杀伤率与非抗原刺激的淋巴细胞组比较,有显著性差异(P<0.01),受攻击的舌癌Tca8113细胞出现凋亡的形态学变化。结论:Tca8113细胞来源的HSP70多肽具有较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力,能刺激人脾淋巴细胞产生特异性杀伤肿瘤细胞的效应,并能介导肿瘤细胞凋亡。

人食管、胃、大肠癌组织中HSP70蛋白表达分析

采用Western Blot方法,检测、分析人食管、胃、大肠的正常组织、癌旁组织及癌组织中的HSP70蛋白表达差异。在不同器官的不同组织中,HSP70的表达情况有较大差异。在人胃、食管、大肠三个器官的正常组织、癌旁组织和癌组织中,HSP70的表达量依次升高。消化道癌组织中大量表达的HSP70蛋白可能在上述组织癌变进程中起一定作用,为深入研究消化道肿瘤的致病机理和治疗提供理论依据。

牦牛鲜精与冻精HSP70表达差异比较研究

旨在研究冷冻前后牦牛精子质量和HSP70表达变化。采集健康且繁殖能力正常的6头大通牦牛精液,将试验分为鲜精组和冻精组,以精子活力和质膜完整率作为评价精子质量的指标。采用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光技术检测HSP70在精子冷冻前后的表达差异。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活力和质膜完整率均极显著下降(P<0.01),HSP70mRNA转录水平显著降低(P<0.05),蛋白水平极显著下降(P<0.01)。鲜精HSP70蛋白定位于精子顶体区、顶体赤道段、后顶体区和精子中段,而冻融精子HSP70蛋白主要位于后顶体区和精子中段,且平均光密度值极显著降低(P<0.01)。综上表明,冻融后牦牛精子质量与HSP70表达量均降低,推测两者之间存在一定关联。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、热休克蛋白70和谷氨酰胺合成酶在肝细胞癌变中的表达及临床价值

目的探讨免疫组织化学套餐磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）、热休克蛋白70（HSP70）和谷氨酰胺合成酶（GS）在肝细胞癌（HCC）诊断中的临床价值。方法应用免疫组织化学检测86例高分化HCC、100例低分化HCC、38例高级别异型增生结节（H-DN）、22例低级别异型增生结节（L—DN）、66例肝硬化结节、10例局灶性结节状增生（FNH）及22例正常肝组织中GPC3、HSP70和GS的表达情况。结果GPC3、HSP70和GS在HCC中的阳性表达率明显高于H．DN中的表达率（P〈0．05）。任何两个标志物的联合应用可提高高分化HCC的检出率，其中以GPC3和GS的联合应用最能提高诊断的敏感性和特异性，3个标志物联合应用时，检出率可达89．5％。结论GPC3、HSP70和GS3个标志物联合应用可进一步提高HCC诊断的可靠性。

铁皮石斛HSP70基因的克隆及冷胁迫表达分析

目的:揭示铁皮石斛热激蛋白HSP70基因冷胁迫表达,为耐低温品系选育提供分子生物学基础。方法:根据已获得的HSP70基因片段序列,采用RACE方法从铁皮石斛中克隆到HSP70基因全长cDNA序列。预测其编码蛋白的结构与功能,并运用实时定量PCR进行冷胁迫下表达分析。结果:核苷酸序列分析表明该基因全长2 296 bp,包含一完整的1 944 bp的开放阅读框,编码647个氨基酸。氨基酸序列具有典型的HSP70特征并且与其他植物的HSP70有很高的同源性。冷胁迫表达分析说明该基因确实能被低温诱导表达。结论:首次克隆获得受低温诱导表达的铁皮石斛HSP70基因,为进一步研究铁皮石斛健康栽培与抗寒品系的选育奠定基础。

地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾Toll和HSP70基因表达的影响

目的分析地衣芽孢杆菌对凡纳滨对虾Toll和HSP70基因表达的影响。方法根据芽孢杆菌的使用量设置测试1组(LDG,用菌量2.0×103CFU/mL),测试2组(HDG,用菌量1.0×104CFU/mL)及未使用芽孢杆菌的对照组(CG),每7 d施菌1次,实验持续24 d。每6 d取样对虾肌肉和肝胰腺检测Toll基因和HSP70基因的mRNA相对表达量。结果对虾肝胰腺Toll基因mRNA表达量在LDG组和HDG组分别较CG组提高了410.05%和78.31%,但在肌肉中CG组的表达量则分别较LDG组和HDG组提高了31.81%和8.43%。可见,芽孢杆菌在一定程度上可提高Toll基因mRNA在对虾肝胰腺的表达,但对其在肌肉中的表达则呈一定的限制作用。在肝胰腺HSP70基因的mRNA表达量,HDG组显著高于CG组和LDG组(P<0.05),CG组和LDG组的差异无统计学意义(P>0.05);在肌肉中LDG组和HDG组的HSP70基因mRNA表达分别较CG组提高了26.07%和26.46%,但实验组的组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在水体中施用芽孢杆菌104CFU/mL和2.0×103CFU/mL可分别提高对虾肝胰腺和肌肉HSP70基因的mRNA表达量。

温度、盐度对马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量的联合效应

采用中心复合设计和响应曲面分析法,在实验室条件下研究了温度(16～40℃)、盐度(10～50)对马氏珠母贝鳃热休克蛋白Hsp70基因表达量的联合效应.设定温度范围为16～40℃,盐度范围为10～50.结果表明:温度的一次效应、二次效应对马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量影响显著;盐度的一次效应对马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量无显著影响、二次效应对马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量影响显著,温度、盐度之间的互作效应对马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量无显著影响,且温度的效应大于盐度.建立了马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量模型方程,决定系数98.7%、矫正决定系数97.4%,预测决定系数89.2%,模型的拟合度极高,可用于预测马氏珠母贝鳃Hsp70基因的表达量.通过对模型方程优化,得到在温度26.78℃、盐度29.33时,马氏珠母贝鳃Hsp70基因表达量达到最小值0.5276,满意度达到98%.试验结果可为马氏珠母贝鳃Hsp70基因的上调表达、维持细胞内环境稳定以及提高马氏珠母贝抗逆性提供理论指导.